N Y 中华人民共和国农业行业标准农药室内生物测定试验准则 杀菌剂 第1部分：抑制病原真菌孢子萌发试验凹玻片法Pesticides guidelines for laboratory bioactivity testsPart 1：Determining fungicide inhibition of pathogen spore germinationon concave sIideS中华人民共和国农业部发布NYT 1156 12006刖吾农药室内生物测定试验准则杀菌剂为系列标准。 本部分 是农药室内生物测定试验准则杀菌剂的第1部分。 本标 准由中华人民共和国农业部提出并归口。 本标准起草单位：农 业部农药检定所。 本标准主要起草人：徐文平、朱春雨、吴新平、张弘、邱涧平。 本标准由农业部农药检定所负责解释。1NYT 1156卜一2006农药室内生物测定试验准则 杀菌剂 第1部分：抑制病原真菌孢子萌发试验 凹玻片法1范围 本部分规定了杀菌剂抑制病原真菌孢子萌发试验的基本要求和方法。 本部分适用于杀菌剂对病原真菌孢子萌发抑制作用测定的农药登记室内试验，其他试验参照本部 分执行。2试验条件21试验靶标 试验靶标应选择容易产生孢子且孢子容易萌发、遗传和成熟度一致、便于镜检的病原真 菌，如稻瘟病菌(pyric“larin ory2ae)、梨黑星病菌(Venturia pirina)。记录菌种来源。2 2仪器设备2 2 1离心机；222电子天平(感量01mg)；223显微镜；224培养箱；225培养皿；226计数器；2 2 7载玻片；2 2 8凹玻片；2 2 9移液管或移液器等。3试验设计31试材准备 将试验用病原真菌在适宜的培养基上培养，或将病组织保湿培养，待产生孢子后备用。32药剂3 2 1试验药剂 试验药剂采用原药(母药)，并注明通用名、商品名或代号、含量 和生产厂家。3 22对照药剂 对照药剂采用已登记注册且生产上常用的抑制孢子萌发的 杀菌剂原药。33试验步骤331孢子悬浮液配制将培养好的病原真菌孢子用去离子水从培养基或病组织上洗脱、过滤，离心(1 000 rmin)5 min，倒 去上清液，加入去离子水，再离心。最后用去离子水将孢子重悬浮至每毫升1105个一1107个孢子， 并加入05葡萄糖溶液。 332药剂配制1NYT 115612006水溶性药剂直接用水溶解稀释。其他药剂选用合适的溶剂(如甲醇、丙酮、二甲基甲酰胺或二甲基 亚砜等)溶解，用o1的吐温80水溶液稀释。根据药剂活性，设置5个7个系列质量浓度，有机溶剂 最终含量不超过2。333药剂处理 用移液管或移液器从低浓度到高浓度，依次吸取药液o5mL分别加入小试管中，然 后吸取制各好的孢子悬浮液05 mL，使药液与孢子悬浮液等量混合均匀。用微量加样器吸取上述混合液滴到凹玻片 上，然后架放于带有浅层水的培养皿中，加盖保湿培养于适宜温度的培养箱中。每处理不少于3次重 复，并设不含药剂的处理作空白对照。4调查 当空白对照孢子萌发率达到90以上时，检查各处理孢子萌发情况。每处理各重复随机观察3个以上视野，调查孢子总数不少于200个，分别记录萌发数和孢子总数。 孢子芽管长度大于孢子的短半径视为萌发。 本试验还应观察记录芽管生长异常情况、附着胞形成数等。5数据统计与分析51计算方法 根据调查数据，计算各处理的孢子萌发相对抑制率，单位为百分率()。按公式(1)、(2) 计算，计算结果保留小数点后两位： R=等100式中： R孢子萌发率；g孢子萌发数； M 调查的孢子总数。 耻瓮100式中： R，处理校正孢子萌发率； R，处理孢子萌发 率； R。空白对照孢子萌发率。 j=警100(3)式中： J孢子萌发相对抑制 率； R。空白对照孢子萌发 率； R。处理校正的孢子萌 发率。52统计分析 根据各药剂浓度对数值及对应的孢子萌发相对抑制率的几率值作回归分析，计算各药 剂的E吗o、Ec90等值及其95置信限。进行药剂联合毒力测定时，根据Wedly法或孙云沛法计算混剂的增效系数(SR)或共毒系数 (CTC)，评价混剂的联合作用类型。2NYT 115612006Wadley法：根据增效系数(sR)来评价药剂混用的增效作用，即SRI5为增效作用。计算增效系数(SR)按公式(4)、(5)计算： X-i鬲PA而+PB(4)式中：x混剂的E岛。理论值，单位为毫克每升(mgL)； Pr一混剂中A的百分含量； PB_一混剂中B的百分 含量；A混剂中A的ECho值，单位为毫克每升(mgL)； B混剂中B的E岛。值，单位为毫克每升(mgL)。SR=煮(5)式中： SR混剂的增效系数； x混剂ECso的理论 值，单位为毫克每升(ragL)； x1混剂E岛。的实 测值，单位为毫克每升(mgL)。孙云沛法：根据共毒系数(CTC值)来评价药剂混用的增效作用，即cTc一80为拮抗作用，80 CTC120为相加作用，CTC120为增效作用。计算共毒系数(crc值)按公式(6)、(7)、(8)计算：ATl2薪100(6)式中： ATI混剂实测毒力指数； S标准药剂的E岛 o，单位为毫克每升(mgL)； M供试混剂的 EGo，单位为毫克每升(mgL)。T了Y=TIA XPA+TIBPB (7)式中：玎卜一混剂理论毒力指数； ThA药剂毒力指数；nA药剂在混剂中的百分含量，单位为百分率()； “BB药剂毒力指数； RB药剂在混剂中的百分含量；单位为百分率()。CTC=稆100(8)式中： CTC共毒系数； ATY混剂实测毒力指数； 玎f混剂理论毒力指数。6结果 根据统计结果进行分析评价，写出正式试验报告，并列出原始数据。3