分类号：星竖呈：墨U D C ：密级重庆医科大学博士学位论文三七皂甙I I g l 对慢性血栓栓塞性肺动脉高压和心肌重构论文题目的调控及机制研究作者姓名李长毅指导教师姓名( 职称、单位名称)王导新教授重庆医科大学第二临床学院申请学位级别博士学科、专业名称内科学( 呼吸系病)论文答辩年月2 0 1 1 年5 月2 0 1 1 年5 月重庆医科大学研究生学位论文独创性声明删删0 删 Y 2 4 1 2 7 9 7本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。学位论文作者始墨么，魄生! ! ：兰二_ ! 上|学位论文版权使用授权书本人完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属重庆医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为重庆医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容( 保密内容除外) ，可以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：指导教师签名：日期：熬 皇整虹目录英汉缩略语名词对照。1中文摘要3英文摘要。9论文正文：- - - t ：皂甙R g l 对慢性血栓栓塞性肺动脉高压和心肌重构的调控及机制研究1 7第一部分三七皂甙g g l 对慢性血栓栓塞性肺动脉高压的调控1 7前言1 71 材料与方法1 92 结果2 93 讨论3 5参考文献3 9第二部分三七皂甙R 9 1 对大鼠慢性血栓栓塞性肺动脉高压右室心肌重构的调控q 1 3前言4 31 材料和方法4 42 结果4 63 讨论4 9参考文献5 3全文总结5 5附图5 6文献综述6 4致谢。7 4攻读博士学位期间发表的学术论文7 5英文缩写C T E P HP N SP T C AP C N AD A BH EH R PP B SS D SS Dr a tC v FS PT B EM M P 2N 0O DL V We N O SF C M重庆医科大学博士研究生学位论文英汉缩略语名词对照英文全称中文全称C h r o n i c t h r o m b o e m b o l i s m慢性血栓栓塞性P u l m o n a r yh y p e a e n s i o n肺动脉高压P a n a xn o t o g i n s e n gs a p o n i n s三七皂甙P e r c u t a n e o u st r a n s l u m i n a l经皮冠状动脉形c o r o n a r ya n g i o p l a s t y成术P r o l i f e r a t i n gc e l l增殖细胞核抗原n u c l e a ra n t i g e n3 , 3 一d i a m i n o b e n z i d e n c e3 。3 一二氨基甲苯H e m a t o x y l i n e e o s i n苏木素一伊红H o r s e r a d i s hp e r o x i d a s e辣根过氧化物酶P h o s p h a t eb u f f e rs o l u t i o n磷酸盐缓冲液S o d i u md o d e c y ls u l f a t e十二烷基硫酸钠S p r a g u e D a w l e yr a tS D 大鼠t h ec o l l a g e nv o l u m ef r a c t i o n胶原容积分数S t r e p t a v i d i np e r o x i d a s eV e n t r i c u l a rr e m o d e l i n g过氧化物酶标记链霉素卵霉素心室重构T r i s b o r i c a c i d E D T AT B E 缓冲液M a t r i xm e t a l l o p r o t e i n a s e - 2基质金属蛋白酶2N i t r i co x i d eO p t i cd e n s i t yL e f tv e n t r i c u l a rw e i g h tE n d o t h e l i a In i t r i co x i d ep r o t e i n a s eE c t r a c e I l u l a rm a t r i x一氧化氮光密度左心室重量内皮一氧 化氮合酶细胞外基质重庆医科大学博士研究生学位论文R O SS O DM D AM M P SP A S M CR e a c t i v eo x y g e ns p e c i e sS u p e r o xid edis m u t a s eM a l o n d i a l d e h y d eM a t r i xm e t a l I o p r o t e i n a s eP u l m o n a r ya r t e r ys m o o t hm u s c l ec e l I活性氧超氧物歧化酶丙二醛基质金属蛋白酶家族肺动脉平滑肌细胞重庆医科大学博士研究生学位论文三七皂甙R g l 对墁性血栓栓塞性肺动脉高压和心肌重 构的调控及机制研究摘要第一部分三七皂甙R g l 对慢性血栓栓塞性肺动脉高压的调控目的复制慢性血栓栓塞性肺动脉高压( C h r o n i ct h r o m b o e m b o l i s mp u l m o n a r yh y p e r t e n s i o n ，C T E P H ) 实验动物模型，通过观察肺动脉血管在P N S R g l 干预前后组织结构、血流动力学的变化来探讨C T E P H 肺动脉血管重构的发病机制及P N S R g l 的保护效应。方法1 利用二次血栓栓塞法复制C T E P H 的动物模型。将s D 大鼠分成4组，腹腔注射0 9 N S 或P N S R g l ：A 组：正常大鼠+ 0 9 N S ；B 组：正常大鼠+ P N S R g l ；C 组：C T P H 模型+ o 9 N S ；D 组：C T P H 模型+ P N S R g l 。共计四周。2 血流动力学检测心率、肺动脉压力。3 肺组织进行苏木素一伊红( H E ) 染色观察肺组织光镜下病理改变、肺动脉管壁和内皮细胞改变。4 弹力纤维V G 染色，观察肺小动脉血管平滑肌厚度和血管外周直1重庆医科大学博士研究生学位论文径的比值( W T ) 。5 电镜观察肺小动脉内膜、中膜平滑肌超微结构改变。6 免疫组化检测肺动脉C o ll a g e n I 、M M P 一9 、P C N A 、S MQ a c t i n的表达。7 W e s t e r nB l o t 检测肺组织e N O S ，e N O S s e r l1 7 7 的表达。结果1 P N S R g l 干预对实验各组大鼠心率没有影响( P O 0 5 ) ；C 组C T E P H 的平均肺动脉压力( m P A P ) 达3 4 2 7 4 2 1 m m H g ，明显高于A 、B 组( P = O 0 0 0 ) ；D 组经过P N S R g l 干预可以减轻C T E P H 的平均肺动脉压为2 8 6 2 + 4 5 8m m H g ( 仁0 0 0 4 ) 。2 光镜下A 、B 组肺组织结构无明显异常改变，C 、D 组出现明显的炎性实变，肺组织膨胀不全，肺泡萎陷，肺泡腔及肺间质其内见炎细胞浸润，而c 、D 之间无明显的差别；而C 组小动脉壁及周围有大量炎细胞浸润，内膜增生，中膜增厚，血管腔狭窄变小甚至闭塞；经过P N S R g l 干预后的D 组上述改病变明显减轻，介于A 、B 组与C 组之间。3 V G 染色显示，C 组肺动脉中层平滑肌明显增厚，其W T ( 1 3 51 1 ) 为正常对照A 组的2 1 8 倍，差异具有明显统计学意义( P = O 0 0 0 ) 。P N S R g l 干预后D 组( 8 3 O 8 ) 肺动脉平滑肌较C 组明显变薄，差异具有显著统计学意义( P = O 0 0 0 ) ，但仍然厚于A 、B组( P = O 0 4 1 ) 。4 ( 1 ) A 组、B 组肺小动脉内膜内皮细胞扁平，排列紧密规则，染色L重庆医科大学博士研究生学位论文体均匀，基底膜完整；C 组细胞呈明显立方状或柱状分布，细胞间排列疏松，胞浆空泡化明显，细胞器数目减少，细胞核增大，染色体分叶，基底膜不完整，有断裂现象。D 组病理改变介于A 、B 组与C 组之间；( 2 ) 肺小动脉中膜：A 组：平滑肌细胞以1 层扁平细胞多见，细胞之间排列紧密，B 组之表现近似；C 组，平滑肌细胞明显增多，可达3 4 层，细胞层柱状排列，变肥大，细胞间连接疏松，并有间质成分沉积，细胞核有空泡表现，染色质稀疏，部分平滑肌细胞有突破基底膜进入内膜下倾向，中膜层增厚明显；D 组病理改变介于A 、B 组与C间。5 ( 1 ) P C N A 在肺动脉内膜A 组、B 组有低水平表达，而在C 组内膜P C N A 明显表达增加( 3 8 3 0 4 5 ) ，差异有显著统计学意义( P O 0 5 ) ，其表达水平在c 组( 3 5 6 _ + 0 3 1 ) 明显减低，差异具有显著统计学意义( P O 0 5 ) ；P N S R g l 可降低D 组血清M A D ( P 0 0 5 ) M e a np u l m o n a r ya r t e r i a lp r e s s u r ei ng r o u pC ( 3 4 2 7 + 4 2l m m H g ) w a sm u c hh i g h e rt h a nt h a ti ng r o u pA 、B( P = O o o o ) ，w h i c