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开放开放 ODS 柱色谱在分离纯化中的应用柱色谱在分离纯化中的应用什么是 ODS?ODS 是英文 octadecyl silane 的缩写,意思是十八烷基硅烷,是以硅胶为基质键合的 C18 填料,属于反相色谱。ODS 柱色谱,简单地说,就是指用 ODS 装成的色谱柱啦。 “开放” 一词,是指未对色谱柱施加任何压力,让其在重力作用下洗脱;相对于开放 ODS 柱色谱, 有中低压柱色谱,高低柱色谱等等。我们平时所说的反相 HPLC,一定程度上来说,其实也可以说是 ODS 柱色谱,只不过 它的分离效果更好,还配备了紫外或者示差等高级地检测手段,其实质还是属于反相柱色 谱。适用范围有哪些?首先需要说明:ODS 在分离纯化的过程中,起着极为巨大的作用!就化合物极性而言,ODS 适合分离极性中等偏大的化合物类型。对于极性较小的化合 物,应该考虑用硅胶、凝胶等手段进行分离纯化,绝对不要尝试 ODS,唯一的后果只能是: 样品全部死吸附,根本不可能洗脱!某些行业,前处理一般是萃取,比如环己烷/石油醚、乙酸乙酯/氯仿、正丁醇、水。 水层的、正丁醇层的样品,一般都可以用 ODS 进行分离纯化;乙酸乙酯层的样品,极性偏 大的部分可以考虑用 ODS;至于环己烷层的样品,千万不要使用 ODS,那将是:上样量多 少,死吸附就有多少!就化合物分类而言,ODS 对于黄酮苷类、环烯醚萜苷类、糖苷类等成分都能有一定的 分离效果,也有很多成功的分离纯化实例。但是,对于苷元类化合物,则需要慎重考虑, 其实还是极性大小的问题:苷元类化合物,一般极性较小。如何装柱、上样、洗脱?装柱:新买来的 ODS,用甲醇浸泡过夜后即可装柱。具体的装柱方法,跟硅胶的装柱 子法是一样的,记得用甲醇装柱就行。装完以后,置换成起始流动相系统,即可投入使用 了。上样:分为两种,一种是湿法上样,另一种是拌样。湿法上样,不必多说,就是将样 品溶解至一定体积(强烈建议用起始流动相溶解,但体积不可过大,太大相当于原点变大, 分离度变差) ,然后上样;至于拌样,很多的观点表示 ODS 不应该拌样,我在这里指出, 依我个人经验来看,拌样是可以的,尤其对于一些溶解性较差的样品,拌样后分离的效果, 比湿法上样好很多,大家可以尝试。 (所谓拌样,就是指将你的样品溶解,然后从柱子里面 掏出小部分 ODS,然后进行拌匀,注意不要过载)洗脱过程:如果你有 ODS 薄层板,你可以先点板看看样品大概的极性大小。如果你没 有 ODS 板,你拿到的是“盲样” ,一般可以采取常规的梯度洗脱,如水30%甲醇/水50%甲醇/水70%甲醇/水100%甲醇,然后依据各流分样品量的大小进一步进行细 分;经过常规的梯度洗脱以后,假设,你的样品集中在 50%的甲醇/水部分,进行细分的时 候,你就可以选择 40%甲醇/水45%甲醇/水50%甲醇/水100%甲醇这样的梯度。流动相的选择:其实就是反相流动相,无非就是甲醇/水,乙腈/水,流动相中也可以 加入一些其他物质。我曾经很多次加入乙酸,用来改善拖尾的现象(点 ODS 薄层板分析过) 。至于缓冲盐,我没有试过,具体情况不太了解。洗脱样品的如何处理?洗脱下来的样品,可用硅胶薄层板进行点板分析,然后将相同流分进行合并,也可以 采用 HPLC 检测合并。我认为,对于一些量小的流分,相差不是很大的,尽量合并,避免样品的分散;对于一些量大的流分,可合可不合,反正量大,合与不合的效果是一样的(无非就是 多占点空间) ;从 ODS 上洗脱的流分,很可能是纯品;易结晶的样品,会在溶剂挥发的过程中结晶析 出来,要注意观察;柱子被污染如何处理?污染是正常的,见过那么多,也用过那么多 ODS 柱子,没有哪一根能在使用一段时间 后保持“洁白无瑕”的。被污染,一般情况下就是用甲醇冲洗,一直到冲洗液蒸干没有杂质为止,就可以进行 下一批样品的分离了。也许有人问:你这么处理彻底吗?回答是否定的,但是,对于 ODS 柱色谱,这样的处 理已经足够了。道理很简单,用 ODS 进行分离的样品,一般极性不会很小,70%甲醇/水基本能全部冲 洗下来。现在已经用甲醇冲洗得差不多,在你对下一批样品进行分离的时候,上一批残留 的杂质也就只有 100%的甲醇能洗脱下来,根本不会影响。如果一定要处理,可以采用甲醇:异丙醇1:1 冲洗,这种做法,算是终极做法了。
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