中国输血杂志年第卷第期经验与方法山梨醇对人血免疫球蛋白中的病毒灭活和制品性质的影响卫生部兰州生物制品研究所宣松林王自立广州军区南岳制药厂曾学清输注血液制剂有 传播病 毒性疾病的危险,其中、和等均 是血液制剂传播的主要病毒,而未知 的经血液传播的病毒威胁还将长期存在。因此,血液制剂的安全性问题越来越受到人 们的关注和重视。血液制剂中各种灭活病毒的新工艺正在加紧研究 一幻。静脉注射免疫球蛋 白的制备,通常用 肌 注 免疫球 蛋 白作深加 工,因而中病毒灭活的关键在于 免疫球蛋白中病毒的灭活。本文主要就免疫球蛋白液体加热处理条件进行探讨,观察在免疫 球 蛋 白加热 时山梨 醇对 加入的种模型病毒 的灭 活作用,为制备 中采用巴 氏消毒灭 活病毒提供依据。材料和方法血液制剂一兰州生物制品研究所用低 温乙醇法从正常人血浆 中提取乙肝免疫球蛋白和 狂犬病免疫球蛋白兰州生物制品研究所生产。病 毒株流行性乙型脑炎病 毒株 狂犬病病毒株 麻疹病毒沪仙 台病毒和轮状病毒均为兰州生物制品研究所提供。试剂山梨醇上海生化试剂二 厂生产轮 状病毒试剂 盒兰州 生物 制品研究所 抗一试剂盒北京生化免疫试剂中心。病 毒灭活试验将含山梨醇的免疫球蛋 白溶液分别与体积的上述种病毒液混合取混合液水浴加热小时,然后检测加热前后样品中的病毒滴度。各种病毒的检测 流行性乙型脑炎病毒和狂犬病病毒用小鼠法检测,按一一法计算麻疹病毒用细胞病变法检测,按一法计算。仙台病 毒用鸡 胚培养及直接血凝法检测,按一法计算轮状病毒用细 胞 培 养 及检测,按一法计算滴度。免疫球蛋白加热前后理化性 质和抗体效价的比较将人血免疫球蛋白、乙肝免疫球蛋白、和 狂犬病 免疫 球蛋白含山梨 醇,置加热小时,加热后测定其理化性质和抗体效价,并与加热前样品比较。以含山梨醇的免疫球蛋 白液加热小时后的样品作为对照。结果液体免疫球蛋 白加热处理灭 活病毒的效果将种 高滴度 的模型病 毒加到含山梨醇的免疫球蛋 白溶液中,加热小时,倍稀释下未测出病毒。结果见表。量具有一定意 义。本组还观察了、肝素抗凝血的红细胞受体活性,发现前者显著低于后者,提示保存红细 胞仍 非尽善,但因观察例数较少,其作用机制有待进一步探讨。参考文献 ,一陈且峰,等例病人红 细胞免疫功能位侧分析中国免疫学杂志,年月日收稿,年月日修回中国精血杂志年第卷第期表加热小时对种病毒的灭活效果病毒单位乙脑病毒。王狂犬病毒。麻疹病毒。仙台病毒。轮状病毒。一习习,义确,之,两者无 明显差异。用小 鼠中和试验法测定人狂犬病免疫 球蛋 白抗 体 效 价在 加入山梨醇,小时热前后样品中,的抗体效价分别为和,二者差别更小。,表中值是按稀释度的回推值,实际倍稀释未测 出病毒,。用方法检测培养液上清,半数呈阳性自免疫球蛋 白加热前后 的理化性 质和抗体效价免疫 球蛋白中各组分含量的测 定用一凝胶过滤法。各组分的百分含量见表。含山梨醇 的 免 疫 球 蛋 白加热小时后 呈乳白色混浊。含山梨醇的免疫球 蛋白加热小时 后,单体、二 聚体和多 聚体 的 变化 轻 微,单 体、二 聚 体下降。纬,多聚体升高。并对加热前后样品用醋纤膜电泳和三氯醋酸可溶物测定,结果与凝胶过 滤测定相吻 合。表两种浓度山梨醇的免疫球蛋白加热前后的各组分结果对比单体和二 多聚体裂解物 祥品加热聚体刀一写山梨醇的 免疫球蛋白加热前小时山梨醇的 免疫球蛋白加热前,小时抗体效价的测定对加入山梨醇小时加热前后的免疫球蛋白样品测定麻疹及 百日咳抗体用 血凝抑制法测定 麻疹病 毒血 凝抗体效价,结果在加热前后均为用凝集试验常规法测定百日咳凝集素,在加热前后均为。用法测定的抗一效价加入山梨醇,小时加热前后的抗一效价分别为和,讨论现已公认,山梨醇、木糖醇、甘氨酸、蔗糖和甘露醇等都能作为蛋白质的稳定剂。证明,在巴氏消毒中,山梨醇对免疫球蛋 白的稳定作用优于蔗糖,在经小 时加热后抗原性无 明显改变。本试验结果表明,含山梨醇的 免疫球蛋白 在巴氏消毒中稳定,这和国内王立兰以及的结果一致。本试验中将种模型病 毒流行性乙型脑炎、狂犬病、麻疹、仙台和轮状病毒加到含山梨醇的免疫球蛋白中,加热小时,在倍稀释下未测出病毒。由此可见,该法适合于免疫球蛋 白制剂的病毒灭活。山梨醇作为一种保护剂能增强免疫球蛋 白的热稳定性,在山梨醇存在时,免疫球蛋 白经小时加热,多聚体仅增 加写,基础抗体未发生变化。并对和进行加热前后比较,抗体效价几无变化。参考 文 献,百卜一叮一毖,一召奇、。”,气,沁王像 慢,等,静脉注射免疫球蛋白加热处理 灭活病毒的研究,中国输血杂志,名王立兰加热灭活病毒的静脉注射免疫球蛋白的研究微生物学免疫学进展,年月日收稿,月日修回