1丹参的超临界 CO2 提取工艺研究作者：李玲 何宇新 吴晶晶 吴金伟【摘要 】 目的 筛选丹参的超临界 CO2 提取最佳工艺条件。方法 采用 L9(34)正交试验，以丹参酮A 含量为指标进行正交试验，对丹参的超临界 CO2 提取工艺进行考察，同时将考察结果与传统提取方法进行比较。结果 丹参的超临界 CO2 提取最佳工艺为：取丹参药材粗粉（过 20 目筛）进行萃取，萃取压力为 30 MPa，提取时间为 2 h，萃取温度为 40 ，解析压力为 5 MPa.与传统乙醇回流提取方法相比较，丹参酮A 和丹酚酸 B 的提取率分别增加至 1.25倍和 1.58 倍。结论 运用该工艺提取效率高，稳定性较好，且有效成分提取率高于传统提取方法，适合大生产。 【关键词】 丹参； 超临界 CO2 提取； 正交试验【Abstract】 Objective To optimize the extraction process for Salvia miltiorrhiza Bgeby SFE CO2 .Methods The orthogonal experiment was designed and the content of tanshinoneA and salvianolic acid B were wed as index to determine the optimum technologic parameters.Results The optimum process was as follows：extracting pressure 30MPa, 2extracting temperature 40， extracting time 2h， separating pressure 5MPaThe extraction rate of tanshinoneA and salvianolic acid B were 1.25 and 1.58 times higher than the trenditionerl method using alcohol.Conclusion With the extraction rate higher than the common method by alcohol,the optionnal process is stable,feasible and suitable for production.【Key words】 Salvia miltiorrhiza Bge ； SFE CO2； orthogonal experimental design丹参为唇形科植物丹参 Salvia miltiorrhiza Bge 的干燥根及根茎，味苦，性微寒，祛瘀止痛、活血通经、清心除烦1 。现代研究发现，丹参主要含有结晶性菲醌类化合物，如丹参酮(tanshinone)、丹参酮A、B(tanshinoneA、B)、隐丹参酮(cryptotanshinone)、二氢丹参酮(dihydrotanshinone) 等醇溶性有效成分和以丹酚酸 B 为代表的水溶性有效成分2 。目前对丹参有效成分的提取普遍存在提取效率不高，分离纯化困难，有效成分纯度低等问题，本实验采用 L9(34)正交设计试验，选择影响丹参的超临界 CO2 提取工艺的四个重要因素，即萃取压力、提取时间、提取温度、解析压力，每个因素设三个水平，以丹参酮A 和丹酚酸 B 的含量为指标进行正交试验，从而筛选丹参的超临界 CO2 提3取最佳工艺，并与传统乙醇回流法进行比较，现将试验方法及结果简介如下。1 仪器与材料1.1 仪器岛津 LC20 高效液相色谱仪（日本） （LC20AB 溶剂输出泵，CBM20Alite 系统控制器， Prominence SIL20AC 自动进样器，CTO20A 柱温箱，SPD20AV UVVIS 检测器，LC Solution 工作站） ； 电子天平 BP121S； 丹参酮A 对照品（供含量测定用，批号为 110766200518，由中国药品生物制品检定所提供） ； 丹酚酸 B 对照品（供含量测定用，批号为 111562200605，由中国药品生物制品检定所提供） ； 其它试剂均为分析纯。1.2 材料本实验所用丹参药材购于成都市五块石药材市场。2 方法与结果2.1 超临界 CO2 萃取样品溶液的制备4取丹参药材，粉碎，过 20 目筛，按所选因素及水平 (见表 1)，采用 L9(34)正交表设计试验(见表 2)进行丹参的超临界 CO2 提取，考虑到丹酚酸 B 为代表的水溶性物质在超临界 CO2 中溶解度不大，故加入乙醇作为夹带剂，得 19 号萃取物，进行含量测定。2.2 乙醇回流提取样品溶液的制备取丹参药材，粉碎，过 20 目筛，加入 70 %乙醇 8 倍量，提取3 次，每次 1 h，滤过，合并滤液，进行含量测定。2.3 含量测定照高效液相色谱法（中国药典2005 年版一部附录D）进行测定3 。2.3.1 丹参酮A 含量测定色谱条件 色谱柱：Diamonsil C18（4.6 mm150 mm，5 m）色谱柱； 流动相：甲醇 水（7525） ； 流速 1.0 mlmin1； 检测波长：270nm； 柱温：35 ； 灵敏度：0.01AUFS，理论板数以丹参酮 A 峰计算不低于 3 000.2.3.2 丹酚酸 B 含量测定色谱条件 Diamonsil 5C18（4.6mm150 mm，5 m）色谱柱； 流动相：甲醇 乙腈甲酸 水（3010359） ； 流速为 1.0mlmin1； 检测波长286 nm； 柱温：35； 灵敏度：0.01 AUFS，理论板数以丹酚酸B 峰计算不低于 3 000.2.4 试验结果2.4.1 超临界 CO2 萃取试验结果 采用中国医统软件包（PEMS）进行处理分析（见表 3） 。 表 1 因素水平表表 2 正交试验设计及结果表 3 方差分析表2.4.2 乙醇回流提取试验结果 丹参酮A 含量为 8.43 mg/g，丹参酚酸 B 含量为 15.98 mg/g.3 结论上述结果表明：B 因素有显著的影响，影响因素BCAD； 且 B2、C3 、A2 、D1 为最佳，故丹参超临界 CO2 提取最佳工艺为：取丹参药材粗粉（过 20 目筛）进行萃取，萃取压力为 30 MPa，提取时间为 2 h，萃取温度为 40 ，解析压力为 5 MPa，与传统乙醇回流法相比较，丹参酮A 含量增加至1.25 倍，丹酚酸 B 含量增加至 1.58 倍。64 讨论超临界流体萃取技术(SFE) 是近年来发展应用起来的一种集萃取、分离于一体的纯化技术，具有选择性好、操作温度低、效率高、速度快、无残留溶剂等优点3 ，该技术 90 年代开始被引进用于中药提取。超临界 CO2 对低分子量的脂肪烃、低极性的亲脂性化合物，如醇、醚、醛等表现出优异的溶解性能。对难于溶解的强极性物质如多元醇、多元酸等可加入夹带剂提高溶解度。由于夹带剂的使用，超临界流体萃取技术在天然药物提取中得到了广泛的应用4 。丹参是活血通经的最常用中药，已知的活性成分为以丹参酮A为代表的丹参酮类脂溶性物质和以丹酚酸 B、原儿茶醛为代表的水溶性物质，彼此间的性质相差较为悬殊，常规的水提法、乙醇热回流法效果均不理想，且出膏率大。本次实验对丹参的超临界 CO2 提取工艺进行了研究，确定了超临界 CO2 提取丹参的最佳工艺条件，同时与传统乙醇回流法进行比较，结果表明丹参酮A 和丹酚酸 B的含量均有所提高，提取效果较好，实验结果可为丹参有效成分提取工艺的进一步研究提供基础。【参考文献】 1 中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典 一部S.7北京：化学工业出版社，2005：52.2 赵小亮，雷浩东，张 继.丹参有效成分提取的研究概述J .安徽农业科学，2007，35(6)：1 7951 796.3 李卫民，金 波，冯毅凡.中药现代化与超临界流体萃取技术M.北京：中国医药科技出版社，2002：93.4 萧效良，甘海涛，戚东林.CO2 超临界萃取技术提取中药有效成分J.化工进展，2001， （5）：7.