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生物技术实践第11章第 52讲 高考必考题突破讲座(十一)微生物的利用和生物技术在食品加工中的应用的解题策略考纲要求考情分析命题趋势 微生物的分离与培养、某种微生物数 量的测定往往结合实验过 程图解 或者装置图考查;培养基对微生物 的选择作用一般是填空识记题 ; 利用微生物发酵来生产特定的产物 及发酵加工食品可结合具体的背景 材料或实验流程考查,主要考查 原理、方法、操作流程、现象及注 意事项2016,天津卷,10T 2016,全国卷,39T2016,全国卷,39T2015,全国卷,39T 2015,江苏卷, 19T,31T微生物的纯化培养 操作与应用及传 统发酵技术的应 用是高考命题的 热点。试题常联 系生产生活实际 考查微生物的分 离和纯化培养及 发酵食品的制作 过程分析分值:215分题题 型 结结 构解 题题 思 维维命 题题 角 度栏目导航真 题题 剖 析突 破 训训 练练1以果酒、果醋、腐乳、泡菜制作为为背景,考查查最基本知识识,以填空为为主。2结结合实验过实验过 程图图考查查微生物的分离、微生物的培养、微生物的应应用。题题 型 结结 构1列表比较记忆较记忆 法:对对于微生物的应应用、传统发传统发 酵技术术的基础础知识识考查查可采用此法。例如可列表比较较果酒和果醋制作步骤骤的异同,列出相同的过过程和不同的过过程。再例如可列表比较较微生物计计数的两种计计数方法的原理、方法、缺点、结结果等。2归纳总结归纳总结 法:对对于习题习题 中出现过现过 的考查查内容及考查查方式进进行归纳总结归纳总结 。例如可以对对微生物纯纯化的三种途径进进行总结总结 ,最后可形成“单单菌落挑取法”“选择选择 培养法”和“鉴鉴定培养法”。3联联想记忆记忆 法:考查查培养基时应时应 想到培养基的成分、条件;考查查范围围操作就应应想到消毒与灭灭菌;考查查微生物分离就想到筛选筛选 菌株、统计统计 菌落数目、设设置对对照等相关内容或操作。解题题方法解 题题 思 维维1首先浏览浏览 整道习题习题 ,大致了解考查查什么内容,从题题干获获取有用信息,识识图读图图读图 。2对对于“平板划线线法在操作时时,接种环环通过过_灭灭菌”的问题问题直接根据识记识记 知识识用生物学术语术语 作答即可。3对对于实验实验 分析题题,例如“为为了检测检测 某致病菌对对抗生素的敏感性,将分别别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸滤纸 片均匀置于该该平板上的不同位置培养一段时间时间 后,含A的滤纸滤纸 片周围围出现现透明圈,说说明该该病菌对对抗生素A_;”对这样对这样 的问题则应问题则应 根据实验实验 分析明确自变变量是什么,实验实验 原理是什么,实验结实验结果是什么,说说明什么等。答题题步骤骤 1对对于考查查基础础知识识的填空只需用准确的生物学名词术语词术语 作答即可。2对对于文字描述较较多的,例如“该实验该实验 的目的是什么”“此操作是为为了什么”“某现现象说说明了什么”等这类问题这类问题 ,则应则应 根据所学知识识,组织组织 好语语言,言简简意赅赅,规规范作答。规规范答题题微生物的利用和生物技术术在食品中的应应用与自然界和社会生活联联系密切,体现现其社会应应用价值值。这类题这类题 目主要考查查学生的识记识记 、理解,同时时能反映学生平时时的实实践情况及分析理解能力。命 题题 角 度角度一 微生物的纯纯化、计计数、筛选筛选 与鉴别鉴别 一、微生物的纯纯化与计计数 1纯纯化微生物的接种方法:2微生物的计计数见见本书书P261考法二比较项目平板划线法稀释涂布平板法 关键操作 接种环在固体平板培养基表面 连续划线一系列的梯度稀释 涂布平板法操作 注意事项每次划线前后均需灼烧接种环稀释度要足够高,为确保实验 成功可以增加稀释度的范围 菌体获取 在具有显著的菌落特征的区域菌 落中挑取菌体从适宜的稀释度的平板上的菌落 中挑取菌体 优点可以根据菌落的特点获得某种微 生物的单细胞菌落既可以获得单细胞菌落,又能 对微生物计数 缺点不能对微生物计数操作复杂,需要涂布多个平板二、微生物的筛选筛选 与鉴别鉴别比较项目土壤中分解尿素的细菌的分离分解纤维素的微生物的分离方法利用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行选择培养利用富含纤维素的选择培养基进行选择培养原理只有分解尿素的细菌能够合成脲酶,才能在以尿素为唯一氮源的培养基上生长因为培养基中含有丰富的纤维素,因此能够分解纤维素的微生物具有更多的生存机会而大量繁殖鉴定在培养基上加入酚红指示剂,指示剂变红说 明菌落中的菌体为分解尿素的细菌刚果红染色法,菌落周围出现不变红的透明圈的菌落为分解纤维素的微生物的菌落真 题题 剖 析例1 (2015江苏卷)人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动刍动 物的胃,可用来发发酵处处理秸秆,提高秸秆的营营养价值值。为为了增强发发酵效果,研究人员员从牛胃中筛选纤维筛选纤维 素酶高产产菌珠,并对对其降解纤维纤维 素能力进进行了研究。请请回答下列问题问题 。(1)在样样品稀释释和涂布平板步骤骤中,下列选项选项 不需要的是_(填序号)。酒精灯 培养皿 显显微镜镜 无菌水(2)在涂布平板时时,滴加到培养基表面的菌悬悬液量不宜过过多的原因是_。(3)向试试管内分装含琼琼脂的培养基时时,若试试管口粘附有培养基,需要用酒精棉球擦净净的原因是_。 如果过过多,培养基表面的菌悬悬液会出现积现积 液,导导致菌体堆积积,影响分离效果 避免培养基污污染棉塞 (4)刚刚果红红可以与纤维纤维 素形成红红色复合物,但并不与纤维纤维 素降解产产物纤维纤维 二糖和葡萄糖发发生这这种反应应。研究人员员在刚刚果红红培养基平板上,筛选筛选 了几株有透明降解圈的菌落(如图图)。图图中降解圈大小与纤维纤维 素酶的_有关。图图中降解纤维纤维 素能力最强的菌株是_(填图图中序号)。量与活性 (5)研究人员员用筛选筛选 到的纤维纤维 素酶高产产菌株J1和J4,在不同温度和pH条件下进进行发发酵,测测得发发酵液中酶活性的结结果见见下图图,推测测菌株_更适合用于人工瘤胃发发酵,理由是_ _。J4 发发酵过过程会产热产热 和产产酸,J4菌株在较较高温度和酸性环环境下酶 的活性更高 解析 (1)在样品稀释过程中需用到无菌水,涂布平板时需酒精灯、培养皿,都不需显微镜。(2)筛选纤维素酶高产菌,采用稀释涂布法时菌液不宜过多,否则菌体堆积,无法获得单菌落,影响分离效果。(3)分装培养基时,若试管口黏附有培养基,盖棉塞时其会黏附于棉塞上,易受到空气中微生物的污染,进而造成培养基污染。(4)纤维素与刚果红结合形成红色复合物,当纤维素酶高产菌分泌纤维素酶降解纤维素后,红色消失,从而使菌落周围出现透明圈。纤维素酶越多,活性越强,则分解的纤维素越多,产生的透明圈越大。据此可以看出,图中菌落透明圈最大,降解纤维素能力最强。(5)发酵过程,微生物细胞呼吸产热,温度较高并产生酸性物质如CO2或乳酸使pH降低。因此,耐高温、耐酸的菌株更适合用于人工瘤胃发酵。突 破 训训 练练1(2015全国卷)已知微生物A可以产产生油脂,微生物B可以产产生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产产。回答有关问题问题 :(1)显显微观观察时时,微生物A菌体中的油脂通常可用_染色。微生物A产产生的油脂不易挥发挥发 ,可选选用_(填“萃取法”或“水蒸气蒸馏馏法”)从菌体中提取。(2)为为了从自然界中获获得能产产生脂肪酶的微生物B的单单菌落,可从含有油料作物种子腐烂烂物的土壤中取样样,并应选应选 用以_为为碳源的固体培养基进进行培养。苏苏丹(或苏苏丹) 萃取法 油脂 (3)若要测测定培养液中微生物B的菌体数,可在显显微镜镜下用_直接计计数;若要测测定其活菌数量,可选选用_法进进行计计数。(4)为为了确定微生物B产产生的脂肪酶的最适温度,某同学测测得相同时间时间 内,在30 、40 、45 温度下降解10 g油脂所需酶量依次为为4 mg、1 mg、6 mg,则则上述三个温度中,_条件下该该酶活力最小。为为了进进一步确定该该酶的最适温度,应围绕应围绕 _设计设计 后续实验续实验 。解析 (1)苏丹能将细胞中油脂颗粒染成橘黄色,苏丹能将细胞中的油脂颗粒染成红色。蒸馏是利用水蒸气将挥发性较强的芳香油携带出来,适用于提取挥发性强的芳香油;萃取法适用范围广,对于不易挥发的物质提取可选用。血球计计数板 稀释释涂布平板 45 40 (2)筛选产生脂肪酶的微生物,应以脂肪作为唯一碳源制成选择培养基,这样在培养基上存活下来的就是能产生脂肪酶利用脂肪的微生物。(3)测定微生物细胞数量的方法很多,通常采用显微直接计数法和稀释涂布平板计数法。显微直接计数法需用血球计数板,一般死菌、活菌都有。而稀释涂布平板计数法是将待测样品经适当稀释之后,取一定量的稀释样液涂布到平板上,经过培养之后统计菌落数。根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的活菌数。(4)相同量的底物在分解时所需酶量越少,说明酶活力越大。根据数据可知,45 时所需酶量最多,酶活力最小。根据实验结果可推测40 可能低于或高于最适温度,也可能是最适温度,因此后续实验应围绕40 设计。2(2014四川卷)有机农药农药 苯磺隆是一种除草剂剂,长长期使用会污污染环环境。研究发现发现 ,苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过实验过 程如图图甲、乙所示。(1)微生物生长长繁殖所需的主要营营养物质质有碳源、水、_四类类,该实验该实验 所用的选择选择 培养基只能以苯磺隆作为为唯一碳源,其原因是_。(2)与微生物培养基相比,植物组织组织 培养的培养基常需添加生长长素和_,这这些植物激素一般需要事先单单独配制成_保存备备用。氮源和无机盐盐 只有能利用苯磺隆的微生物能正常生长长繁殖 细细胞分裂素 母液 (3)纯纯化菌株时时,通常使用的划线线工具是_。划线线的某个平板培养后,第一划线线区域的划线线上都不间间断地长满长满 了菌,第二划线线区域所划的第一条线线上无菌落,其他划线线上有菌落。造成划线线无菌落可能的操作失误误有_ _。(4)为为探究苯磺隆的降解机制,将该该菌种的培养液过滤过滤 离心,取上清液做图图乙所示实验实验 。该实验该实验 的假设设是_,该实该实验设计验设计 是否全理?为为什么?_。接种环环 接种环环灼烧烧后未 冷却; 划线线未从第一区域末端开始 目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白质质 不合理,缺少空白对对照 解析 (1)微生物生长所需的主要营养物质包括碳源、氮源、水和无机盐。使用选择培养基是因为它是能允许特定微生物生长,同时又能抑制或阻止其他微生物的生长的培养基。(2)植物组织培养所用的植物激素是生长素和细胞分裂素,应将这两种植物激素单独配制成母液保存备用。(3)进行菌株纯化时,常用的划线工
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