中国医学科学院中国协和医科大学硕士学位论文- 1 -论文题目胶滴肿瘤药敏检测技术胶滴肿瘤药敏检测技术(CD-DST)(CD-DST)的建立的建立及临床应用研究及临床应用研究研 究 生：梁智导 师：张伟 研究员学科专业：细胞生物学研究方向：药敏检测技术所在所院：肿瘤医院 肿瘤研究所入学时间：2003 年 9 月二零零六年五月二零零六年五月中国医学科学院中国协和医科大学硕士学位论文- 2 -目录缩略语表-1中文摘要-2英文摘要-4前言-6材料与方法-9实验材料1.实验细胞系2.主要实验仪器3.主要试剂和耗材4.病人资料及肿瘤标本 实验方法1.主要试剂的配制2.细胞的复苏与冻存3.不同培养条件对肿瘤细胞生长支持度的测定3.1. 所用培养基对肿瘤细胞系生长支持度的测定3.2. 所用培养基对原代肿瘤细胞系生长支持度的观察3.3. I 型胶原蛋白包被对肿瘤细胞系和原代肿瘤细胞生长支持度的观察中国医学科学院中国协和医科大学硕士学位论文- 3 -4.胶滴肿瘤药敏检测（CD-DST）的建立4.1. 利用肿瘤细胞系建立胶滴培养技术4.2. 胶滴培养药敏技术的药物测试浓度4.3. 原代肿瘤细胞的体外胶滴肿瘤药敏检测5.ATP-TCA 法药敏检测结果-231.胶原包被对肿瘤细胞生长状态的影响2.所用培养基对肿瘤细胞生长支持度的动态观察3.肿瘤细胞在胶滴培养中生长状态的观察4.药物体外的杀伤作用5.图像的分析6.CD-DST 法与 ATP-TCA 二种技术的相关性比较7.CD-DST 法的标本可评价率8.肿瘤标本对化疗药物的体外敏感性讨论-35结论-45参考文献-45文献综述-45致谢-23中国医学科学院中国协和医科大学硕士学位论文- 4 -缩略语表缩略语表缩略语缩略语 英文名英文名 中文名中文名CD-DSTCollagen gel droplet culture drug-sensitivity test胶滴肿瘤体外药敏检测技术ATP-TCAATP bioluminescence ex vivo tumor chemosensitivity assayATP 生物荧光肿瘤体外药物 敏感性检测MTTMethylthiazoletetrazolium四唑蓝HTCAHuman tumor clonogenic assay软琼脂克隆形成实验DiSCDifferential staining cytotoxicity assay差异染色细胞毒检测IC50Inhibition concentration 50%杀伤 50%肿瘤细胞所需药物浓度FBSFetal bovine serum胎牛血清ODOptical density 光密度值中国医学科学院中国协和医科大学硕士学位论文- 5 -胶滴肿瘤药敏检测技术胶滴肿瘤药敏检测技术(CD-DST)(CD-DST)的建立的建立及临床应用研究及临床应用研究中文摘要中文摘要目的：目的：建立胶滴肿瘤体外药敏检测技术，探讨其在肿瘤个体化治疗中应用的可行性。方法：方法：用人类肿瘤细胞系建立胶滴肿瘤体外药敏检测技术；并用该技术对 50 例不同肿瘤类型的原代肿瘤标本进行药敏检测实验研究，其中包括妇科恶性肿瘤 18 例，胃肠道恶性肿瘤 15 例，白血病/淋巴瘤 8 例，肺癌 5 例，肝癌 4 例。每种肿瘤标本分别进行了 4-5 种包括阿霉素 (ADM)、 5-氟脲嘧啶 （5-FU） 、顺铂 (DDP)、丝裂霉素 (MMC)、紫杉醇（PTX） 、草酸铂（L-OHP）和健择（GEM）等抗肿瘤药物的敏感性测定。 结果：结果：在体外成功建立了胶滴肿瘤药敏检测技术，并确定了胶滴肿瘤体外药敏检测技术的最佳条件；该技术与 ATP 生物荧光肿瘤体外药敏检测技术（ATP-TCA）相比具有较好的相关性；该技术检测所需标本量小（3103个细胞/滴）可扩大其应用范围；实验证实该技术可反映病人对不同抗肿瘤药物敏感性的差异；标本整体评价率为 82.0%（41/50） ；检测结果与临床经验有效率间有较好的符合性。结论：结论：CD-DST 法体外肿瘤药敏检测技术是一种较好的药敏检测方法，标本可评价率为 82.0%（41/50） ，所需标本量小的特点使其扩大了在临床上的应用范围。该技术可反映病人对不同抗肿瘤药物敏感性的差异，检测结果与临床经验有效率有较好的符合性。因此该药敏检测方法对抗肿瘤药物筛选和对个体化治疗具有实际应用价值。该技术的建立填补了国内该领域的空白。关键词关键词：肿瘤 药敏检测 胶滴肿瘤药敏检测技术中国医学科学院中国协和医科大学硕士学位论文- 6 -TheThe EstablishmentEstablishment ofof CollagenCollagen gelgel dropletdroplet cultureculture drug-sensitivitydrug-sensitivity testtest (CD-DST)(CD-DST) TechniquesTechniques andand ItsIts ClinicalClinical ApplicationApplicationAbstractAbstractOBJECTIVE:OBJECTIVE: To establish Collagen gel droplet culture drug-sensitivity test (CD-DST) technique and explore its clinical feasibility of application.METHODS:METHODS: The human tumor cell lines were used to find out the best cultureconditions of collagen gel droplet culture drug-sensitivity test (CD-DST). The chemosensitivity of 4 or 5 anticancer drugs （ADM, DDP,MMC,PTX,L-OHP,GEM, 5-FU,etc.）was assessed by the CD-DST in the ovarian and uterine cancer（n=18）, gastrointestinal cancer（n=15）,lymphoma and leukaemia（n=8）, lung cancer（n=5）,liver cancer（n=4） 。RESULTS:RESULTS: We established the collagen gel droplet culture drug-sensitivity test (CD-DST) by using the human tumor cell lines. The CD-DST can evaluate the efficacy of anticancer drugs in diverse kinds of tumor specimen, and has good correlation with other chemosensitivity assay methods. Furthermore, the CD-DST has the advantage of using a comparatively small number of cells(3103 cell/30l), which can solve the issue of minor specimen source.The 中国医学科学院中国协和医科大学硕士学位论文- 7 -CD-DST can reflect the differences of anticancer drugs sensitivity in different patients with the good clinical correlation and an overall predicting value of 82.0%（41/50）.CONCLUSION:CONCLUSION: There were considerable differences in chemosensitivitybetween individuals. The CD-DST is a good chemosensitivity assay methods with the advantage of high overall predicting value and a comparatively small number of cells, so that it can solve the issue of minor specimen source. There was a statistically correlation between clinically reported response rates and the response rates obtained by CD-DST.It appears to be useful in exploring the possible combination plots and principles, evaluating the efficacy of existing chemotherapy, and optimize chemotherapy on an individual basis. Our research also filled the blank in this field of our country. KeyKey Words:Words: Tumor Chemosensitivity assay CD-DST中国医学科学院中国协和医科大学硕士学位论文- 8 -胶滴肿瘤药敏检测技术胶滴肿瘤药敏检测技术(CD-DST)(CD-DST)的建立的建立及临床应用研究及临床应用研究前言前言恶性肿瘤是一大类严重威胁人类生命和健康的疾病。化学治疗在恶性肿瘤