生物化学实验指导生物化学实验指导（供临床医学、口腔医学、护理学等本科专业使用）（供临床医学、口腔医学、护理学等本科专业使用）遵遵义义医学院生物化学教研室医学院生物化学教研室二二 0 0 七年七月七年七月前前 言言生物化学实验教学以学生在实验室实践为主,发挥学生的主体作用，教师只做必要的实验原理和注意事项的讲解，并注意引导学生拓展所学的内容，通过实验内容的学习，了解生物化学技术的原理和操作要点，提高学生的实践能力和创新能力，培养学生动手能力和解决实际问题的能力。该实验指导是配合十五国家级和卫生部规划教材生物化学 （第六版）理论课的教学而编写的。我们在 2005 年再版的基础上，重新修订了实验内容，删除了测定血糖浓度的陈旧方法即 Follin-吴宪法，选取与临床紧密联系的葡萄糖氧化酶法，使之能更好地满足我院各层次学生的需要。本实验指导适用于临床医学、口腔医学、医学检验、妇产科学、麻醉学、医学影像学、药品检验、药物制剂、急救医学、临床心理学、医学美容、法医学等专业（方向）学生使用以及有关医学科研工作者参考。生物化学教研室全体同志参与了本书的编写和修订工作，但由于时间仓促，错误在所难免，恳请批评指正。遵义医学院生物化学教研室2007 年 7 月生物化学实验须知(Genera1 introductions)一、实验目的一、实验目的1培养学生严谨的科学作风，独立工作能力及科学的思维方法。2学习基础的生物化学实验方法，为今后的学习与研究准备更好的条件。3培养学生爱护国家财物、爱护集体、团结互助的优良道德品质。4培养学生的书面及口头表达能力。二、实验的总要求二、实验的总要求1按教研室予先公布的实验进度表，了解各次实验的具体内容，并认真做好预习。弄清各步骤的意义，避免教条或机械式做实验。2进行实验不仅要求结果良好，而且要求敏捷高效。为达到此目的，实验者应注意：一切步骤都按正规操作法进行；样品与试剂勿过量取用；宜粗者勿细（例如粗天平称量物品即足够准确时，不用分析天平，用量筒取液足够准确时，不用吸量管） ；试剂、仪器防止污染及破损，保持实验环境的整洁。注意力集中，避免差错。3实验中观察要仔细，记录要详尽、及时与客观，不得于实验后追记，应直接记在实验报告本中，而且无论实验成功与失败，都应记下。对于失败的实验，要分析其原因。4实验室是集体学习与工作的场所，实验时应保持肃静，不得大声喧哗，以免影响他人的工作与思考。对师长尊敬，对同学要团结友爱。实验后应清洗整理用过的仪器及清理自己的实验场所。三、实验报告三、实验报告实验报告的书写是培养学生书面表达能力和科学作风的重要手段之一，实验者应该重视。实验报告的内容包括下列各项：实验名称、实验日期、实验目的、实验原理、实验步骤、实验记录、计算（定量测定、解释） 、讨论或小结。实验记录除应包括“实验总要求”的第 3 项要求外，还应包括原始记录。原始记录是随做随记的第一手记录，应由指导教师签字认可。书写实验报告要字迹工整，语句通顺。书写工整的实验报告，是尊师的重要表现之一。四、组织与分组四、组织与分组1每一实验室推选学生课代表一名，负责下列工作：实验报告的收集与分发；安排清扫值日名单；反映同学学习情况及对教学工作的意见；其它临时性的工作。2一般实验都为每个学生单独进行。有的实验要两人一组，由相邻两学生组成固定小组。小组的成员在指导教师的同意下，可作适当的调整。五、仪器五、仪器1每次实验前，实验者应根据黑板上公布本实验使用的玻璃器皿种类与数目，检查分发在实验桌上的各种玻璃器皿，如有缺损应于清洗前立即向准备室负责老师补换。实验中如有破损，则必须登记，按学院规定处理。实验后应将玻璃器皿洗涤清洁，完整点交管理人员。2公用仪器（包拈贵重仪器，如分光光度计、电动离心机等）使用时时间不宜过长，以免妨碍他人工作。设有使用登记薄的仪器，使用后必须登记，以示负责。对于不熟悉仪器，切勿随意乱动应请教师指导。六、试剂六、试剂1每 23 人合用一份试剂，在一般情况下，使用的试剂应该固定。2取试剂瓶塞与量取用具（如吸管或滴管）不应与试剂瓶分开放置，用后应立即放回原处，量取用具应按规定放置。瓶塞与量具一旦弄错，试剂即受污染，实验就可能失败。3标准试剂不应用潮湿之吸管与之直接接触，取出后不得再放入原瓶。七、玻璃器皿的洗涤七、玻璃器皿的洗涤一般玻璃器皿用肥皂或去污粉以毛刷洗涤即足以满足要求，洗后应将肥皂或去污粉仔细冲掉，将水倾去后，器壁不挂水珠，视为合格。铬酸洗液仅用于毛刷不能洗净的器皿，切勿滥用于普通玻璃器皿洗涤。使用铬酸洗液时，玻璃器皿应干燥；过多的水份将使洗液迅速失效。用过的铬酸洗液须加以保存以反复使用，直至变为绿色后方可舍弃；其舍弃法与浓硫酸液相同。用洗液浸洗过的玻璃器皿，应先用自来水冲洗，然后再用蒸馏水或去离子水清洗，清洗时，宜采用“少量多次”原则以节约蒸馏水，同时清洗的效率也高。八、舍弃物的处理八、舍弃物的处理舍弃物必须依照其性质作适当处理。以免造成实验材料浪费，损坏水槽及下水管道，或污染实验环境。1所有固体舍弃物（例如用过的滤纸、损坏的软木塞及橡皮物、玻璃渣、火柴梗等） 。必须放入废物筒或篓中，切勿丢于水槽中。2废硫酸或洗液，应先倾入大量水中，再倒入水槽中，并以大量水冲走。3实验完成后的沉淀或混合物，若含有可提取或收回的贵重物品者，不可随意舍弃，应放入教师指定的回收器中。目 录前言 生物化学实验须知 实验 1 生物化学实验技术简介: . 1 第一节 实验误差与数据处理 1 第二节 光度法的原理与分光光度计的使用.6 第三节 层析法13 第四节 电泳法22 第五节 生化实验样品制备29 实验 2 改良微量凯氏定氮法测定血清蛋白质总量 31 实验 3 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 33 实验 4 血清 球蛋白的提纯 35 实验 5 酶促反应动力学实验 37 实验 6 细胞核的分离与核酸的测定 44 实验 7 血糖测定（葡萄糖氧化酶-过氧化酶法）及肾上腺素对血糖浓度影响47 实验 8 尿中的肌酐、尿酸含量测定 49 实验 9 金氏法测定血清谷丙转氨酶活性 51 附录一 常用酸碱的比重与浓度的关系.53 附录二 常用缓冲液的配制方法.541广范围的缓冲液（pH2.612.0）.542柠檬酸Na2HPO4（Mollvaine）缓冲液，pH2.67.6553柠檬酸柠檬酸三钠缓冲液，pH3.06.2. 564醋酸醋酸钠缓冲液，pH3.75.6.575琥珀酸NaOH 缓冲液，pH3.86.0576Na2HPO4NaH2PO4缓冲液，pH5.88.0587ClarkLubs 缓冲液（KH2PO4NaOH） ，pH5.88.0. 598三羟甲基氨基甲烷（Tris）盐酸缓冲液，pH7.18.9（25） 609C1arkLubs 缓冲液（硼酸NaOH） ，pH8.00.2. 6110硼酸缓冲液，pH8.19.0（25） 6211甘氨酸NaOH 缓冲液，pH8.19.0（25）.6212Na2CO3NaHCO3缓冲液6313硼酸缓冲液，pH9.310.7（25）.6414碳酸缓冲液，pH9.710.9（25）.6515磷酸缓冲液，pH11.011.9（25）6516纸上蛋白质电泳用的几种缓冲液.66