Waters e2695 型高效液相色谱仪操作规程型高效液相色谱仪操作规程目的：目的：建立 Waters e2695 高效液相色谱仪标准操作规程，为了使操作者操作高效液相色谱仪更规范，保证实验结果更精确。范围：范围：适用于 Waters e2695 高效液相色谱仪操作和维护保养。职责职责: 本规程由仪器使用员负责实施，分析室主任负责监督。1 开机前的准备工作开机前的准备工作1.1 检查设备电源、流路、信号连接是否完好。1.2 流动相：配制相应的流动相，经 0.22m 微孔滤膜抽真空过滤后，并超声脱气 5 分钟，必须使用色谱纯的溶剂，水或缓冲盐溶液要用超纯水；盛放溶液和流动相所用的玻璃容器必须用超纯水清洗。1.3 样品溶液：按方法取样或配制标准样品溶液。2 仪器的组成及开机平衡系统仪器的组成及开机平衡系统2.1 仪器组成。本仪器由 waters e2695 分离单元、2489 紫外可见光检测器、Empower 色谱工作站和打印机组成。2695 分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱气机，可容纳 120 个样品瓶的自动进样系统，柱温箱，内置的柱塞密封垫清洗系统，溶剂托盘，液晶显示器，键盘用户界面及软盘驱动器。2.2 开机。先打开电脑，依次接通 2695 分离单元、检测器、计算机和打印机的电源。接通 2695 分离单元后，约 20s 仪器开始自检，约 4min 后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化，待主屏幕上方标题区出现“ Idle ”时，仪器进入待命状态。2.3 脱气（Degasssger）。按面板右下方“Menu/Status”键进入“Status（1）”界面，移动光标至“Degasser Mode”，按 Enter 选择“On”，打开在线脱气。一般默认是开的。2.4 设定柱温。在“Status”界面，光标至“Col Htr Set”，输入目标温度，按Enter。（可在工作站方法中设置）2.5 灌注柱塞密封清洗泵（Prime Seal Wash）。在主屏幕下，按“Diag”，显示“Diagnosties”屏幕，按“Prime Seal Wash”,显示“Prime Seal Wash”屏幕，按“Start”,直到清洗溶剂流出泵杆密封圈冲洗废液管，依次按“Halt”、“Close”、“Exit”。2.6 灌洗针头清洗泵（Prime Needle Wash）。在主屏幕下，按“Diag”，显示“Diagnosties”屏幕，按“Prime Ndl Wash”,显示“Prime Needle Wash”屏幕，按“Start”,30s 内应见溶剂从废液排放口流出，按“Close”、“Exit”；若想要多清洗几次时，请按 “Start Again”。2.7 湿灌注（Wet Prime）。在“Status(1)”界面中“Composition”下，选择将用到的溶剂通道为“100%”，按液晶屏幕右下角“Direct Function”键，移动光标选择“Wet Prime”，“OK”，流速及时间可使用默认值，也可自行设定（如：5ml/min，3min），“OK”即可。将每一个会用到的溶剂通道按照上述操作一次。（也可各通道选 25% 5ml/min，3min）。2.8 冲洗进样器（Purge Injector）。按“Menu/Status”进入“Staus(1)”画面，在设定溶剂画面中设定适当的流速与溶剂比例（针对缓冲盐或离子对试验，建议设定 50%乙腈：50%水的溶剂来清洗进样器），按“Direct Function”键，选择“Purge Injector”，“OK”，默认数值为 6，“OK”。注：以上 2.5-2.8 为溶剂系统前处理过程，建议每天开机后依次进行。若发现注射器中有气泡，则可重复 2.8 直至排除。2.9 平衡柱子。在“Status”界面上，按流动相比例设定各通道溶剂比例后，再Wet Prime 操作一次，然后设置流速，平衡色谱柱 30-60min。（可在工作站中设置）。3 编辑新项目编辑新项目3.1 打开电脑后，双击桌面上的 Empower，输入用户名 user、密码不填 ，单击“确定”。3.2 选择待选定的操作项目以及对应的色谱系统（仅查看数据可选择色谱系统中的“没有系统”），单击“确定”。3.3 进入 Empower 软件 Quickstart 界面，在菜单栏中单击“管理” ，选择“创建新项目”打开。3.4 出现“新建项目向导-新建父项目”画面，选择新建项目的父项目，单击“下一步” 。3.5 出现“新建项目向导-表空间”画面，在“表空间”中填写项目所需的空间，缺省值为 50MB，可根据需要增减， “支持全面审计追踪 ” 方框中为空，其它接受缺省选项，单击“下一步” 。3.6 出现“新建项目向导-选项”画面，选择用于本项目的选项，如果无法确定适当的设置，请接受缺省选项。单击“下一步”。3.7 出现“新建项目向导-访问控制”画面，在“允许访问”下选择“仅所有者” ， 单击“下一步” 。3.8 出现“新建项目向导-复制所选项”画面，如果现有项目包含要复制到此新项目的自定义元素（如视图筛选器、自定义字段或方法设置等），可选中适当的复选框，然后在“从项目”列表中选择现有项目的名称，以导入所需的自定义元素。如果无法确定适当的设置，请接受缺省值。单击“下一步”。3.9 出现“新建项目向导-输入名称”画面，在其中输入“项目名” “项目注释” ，然后单击“完成”结束新建项目向导。4 编辑仪器方法和方法组编辑仪器方法和方法组4.1 打开电脑后，双击桌面上的 Empower，输入用户名 user、密码不填 ，选择“运行样品”。4.2 新建仪器方法：进入“运行样品”后，选择“创建方法组”调用方法组编辑向导。出现“新方法组选择仪器方法”，单击“新建”来创建新的仪器方法，此时出现“仪器方法编辑器”界面，按相关的要求填写各参数，根据需要编辑不同的方法，编辑完毕后单击“文件”， “另存为”后出现“保存仪器方法”对话框，输入方法名称，单击“保存”。4.3 新建方法组：在仪器方法建好之后，继续“新方法组选择仪器方法”，选择所需的仪器方法名称，点击“下一步”，出现“选择缺省方法” ，接受缺省设置，点击“下一步”， 出现“命名方法组” ，输入方法组名（与仪器方法名一致） ，点击“完成”即完成方法组的建立。5 进样进样5.1 在下面的 “仪器方法”里选择需要仪器方法并点击“监视器”平衡系统，观察基线。待系统平衡后，点击“中断样品组”开关，终止观察基线。5.2 当进行单进样时，在“运行样品”的“单进样”界面中输入“样品名”“功能”“方法组”“进样体积”“运行时间”等；然后点击“单进样”图标，或选择上方的“进样”，再选择“进样”，这样就开始了单次进样。单次进样完成分析后系统即停止检测（流动相正常流动）。5.3 当多进样时，在“运行样品”的“样品”界面点击“样品瓶”输入所有样品分别所在位置（输入所在编号），接着分别设定“样品名称”、“进样体积”、“进样数”、“功能”等采集参数，在“方法组”中选择需要的方法组，在“运行时间”中设定相关的时间。5.4 开启绿色“运行”或点击“进样”，在选择“运行样品组”，输入样品组名称，运行模式（只运行），适应性模式（出错时继续），点击运行。5.5 一旦开始运行样品组，画面将自动切换到“正在运行”窗口。5.6 如果有另外一组样品需要运行的话，也可返回“样品”表单继续编辑新的一组样品，随后单击“运行”，即可在此样品组结束后继续运行新的一组。5.7 如需修改正在运行样品的测试样品，在“运行样品”的“正在运行”界面，点击“编辑”菜单中“改变当前运行样品的信息”，点击确定，修改样品以后，须重新点击“运行”。6 数据的处理数据的处理6.1 利用处理方法向导建立处理方法利用处理方法向导建立处理方法6.1.1 单击 Empower 软件 Quickstart 界面中的“浏览项目”进入数据浏览画面，开始查找数据。6.1.2 选择“通道”，进入通道画面。选择需处理的数据，选择菜单“工具-查看”打开。6.1.3 出现“查看-主窗口”，单击菜单“文件-新建-处理方法”，出现新建处理方法对话框,在“处理类型”选择“LC”， “积分算法”选择“传统”，在“使用处理方法向导”前面打勾，然后点击“确定”。6.1.4 出现“积分-峰检测 1”画面，设定峰宽或者接受缺省值，单击“下一步”。6.1.5 在“积分-峰检测 2”画面，设定积分阀值或者接受缺省值，单击“下一步”。6.1.6 在“积分-积分区域”中，直接输入保留时间或者用鼠标左键拖拽放大选定积分区域，单击“下一步”。6.1.7 在“积分峰剔除”中，根据需要设定最小面积或最小高度，或者不作任何改变，单击“下一步”。6.1.8 在“校正-普通”页中，除有特定要求外，接受缺省选项，单击“下一步”,出现对话框，选择“否”。6.1.9 在“校正-名称和保留时间”页中，在 “名称”栏中，输入组分的名称，或不作改动，单击“下一步”。6.1.10 在“校正-缺省量”页中， “含量”和“单位”栏不填，单击“下一步”。6.1.11 在“校正-内表样”页中，接受缺省选项（外标校正） ，单击“下一步”。6.1.12 出现处理方法名对话框，在“在处理方法名”中输入方法名，然后单击“完成”结束处理方法向导。6.1.13 再次出现主窗口，下部的“峰”表中出现积分结果，并在状态条中显示新处理方法名称。然后打开菜单“文件-保存-全部”，进行保存，最后关闭窗口。6.1.14 回到“浏览项目”里面，选择“方法”，然后“更新”，刚建立的处理方法就出现在里面。6.2 直接建立处理方法直接建立处理方法6.2.1 单击 Empower 软件 Quickstart 界面中的“浏览项目”。6.2.2 选择“文件-新建方法-处理方法”，进入“新处理方法”对话框，在“处理类型”选择“LC”， “积分算法”选择“传统”，单击“确定”。6.2.3 进入“处理方法编辑器-LC 处理方法”窗口，分别在“积分”、 “平滑/偏移”、 “组分”、 “峰比率”、 “缺省含量”、 “命名组”、 “定时组”、 “适应性”、 “限制”、 “噪音与漂移”根据图谱处理需要设定相关的参数。6.2.4 相关的参数设定后，选择“文件-另存为”，在“保存当前的处理方法”的对话框里输入此处理方法的名称，单击“保存”。6.2.5 回到“浏览项目”里面，选择“方法”，然后“更新”，刚建立的处理方法就出现在里面。6.3 定量计算定量计算6.3.1 回到“通道”选项卡，选中要处理的样品，然后单击“处理”。6.3.2 出现“后台处理报告”对话框，在“处理”中，选“使用指定的处理方法”，并在下拉菜单中选择建立的处理方法。在“清除校正”方框中打勾，并使“打印”和“导出”方框中为空，单击“确定”。6.3.3 回到“结果”选项卡，单击“更新”键更新结果。双击即可浏览色谱图和“峰”结果，查看计算的“含量”结果。7 数据报告的打印数据报告的打印7.1 单击 Empower 软件 Quickstart 界面中的“浏览项目”，选择所要打印数据所在的项目后，单击“确定”，进入项目浏览画面。7.2 在“结果”选项卡中选择欲打印的结果，选择菜单“工具-预览/出版”。7.3 出现“打开报告方法”对话框，在“使用以下的报告方法”下拉菜单中选择“缺省单个报告”，然后单击“确定”。7.4 在屏幕上即出现报告预览窗口，如预览后无误，选择菜单“文件-打印”或单击打印的图标，打印报告。8 关机关机8.1 使用完毕后，按规定用适当的溶剂冲洗色谱柱、系统管路、自动进样器、进样针和柱塞杆密封垫。8.2 确保 2695 分离单元已彻底冲洗干净后，关闭电源开关，关闭计算机及显示器电源。填写使用及维修保养记录。9 仪器设备的维护和保养仪器设备的维护和保养9.1 色谱柱日常维护9.1.1 长期不使用 HP