抑制P K C 依赖的M A P K 信号转导途径而发挥作用J 。聂氏在研究中药方剂脑溢安脑出血疗效机制时， 发现其对M A P K 信号转导通路起着怠性的调节作用，并认为这为中药治疗脑山血疗效机理找到了的新 的亮点”“。管氏在研究不同治疗方法对实验性肝癌的作用机理时，发现不同治法能够针对性地调节癌基 因r a s M A P K 信号转导通路上一些不同信号分子的转录水平”。本项研究发现，补脾气方药能明显升高 脾气虚证模型组大鼠脑组织的细胞浆M A P K 活性，并使其显著性高于正常水平。滋补脾阴方药可以显 著升高脾阴虚证模型组大鼠心脏组织的细胞浆M A P K 活性，并使其显著性高于正常水平。提示三种健 脾方药治疗相应证型的作用机制有所不同。李德新教授领导的课题组已往的研究表明，本实验所使用的 补脾气、温脾阳及滋脾阴方药具有很好的抗氧化能力，可以降低过氧化脂质含量提高抗氧化酶的活性。 因此本组健脾方药可能是通过M A P K 信号转导途径，来调控活性氧信号的转导，进而达到减轻脾虚证 中自由基氧化损伤的治疗效果。其具体转导路径，有待进一步研究。 参考文献( 略)益气活血通脉颗粒对动脉粥样硬化模型家兔血液流变性 及血小板c A M P c G M P 的影响 栖爱东郭永洁案曩吴中华黄琦方军上海中医药大学( 上海2 0 1 2 0 3 )严世芸教授用益气活血通脉法治疗A S ，取得了较好的临床疗效。我们已有研究表明，益气活血通 脉颗粒治疗A S 的机理可能与其降低血脂、保护血管内皮细胞、调控b F G F 的表达有关【1 】。本研究通过 建立家兔A S 模型，从血液流变性、血小板c A M P c G M P 及主动脉超微结构观察，探讨益气活血通脉颗 粒防治A S 的作用机理。 1 材料与方法 1 1 实验动物 雄性新西兰大白兔。共2 6 只，体重( 2 0 3 4 - 0 1 7 ) 妇，由上海中医药大学实验动物中心提供。 1 2 主要试剂与药品 益气活血通脉颗粒由生黄芪、桃仁、地龙、桂枝等7 味味中药组成，生药购自上海市徐汇区联合中 医门诊部。由我校中药学院药剂教研室谢树华老师采用水提醇沉方法提取有效成分制成颗粒剂。百路达 ( 银杏胶囊) 由上海信谊厂生产；卡托普利由常州制药厂生产；c A M P 、c G M P 放免药盒由我校同位素 室提供。 1 3 造模方法及动物分组 2 6 只兔随机分成正常对照组( A 组) 5 只、模型组( B 组) 5 只、百路达组( c 组) 5 只、卡托普 利组( D 组) 5 只、益气活血通脉颗粒组( E 组) 6 只，除A 组外，其余动物参照蔡海江等口】制作兔实 验性动脉硬化模型，予兔静脉注射牛血清白蛋白2 5 0 m g k g 一次，于当日喂拌于饲料中的胆固醇l g ( d 只) ，共1 2 周。 A 组喂普通饲料，B 组喂含胆固醇饲料，C 、D 、E 组分别喂含百路达、卡托普利、益气活血通脉颗 粒的胆固醇饲料。剂量按中药药理实验方法学中“人和动物间按体表面积折算等效剂量比率表”计 算，相当于6 0 k g 体重的人每日的生药量和西药量。分笼喂养，饮水不限，每日每只进食1 0 0 9 饲料。 实验1 2 周后，动物禁食6 小时，用5 戊巴比妥( 4 0 m g k g ) 麻醉，分别取兔心脏血、主动脉壁样品。 1 4 观察指标及测定方法 T C 、T G 测定：酶法 血小板的制备：取血5 m l ，用1 E D T A - N a 抗凝收集在硅化管内或塑料管内。8 0 0 转，分离心1 0 分钟， 得富血小板血浆( P R P ) 计量并作血小板计数。取上层血浆于硅化管或塑料管中，以3 0 0 0 转份，离心 l O 分钟，上清液为贫血小板血浆( P P P ) ，作血小板计数。弃去上层血浆，管底沉淀物即为血小板。用 生理盐水洗三次，每次以3 0 0 0 转份，离心1 0 分钟，去上清留沉淀。求得前后2 次血小板之差数，再根 据血小板稀释倍数及血浆量计算沉淀中血小板总量，单位为1 0 9 血小板。 血小板c A M P 、c G M P ：放射免疫法 血液流变学测定：采用旋转法，肝素抗凝血5 m l 在旋转式全自动粘度计上测定。1 5 主动脉壁透射电镜观察胸主动脉l - 2 r a m 3 小块组织，4 0 C 2 戊二醛中固定2 小时，经二钾砷酸钠缓冲液冲洗后，再固定于 l 锇酸溶液中，酒精梯度脱水，经6 1 8 环氧树脂包埋后，切片厚5 0 0 A ，经醋酸钠与枸橼酸铅双重染色， 透射电镜( H 6 0 0 型) 下观察并照像。 1 6 统计学方法全部数据采用均值标准差( x s ) 表示，两均数间比较用t 检验，多组间比较用方差分析。 2 结果 2 1 益气通脉活血剂对兔动脉粥样硬化血液流变性的影响 表1各组药物对血液流变性的影响( X s )与商脂模型组比较：+ P 00 5 * * P 00 1 与百路选组比较O P 00 5 0 0 P 00 I 与卡托昔利组比较# P 00 5 # # P 00 l 与正常组相比，模型组全血比粘度、血浆粘度水平明显升高：与模型组相比，益气活血组全血比粘 度、血浆粘度水平均明显降低：且益气活血组全血比粘度、血浆粘度水平均明显低于百路达组。详见表1 。 2 2 益气活血通脉颗粒剂对兔动脉粥样硬化血小板c A M P 、c G M P 的影响 表2各组药物对兔动脉粥样硬化血小板c A M P 、c G M P 的影响( x s ) 组别组数c A M P ( p m o l 1 0 9 血小板)c G M P ( p m o l 1 0 9 血小板)模型组55 9 5 1 5 11 5 8 02 7 百路达组58 7 3 3 5 6 +1 2 4 - - - - _ 01 1 卡托普利组59 5 7 4 - _ 1 2 3 1 1 9 - t - 01 7 益气活血组61 3 8 5 3 6 5 ”1 1 5 - - + 00 7 ”与高脂模型组比较：+ P 0 0 5 * * P O 0 1 与百路达组比较：O P O 0 5 口O P O 0 1 与卡托普利组比较：# P o 0 5 # # P 0 0 1 与正常组相比，模型组血小板c A M P 明显降低、血小板c G M P 水平明显升高；与模型组相比，益气 活血组血小板c A M P 明显升高、血小板c G M P 水平明显降低：且益气活血组血小板c A M P 水平明显高 于其他用药组。详见表2 。 2 3 透射电镜观察 正常组主动脉内皮细胞紧密连续，内皮细胞下间隙狭小，主动脉中平滑肌胞质内有少量线粒体、内 质网等细胞器，胞质内含较多肌丝、致密体。模型组内皮细胞成节段囊状细胞器，表面不规则隆起，合 成型平滑肌细胞明显增多，肌丝分布减少，内膜下见多层泡沫细胞，并见胞质内脂滴，髓样小体，基质 增多等。益气活血组病变程度病变明显减轻，内膜下泡沫层数减少，平滑肌细胞增生减轻，脂滴含量减 少，增生的平滑肌细胞胞浆内内质网、高尔基体、线粒体较少，肌丝含量较多，收缩型平滑肌细胞较多。 3 讨论 A S 属中医学“血瘀”、“痰浊”等范畴。其病机不外虚实两端，虚为心脾肝肾亏虚，脏腑功能失调， 实为气滞、痰阻、血瘀。气虚无力行血，血行不畅则血瘀。医林改错云：“元气既虚，必不能达于血 管，血管之气，必停留而瘀。”因此我们认为气虚血瘀是A S 病变的重要基础针对A s 的病机特点，我们 采用益气活血通脉的治疗原则，方中黄芪健脾补益心气。桃仁、地龙、桂枝活血通脉。全方攻补兼施， 标本兼治，共奏益气活血通脉之功。 血液流变性改变是血液的有形成分( 血小板、红细胞) 和无形成份脂蛋白、纤维蛋白原的变化。研 究表明，高血液粘度依靠其对血管壁的机械应力的增大，促进动脉粥样硬化的发生血流缓慢或停滞， 湍流的发生以及动脉分支的连续应力的增高，导致血管内皮细胞的损伤，促进血液成份向血管壁内渗入 的增强，引起动脉粥样硬化形成pJ 。 研究表明，血小板在动脉粥样硬化的发生和发展中起重要作用。1 71 9 8 5 年K r u t h 发现血小板促进培养的平滑肌细胞形成泡沫细胞【4 l 。M e n d e l s o h n 在实验中证实血小板 可供应单核巨噬细胞脂质以形成泡沫细胞【5 I 。当血管内皮损伤后，屏障作用被破坏，血小板易于在该部 位粘附和聚集，并释放各种活性因子，如A D P 、5 H T 、T X A 2 和P D G F 等，进一步损害血管内皮，同时 刺激血管壁平滑肌细胞向内膜迁移和增殖，并合成及分泌胶原、弹性纤维等各种大分子物质，使内膜增 厚、血栓形成、脂质浸润等，最终使斑块逐渐加重。血小板活性的提高与动脉粥样硬化病变的形成存在 有密切的关系，应用抗血小板药有防治动脉粥样硬化性心脑血管病的作用t ”。环核苷酸( c A M P 、e G M P ) 在调节血小板功能中有着重要作用。当c A M P 生成减少或c G M P 生成增高，则促进血小板发生聚集反应； 反之则抑制血小板发生聚集反应1 7 】。 本实验研究表明，与高脂模型组相比，益气活血通脉颗粒治疗后血浆比粘度、血浆粘度、血小板c G M P 明显降低( P 0 0 1 ) ，血小板c A M P 升高( P o 0 1 ) ，动脉粥样硬化病变程度减轻。提示益气活血通脉颗 粒治疗A S 的机理可能与其改善血液流变性及调节血小板c A M P I c G M P 平衡有关。【基金项目：上海市 卫生局资助项目( N O ：9 8 A 1 0 6 ) 】 参考文献( 略)阳虚血瘀证凝血机制异常动物模型的实验研究 包蠢玲郑小伟浙江中医学院( 杭州3 1 0 0 5 3 )近几年来国内外有关凝血机制的研究已取得了可喜的成就，但是用动物模型来研究阳虚血瘀证的凝 血机制，迄今未见报道。 祖国医学认为，阳气具有温煦脏腑组织及温运血脉的功能，所阻说阳气是保证血液正常运行的重要 条件之一。阳气虚衰则脉道拘急，血行不利，甚则寒凝血瘀，故本实验在中医理论指导下，运用现代科 学技术手段，用大鼠、家兔制作了阳虚血瘀的凝血机制异常模型。 1 实验材料 1 1 动物s D 大鼠6 2 只，雄性，体重1 8 0 2 5 0 9 。新西兰兔1 0 只，雄性，体重2 2 5 k g 。实验动物由浙江省 实验动物中心提供。 1 2 主要药品 1 2 5 亚硫酸钠溶液，双缩脲试剂，定值质控血清( 总蛋白6 2 9 9 D L ，双缩脲法) ，白陶土部分凝血 活酶试剂，O 0 2 5 M l a d 2 溶液，兔脑粉浸出液，凝血酶溶液，1 鱼精蛋白溶液( P H 6 2 5 ) ，3 8 枸橼酸钠 液等。 1 3 其它 犬鼠固定板，兔固定盒，瓷盘，铁网罩，实验中各种用具及试管，室温2 0 2 5 。 2 实验方法 2 1 大鼠实验 取6 2 只大白鼠称量体重，编号。随机分为实验组和对照组各3 1 只。 对照组用3 戊巴比妥钠液，按每千克体重l m l 由腹腔注射麻醉。然后将大鼠背位固定在木板上， 由心脏采血，用3 8 枸橼酸钠液抗凝( 与血比例为1 ：7 ) 。立即以每分钟3 0 0 0 转，离心1 0 m i n ，分出 血浆。进行凝血象检查。检查方法按常规进行，其指标包括白陶土部分凝血活酶时间( K P T T ) ；凝血酶 原时间( P T ) ；凝血酶时间( T 1 ) ；纤维蛋白原( F b g ，采用双缩脲法测定) ；血浆鱼精蛋白副凝固试验 ( 3 P ) ：血小板计数( B P C ) 等。记录实验结果，见表1 。 实验组大鼠则置于罩有铁网罩的瓷盘上，放入低温冰箱里，在零下1 s 的环境中，持续受冻“左 右，待大鼠出现寒战