0新型猪瘟疫苗发展前景新型猪瘟疫苗发展前景摘要摘要:猪瘟(slassical swine fever ，CFS)以出血和发热为主要特征，呈急性或慢性经过，是一种对猪危害性极大的传染病，被国际兽疫局(Office of International des Epizooties，OIE)列为 A 类动物传染病。在世界许多国家和地区，由于各方面的原因，猪只传统疫苗的应用在市场中占有很大比例，是控制猪瘟的重要手段，目前使用的弱毒疫苗主要是中国猪瘟兔化弱毒疫苗、日本 GPE 疫苗和法国 的 Thireval 疫苗。猪瘟疫苗在未来具有良好的开发应用前景。关键词：关键词：猪瘟 疫苗 传染病 发展前景 应用 管理 生物制品我国猪瘟疫苗的发展十分迅速，我国自主研发的猪瘟兔化弱毒疫苗性能稳定、安全、免疫效果好，且无残留能力，是国际公认的唯一安全有效的弱毒疫苗，亦是国内唯一应用的弱毒疫苗。在目前阶段，针对我国的现状，使用传统的方法加强疫苗的管理，更进一步研究免疫原性好的制苗菌(毒)株，改进生产工艺及自动控制培养抗原的方法，提高细胞培养技术，提高传统疫苗质量，仍是疫苗研究的一个重要方向。 现代分子生物学、遗传学和免疫学的飞速发展，基因工程实验技术的广泛应用，为猪用疫苗的研究和开发创造了得天独厚的条件，目前在很多领域内已经取得了良好的进展成果，这一切都为猪瘟疫苗的进一步研发和应用打下了坚实的基础，生产实用的新一代疫苗的可能性也已大大得到增加。猪瘟疫苗的开发应用前景自是不必多说，利用现有技术，对猪瘟疫苗的开发已变得不再是难事，以下就具体谈谈未来猪瘟疫苗的开发应用情况。 一、开发新型猪瘟疫苗的分子生物学基础一、开发新型猪瘟疫苗的分子生物学基础CSFV 是一种小（40-60nm）的有囊膜病毒，含有单股正链 RNA 基因组。CSFV 基因组长约 12.5kb，由一个大的开放性阅读框架（openreadingframe，ORF）和两侧的 5-端非翻译区（5-UTR）和 3-端非翻译区（3-UTR）构成。编码蛋白顺序为 Npro、C、Erns（E0）、E1、E2、P7、NS2-3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B。NS2-3 可被加工成 NS2、NS3（P80）。除 C、Erns、E1 和 E2 为结构蛋白外，其余均为非结构蛋白。在结构蛋白中，最具有免疫防治研究价值的是 Erns 和E2。1Erns 由 227 个氨基酸残基构成，分子量约为 44-48ku，可诱导产生中和谱很窄的中和抗体。Erns 没有疏水的膜锚定结构，为可分泌蛋白。它在由细胞以出芽或胞吐方式分泌的病毒颗粒囊膜上并不稳定，在细胞培养 CSFV 的上清液中含有少量的病毒粒子，但却含有大量被分泌出的 Erns。Erns 不仅是一种结构蛋白，而且也是一种功能性蛋白，它与 CSFV 对宿主细胞的嗜性以及致病力有密切关系。Erns 有 RNase 活性，可降解病毒和细胞的 RNA。Erns 可导致免疫抑制，引起动物的淋巴和上皮细胞刁亡。CSFV 的宿主嗜性也与 Erns 有关，用 Erns 中和单抗可有效阻断 CSFV 对易感动物细胞的感染。Erns 还表现出神经细胞毒性和抗凝集活性，CSFV 感染动物后所产生的 Erns 蛋白在致病过程中起重要作用。E2 的分子量约为 53-55ku。E2 参与病毒对细胞的感染过程，携带有能刺激机体产生保护性免疫的抗原决定簇，起编码的 gp55 蛋白是猪瘟的主要保护性抗原。靠近 C 端的疏水区为 gp55 的膜锚定结构（TMR），从 856 位半胱氨酸（Cys）后的第 6 个氨基酸至 C 端 TMR 之间形成有弹性的 螺旋结构，没有抗原决定簇。从 N 端 693 位至 856 位 Cys 之间形成富含抗原决定簇的 2 个抗原结构域，这 2 个结构域由位于 737 和 792 位 Cys 之间的一段片 片层结构隔开。693 和 737 位 Cys 形成二硫键并组成一个序列非保守性抗原结构域，具有中和性的 B、C 抗原区位于该结构域中，另一个结构域属序列保守性，由 792 和 856位 Cys 形成的二硫键组成，包含中和抗原区 A 和非中和抗原区 D，而 A 和 D 区由其间的一个疏水区和 818 位、828 位 Cys 形成的二硫键分开。在 A、B、C3 个中和区中，各有一段与中和性密切相关的高频突变序列或位点。这些序列或位点的突变株将逃脱中和性单抗的中和作用，免疫血清对对这类突变株的中和作用也会降低。全长感染性 cDNA 克隆技术使笔者得到了纯粹的 CSFV 基因组。这一成果为进一步研究 CSFV 的复制机理、毒力及其决定因素、致弱机理、致病机理、基因产物的功能、特异性诊断、宿主嗜性以及 DNA 疫苗和标记疫苗的开发等，打下了坚实的基础。目前为止，已经成功构建了 CSFVC-株、Brescia-株和Alfort/187-株等全长感染性 cDNA。二、猪瘟疫苗开发应用类型二、猪瘟疫苗开发应用类型载体疫苗载体疫苗 利用分子生物学遗传工程技术可以更有目的地获得稳定而无致病性的细菌和病毒，以疱疹病毒胸苷激酶缺失()变异株，以次变异株制备的疫苗易2于和现场毒株相鉴别，将极大地有助于疾病的诊断和扑灭，利用该技术也能在各种载体系统中插入种种保护性抗原基因，经修饰的载体微生物能表达编码致病性微生物保护性抗原的外源性基因，无论细菌性或病毒性载体，均有可能产生同时具有活疫苗和死疫苗的优点，同时也具有亚单位疫苗的安全性和活疫苗的有效性等优点。 基因工程生组疫苗基因工程生组疫苗 将具有免疫原性抗原决定簇的基因编码片段，插入到细菌、酵母、昆虫细胞以及能连续传代的哺乳动物的细胞基因组内，以基因工程技术生产大量抗原，并以此制备只含有免疫原性的纯化疫苗。在兽用疫苗方面第一个商品化的基因工程亚单位疫苗是预防仔猪腹泻的大肠杆菌菌毛、疫苗，并有口蹄疫亚单位疫苗的研究报道。此外，在体外表达编码可用作亚单位的蛋白抗体基因也是可能的，也可通过改善其基因表达系统和蛋白质分离提纯技术来增加对其应用的可能性。 核酸疫苗核酸疫苗 疫苗技术的应用已有颇多报道，具有很大的研究价值，由编码某病原性蛋白抗原的基因及其真核重组表达载体质粒组成，经肌肉注射等方法将之导入动物细胞内，由宿主细胞表达目的抗原蛋白，从而诱发机体的体液和细胞免疫反应，达到防治疾病的目的。核酸疫苗是上世纪年代初才发展起来的一项新的生物学技术，是个令人鼓舞和具有很大潜力的研究领域，具有广阔的前景。 合成多肽疫苗合成多肽疫苗 利用现有的技术已有可能以化学的方法人工合成具有免疫原性的多肽，并用作预防某些病毒感染的疫苗(合成多肽疫苗)。 基因缺失疫苗基因缺失疫苗 在或水平上让与病原致病有关的基因缺失，使缺损病毒株难以自发地恢复成强毒株，能正常增殖和复制，并具有良好的免疫原性，这是发展活疫苗的理想途径。目前以这种方式研制的猪伪狂犬基因缺失疫苗(和缺失)已成功地投放到市场，切除肠毒性大肠杆菌基因亚基因，而将亚基因克隆到带粘着素菌毛(、等)的大肠杆菌中，制成活疫苗，已证实对仔猪黄痢有良好的免疫效果。 3抗独特型疫苗抗独特型疫苗 含有直接抗自然抗体的抗原结合位点的种种抗体，即抗抗体。这种抗独特型抗体成为原抗原的一种影像，因此当以注射的方法将此疫苗接种动物体后，能诱发针对抗原的免疫反应。 转基因植物生产疫苗利用转基因植物技术生产疫苗的新技术。植物病毒粒子的结构非常稳定，可在天然宿主中积聚到很高浓度，这些病毒可用作载体插入所需外源抗原表位的编码基因，表达外源基因蛋白，并将此性状传给子代，成为表达生产疫苗的植物新品系，并通过对它的大面积播种、收获，达到生产疫苗的目的。目前研制的转基因植物疫苗中，以产毒性大肠杆菌疫苗最为成功，另外狂犬病病毒糖蛋白(蛋白)基因、口蹄疫病毒()基因、猪传染性胃肠炎病毒糖蛋白 ()基因等也正在用作疫苗的研制，也取得一定的成绩，具有广阔的生产前景。 三、加强生物制品宏观管理三、加强生物制品宏观管理 为了不断研发出好的疫苗和使未来我国的疫苗乃至生物制品行业得到良好的发展，国家有关部门要十分重视兽用生物制品的质量,坚决执行兽用生物制品规程相关条例。在重视提高兽用生物制品质量标准的同时,不断改进生物制品的生产工艺要求。众所周知,高质量的产品是生产出来的,而不是检验出来的,兽用生物制品的生产环节直接关系到产品的质量。生产用原材料的质量是生产合格优质产品的前提条件,而检验用原材料的质量是进行兽用生物制品质量公正性评价的基础,是获得准确、可靠、有效检测数据的基本保证。因此,只有把严格控制兽用生物制品生产与检验用原材料作为未来兽用生物制品发展的基础工作,在规范相关管理规定的同时,积极推动检测方法标准化的进程,建立健全质量监督机制并实施有效监督,才能使我国兽用生物制品的质量从根本上得到改善与提高。综上所述，疫苗免疫是预防猪病的最强有力的工具，在猪瘟疫苗的开发和应用的研究不断发展和深化的今天，猪瘟疫苗未来发展趋势大好，但当前热点主要集中在重组疫苗和生物工程疫苗等方面，并且遗传工程和生物学佐剂在疫苗工艺中也起着非常重要的作用，加强猪病疫苗的开发也将为养猪生产作出重大的贡献。猪瘟兔化弱毒疫苗的研制成功,为我国及世界其他国家扑灭或控制猪4瘟流行做出了巨大贡献，在猪瘟疫苗的未来发展过程中，我们要秉承以往的科研精神，发扬甘愿为科学研究埋头苦干的精神，为我国乃至世界的生物制品发展不断做出巨大的贡献。参考文献：参考文献：1 梁圣译. 中国兽医生物制品发展简史概述J. 畜牧兽医科技信息, 2001,(07)2 陈少渠, 冯小霞, 郭建军. 浅谈我国兽医生物制品的发展现状和前景J. 河南畜牧兽医, 2005,(12)3 张存帅,李玉和,靳彦华,吴思捷. 我国兽用生物制品发展状况与策略J.中国兽药杂志, 2004,(01) .4赵启祖,谢庆阁.抗猪瘟基因工程研究J.兰州大学学报(自然科学版),1994,30(增刊)169170.5 刘湘涛,赵启祖,李忠润,等.猪瘟病毒和猪瘟的防制A.谢庆阁,瞿中和.畜禽重大疫病免疫防制研究进展M.6 刘湘涛,韩雪清,赵启祖,等.猪瘟强毒、疫苗毒和流行毒 E0(gp44)基因的差异分析A.