2010, 26( 1) :8287 神经解剖学杂志 Chinese Journal of Neuroanatomy雷公腾多甙对实验性变态反应性神经炎周围神经的影响3 通讯作者:李建萍 电话: 021253882045, E2mail: li2jianping2007163. com李建萍13,吕传真2,乔 凯2(1.上海交通大学医学院附属仁济医院神经内科,上海200127; 2.复旦大学医学院附属华山医院神经内科,上海200040)【摘 要 】 目的:了解雷公腾多甙(Tripterygium polyglucoside, TPG)对实验性变态反应性神经炎(experimental al2lergic neuritis, EAN)周围神经的影响。方法:在模型大鼠出现EAN临床症状后连续给予TPG 14 d,观察EAN临床症状、 周围神经电生理与组织病理的变化。结果:免疫后23 d EAN坐骨神经的运动神经传导速度和复合肌肉动作电位(compoundmuscle action potential, CMAP)的波幅明显降低,潜伏期和时限显著延长(P0. 05, Fig 1)。Fig . 1 Clinical scores2 TPG减轻EAN周围神经传导缺陷 免疫后23 d的电生理检测发现EAN组存在非 常严重的周围神经传导缺陷。坐骨神经的运动神经 传导速度和CMAP波幅降低明显, CMAP潜伏期和 时限显著延长。而TPG的干预明显减轻了上述异 常,其中CMAP潜伏期、 波幅和时限与EAN组比较 有显著性差异(表1)。此外,在TPG治疗组中没有发现CMAP波形离散,而这种脱髓鞘征象常见于EAN组。表1 坐骨神经电生理评估(n=6,?xs)组 别潜伏期(ms)波幅(mV)时限(ms)传导速度(m /s)对照组1. 600. 272. 330. 243. 730. 4642. 872. 02EAN组2. 650. 70a0. 870. 28a10. 522. 79a30. 327. 06aTPG治疗组1. 830. 28a b1. 820. 19a b5. 000. 26a b34. 081. 37aaP 0. 05vs对照组;bP 0. 05vsEAN组。3 TPG减轻EAN周围神经结构损害免疫后23 d EAN组的坐骨神经有大量炎性细胞侵入,密集分布于神经束的绝大部分区域,多数神经纤维有严重的髓鞘脱失并伴有相当程度的轴索变性,这些结构损害在TPG治疗组明显减轻(表2,Fig . 2)。表2 坐骨神经组织学评估(n=6,分值,?xs)组别炎性反应脱髓鞘轴索变性对照组000EAN组3. 170. 52a3. 080. 66a2. 080. 66aTPG治疗组1. 580. 38a b1. 580. 49a b0. 750. 27a baP 0. 05vs对照组;bP 0. 05vsEAN组。4 TPG减少EAN周围神经轴膜离子通道的丢失电压门控钠通道(voltage2gated Na+channels)和 延迟整流钾通道(delayed rectifying K+channels)是 周围神经的主要轴膜离子通道,分别集聚在有髓神经纤维郎飞结间隙和近结旁段( juxtaparanodes)的轴膜上。边缘清晰荧光明亮的钠、 钾通道蛋白着色见于对照组坐骨神经单纤维的结间隙和两侧轴膜上,其间的结旁段髓鞘MAG标记阳性,致密髓鞘层的GalC着色清晰地勾勒出有髓纤维的轮廓。免疫后23 d EAN组单纤维呈现严重的髓鞘破坏,多数纤维节段的髓鞘层发生泡沫样变性直至波纹状葱皮样剥脱,部分节段仅余轴索,相应结旁段髓鞘的MAG染色几乎检测不出。继发性轴索损害体现在轴膜钠、钾通道免疫标记微弱甚至完全消失。这些结构破坏在TPG治疗组中明显减轻,尤其轴膜离子通道随着髓鞘破坏的减轻而显著增加(表3, Fig . 3)。讨 论我们的观察表明TPG显著减轻了EAN周围神48神经解剖学杂志, 2010年1月第26卷第1期经结构与功能的损害。本实验诱导的EAN模型坐 骨神经的结构破坏非常严重,脱髓鞘和继发性轴索 变性累及绝大多数神经纤维。单纤维免疫组化揭示了神经纤维损伤的细节,结旁段和节间段髓鞘层破 坏以及轴膜离子通道蛋白的丢失。对于有髓纤维而 言,髓鞘层与轴索之间存在紧密的结构和功能关联, 一方面髓鞘层对于维持轴索结构完整是必须的,尤 其是结旁段髓鞘在轴膜离子通道的正常定位和维护中起着至关重要的作用;另一方面有髓纤维的跳跃式神经传导依赖于髓鞘层和轴膜离子通道的结构完 整性,其中电压门控钠通道和延迟整流钾通道在维 持有效的跳跃式传导中起着关键性作用7, 8 。神经电生理检测证实了EAN周围神经的结构异常导致 显著的神经传导功能缺陷。而TPG在EAN发病后 连续给药2 wk有效减轻了组织学的破坏和神经传 导的异常,一定程度维护了周围神经结构与功能的 完整性。表3 坐骨神经单纤维免疫组化评估(n=6,分值,?xs)组 别钠通道钾通道髓鞘相关糖蛋白半乳糖脑苷脂对照组6. 950. 186. 920. 226. 850. 237. 020. 34EAN组1. 620. 47a1. 780. 19a2. 270. 79a2. 420. 73aTPG治疗组3. 670. 52a b3. 530. 42a b3. 280. 17a b4. 170. 49a baP 0. 05vs对照组;bP 0. 05vsEAN组。Fig . 2 Histology of the sciatic nerve sections in the model rats on day 23 post immunization. A, C, E: The pictures from EAN rats, there were intensive inflammatory infiltration, severe demyelination and axonal degeneration in the nerve sections . B, D, F: The pictures from TPG2treated rats, the damages of the nerve were moderate. A and B were HE staining, C and D were labeling of MBP counterstained by hematoxylin, E and F were labeling ofNF counterstained by luxol fast blue.58李建萍等:雷公腾多甙对实验性变态反应性神经炎周围神经的影响一个人群研究(population2based study)已经发 现,即使使用了特异性免疫治疗,疾病急性期平均7 年后仍有48%的GBS患者符合后遗性神经病( re2sidual neuropathy)的诊断。研究者认为在疾病急性 期继发于节段性脱髓鞘的轴索损害是导致GBS后遗 性神经病的神经病理学基础9 。以往的一些研究也有类似的结论10, 11。因此减少疾病急性期的周围神经结构损害是改善GBS长期预后的可行途径。本研 究中TPG对EAN周围神经结构,尤其是轴膜离子通道的保护作用提示TPG可作为GBS患者的潜在治 疗用药以减轻持久的周围神经功能缺损。Fig . 3 I mmunohistochemistry of the teased2fibers from sciatic nerves in the model rats on day 23 post immunization. A, D, G, J: The pictures for the immunolabelingsof the teased2fibers from control rats . Na+channels aggregated in Ranvier nodal gaps . K+chan2 nels localized on juxtaparanodal axolemma.Paranodal myelin had MAG staining .GalC distributed along the membrane of Schwann cells . All immunofluorescence was bright and clear, illustrating the nor mal structures of myelinated fibers . B, E, H, K: The pictures showed the damaging teasted2fibers from EAN rats . Little immunofluorescence ofNa+channel, K+channel and MAG could be found.GalC staining presented demyelination with an onion skin2looking . C, F, I, L: The pictures from TPG2 treated rats, much more immunolabelingswere kept, implying less impair mentof the fibers . The illustrationswere the labelingsof Na+channels (A, B, C) , K+channels (D, E, F) , MAG (G, H, I) , and GalC (J, K, L).68神经解剖学杂志, 2010年1月第26卷第1期然而在本实验中, TPG干预对EAN病程及症状 严重程度的改善不明显。与EAN组相比, TPG治疗 组的临床症状仅轻微减轻,两者无统计学差异。我们推测这可能与2个因素有关。首先,本研究的观 察期较短,两周时间不足以对TPG的长期作用作出 评估。我们认为TPG虽然不能明显改善急性期症 状,但其神经结构保护作用很可能改善远期预后,这 一点可以通过延长观察时间来证实。其次,我们的先期工作发现, EAN周围神经的组织学损害程度与 临床严重程度在病程发展过程中不一致,即临床症 状先于神经组织学损害达到顶峰12 。许多GBS病 例也存在类似的不一致性,临床症状在起病后数天 迅速加剧,而神经纤维的脱髓鞘或轴索变性此时尚无充分时间形成。对此的一种解释是存在体液免疫 介导的神经功能损害13, 14 。因此我们的下一步工作是了解TPG干预对EAN免疫状态的影响,以及这种 影响与临床症状之间的关系。 我们现在已知GBS的远期预后并没有预期的理想,所以仍然需要寻找新的治疗手段以促进患者神 经功能恢复。雷公藤及其提取物作为一种有效且耐 受良好的药物应用于临床已有很长的历史,本研究 中TPG减少EAN周围神经损害的作用提示其可能 成为GBS的一种有效治疗药物,值得进一步的研究。参 考 文 献 1 HughesRA, SwanAV, RaphaelJC,et al.I mmunotherapy for Guil2lain2Barre syndrome: a systematic review J . Brain, 2007, 130:2245 - 2257. 2 ChioA, CocitoD, LeoneM,et al. Guillain2Barrsyndrome: a pro2spective, population2based incidence and outcome surveyJ . Neu2rology, 2003, 60: 1146 - 1150. 3 Bersano A, CarpoM, Allaria S,