孟宪民基金会首届学术讨论会暨第十二届全国普外基础与临床进展学术大会普外进展论坛同作用的。S L N 定位和检测技术证实原发病灶肿瘤细胞顺序通过毛细淋巴管和淋巴干转移到 区域淋巴结。N 舭s o n 最新研究涉及肿瘤内部和肿瘤周围胞外基质的组织间液压力的测定，进而研究淋巴流和肿瘤微环境及微循环。已经确定淋巴管内皮细胞特异标记物，如：血管内皮生长因子V E G F c 和V E G F - D 。二者结合淋巴管内皮细胞V E G F 受体，诱导新生毛细淋巴管增殖和生长。淋巴管生成很可能是结直肠癌淋巴转移的必要步骤。以S L N 定位和检测作为研究结直肠癌淋巴转移机制的途径，结合病理生理学，分子生物学，免疫学等研究淋巴管生成抑制剂，从而抑制肿瘤细胞淋巴转移，为结直肠癌的治疗提供一种新途径。综上所述，尽管欧美国家有些医院目前已将结直肠癌S I N 检测的结果应用于临床，但在全球范围内的多数医院这一技术仍处于研究阶段。结直肠癌S L N 定位和检测仍存在许多问题：具体操作方法没有标准化( 体内法和戚体外法；粘膜下或浆膜下注射染色剂) ；多中心研究的病例数量和所选结直肠癌不同分期所占比例明显不同；S E N 检测的数量由医生主观决定，从1 到最初4 个淋巴结不等；S L N 假阴性率从0 4 5 等等。对结直肠癌S I N 检测的准确性、可靠性仍在继续进行多中心的前瞻性研究，进行大样本的随访资料分析，以取得共识。S L N 定位和检测技术作为近年来结直肠癌外科治疗领域中的热点，肿瘤淋巴转移正在成为主要的预后因素，对结直肠癌的诊治具有重要的指导意义。同源盒基因与大肠癌口，吉林大学中日联谊医院基本外科赵吉生房学东同源盒基因广泛存在于原核、真核生物、动物、植物和人，具有高度保守性，在细胞功能上具有关键作用。因此，同源盒基因在肿瘤中的分子机制是研究的一大热点。结合近几年文献，就同源盒基因在肿瘤发生中可能的分子机制和常用的分子生物学研究方法作一回顾。一、同源盒基因简介同源盒基因是一族含有共同的1 8 3 个核苷酸序列，即同源盒( H o m e o b o x ) 的调节基因，所编码的同源盒蛋白用作转录因子。1 9 M 年M c G i n n i s 等首先发现了同源盒序列，同源盒序列自身编码一种6 1 个氨基酸的同源功能区域，形成螺旋，转角一螺旋的结构，作为识别和结合一2 0 4 盂宪民基金会首届学术讨论会暨第十二届全国普外基础与临床进展学术大会普外进展论坛序列特异的D N A 单元域。同源盒基因在生物进化中具有高度的保守性，对下游的靶基因具有调节作用，L 七们s 认为同源盒基因是生物发育分化的主控基因，对D N A 合成的转录过程起调控作用。根据基因在染色体上的分布、序列的同源性及同源盒蛋白结构式样的不同，同源盒基因分为不同的类型。哺乳动物的同源盒基因中有一类成簇排列在染色体上并按前后轴( A - P )的方式表达，称I 类同源盒基因( A - P 型) ；另一类散布在不同染色体上，称为非I 类同源盒基因( 非A - P 型) 。最令人感兴趣的是哺乳纲的I 类同源盒基因，也称为H O X 基因，在结构和功能上与果蝇同形异位复合体( H O M c ) 同源。在人类H O X 基因至少有3 9 个，分为A 、B 、C 、D 四簇，分别位于不同的染色体7 p 1 5 3 、1 7 p 2 1 3 、1 2 q 1 3 3 和2 q 3 1 。每簇包含有9 1 1 个基因编排在同源的序列。非I 类同源盒基因有C D X 、P A X 、E M X 、M S X 等，还不断有新的同源盒基因被发现。二、同源盒基因在大肠癌中的表达及作用k 丽s 等因对果蝇同源盒基因在胚胎发育、细胞分化过程中起主控基因功能的研究，荣获1 9 9 5 年诺贝尔医学奖。近年来，各国关于同源盒基因与肿瘤的研究，成为抗癌研究中基因调控方面的一个热点。最先发现同源盒基因与肿瘤有关是在白血病发现的，许多研究已经表明同源盒基因在正常造血生成中起作用，并可能是致白血病突变的靶基因，例如同源盒基因的异位表达或嵌合蛋白的表达。对不同类型的白血病人的外周血研究发现，H O X 基因表达有特异的模式，在粒细胞白血病中H O X 基因协调调节，而在B 和T 淋巴细胞谱系他们以独立的方式激活，表明H O X 基因在正常和白血病的造血生成中起细胞谱系决定作用。I 类同源盒基因表达异常与肿瘤发生的相关关系，最先在白血病中被证实。据此，人们推测并已逐步证实H O X 基因突变引发的表达缺失，在多种肿瘤的发生中起明显的作用。例如在人乳腺癌中H O X A 5 低表达，在人肾癌中H O X 2 A ( H O X B 5 ) 和H O X 2 E ( H O X B 9 ) 低表达或不表达，在人小细胞肺癌中H O X B 和H O X C 下调低表达。在大肠癌与同源盒基因表达方面的研究至今报道不多。对病人的手术标本研究发现，在结肠直肠癌的不同时期都有H O X B 6 、H O X B 8 、H O X C 8 和H O X C 9 过度表达。另外，细胞培养表明，在转染尾侧相关同源盒基因C D X l 和c D X 2 的人类结肠癌细胞系，细胞生长率、迁一2 0 5 盂宪民基金会首届学术讨 台会暨第十二届全国普外基础与临床进展学术大会普外进展论坛移率下降，在裸鼠皮下接种发现，细胞的致瘤性亦下降，说明两者的表达与肿瘤发生有关。最近对不同时期的各种人类结肠癌细胞系研究表明，H O X B 6 和H O X B 8 上调在肿瘤发生的早期阶段，C D X l 的下调在肿瘤发生的晚期，H O X 和C D X l 的相互失调可能与结肠直肠癌的发展有关。此外，在C d x l 抑制大鼠小肠上皮细胞系的实验中发现，C d x l 的表达明显降低细胞周期素D l 和D 2 的水平，C d x l 在肠上皮增殖调节中的一个作用是通过减少细胞周期素D t 和D 2 而作为细胞周期进程的抑制者。K a w a i 等研究报道，在大肠癌细胞系及人大肠癌组织中存在C D X 2 表达缺失，C D X 2 具有抑癌基因的功能。W a n g 等研究表明，高分化与低分化大肠癌细胞比较，H O X A 5 表达明显增高，通过诱导分化剂除莠霉素A ( H e r b i m y c i n A ) 作用后，H O X A 5 表达增高。表明，H O X A 5 不仅具有诱导凋亡作用，而且参与大肠癌细胞分化过程。这些研究都说明同源盒基因与大肠癌有关。近来研究表明，H O X 基因与微小R N A ( m i c r o R N A s ，m i R N A s ) 密切相关。Y e k t a 等研究发现，某些m i R N A s 对行使细胞信息传递功能的跨膜蛋白，在基因翻译水平上具有重要调节作用。其中，m i R 1 9 6 对H O X 基因簇中平行进化基因H O X B 8 ，H O X C 8 和H O X D 8 的遗传信息具有进化保守的互补性，m i R 一1 9 6 介导H O X B 8 表达缺失。C a l i n 等发现特异m i c r o R N A s与H O X 基因的染色体所在位点具有密切联系，m i R - 1 0 a 和m i R 1 9 6 1 位于染色体1 7 q 2 1 的H O X B 簇中间，m i R * 1 9 6 2 位于染色体1 2 q 1 3 的H O X C 簇的H O X C 9 与H O X l 0 之间等等。提示：H O X 基因与m i R N A s 相互作用，共同参与大肠癌的发生和发展过程。特异的H O X 基因与其它( 抑) 癌基因或细胞因子、细胞信号传导途径共同作用，调节肿瘤细胞的生长和分化。H O X B l 3 能够下调T C F - 4 和其应答基因c - m y e 和c ”h I l D l 的表达；H O X 基因可能代表新的核效应体基因网络，应答核仁内R a s 和S r c 下游信号传导通路。苯乙酸对同源盒基因表达的调节作用，是本研究的新发现。H O X 基因在肿瘤细胞的基因表达调控中，既是原因，又是结果，L c i 等报道H o x c 8 在基因网络调控中具有重要作用。综上所述，H O X 基因是最先在机体发育中研究的基因，发育与癌症均涉及细胞增殖和分化。近年来研究表明，肿瘤是发育、细胞周期、细胞凋亡相互作用的结果，同源盒基因异常调节导致肿瘤的发生。H O X 基因的筛选有助于深入探讨大肠癌发生和发展的分子基础，有助于为大肠癌的治疗或预防提供新的基因治疗靶点。一2 0 6