中国药科大学学报JournalohCfinaPahrm atic alUniver sity1991;22(5):2 95一298295简报.导数色谱法鉴定高效液相色谱峰纯度吉宁高国强陈玉英(分析化学教研室)关锐词一阶导数;峰纯度;高效液相色谱法高效液相色谱法是分离分析复杂物质的有力工具。其定性定量的重要依据就是色谱峰的有关数据。当获得某一复杂物质的色谱图时,首先关心的是色谱峰的纯度如何,即一个色谱峰究竟是一种组分构成,还是包含了二种或二种以上的成分?关于这方面的研究一直比较活跃l 一,特别是二极管阵列检测器的应用,使这一鉴别更加直观,结果也更可靠。但这类仪器装置复杂且价格昂贵。我们自制了导数装置,直接与紫外检测器记录信号输出部分相连接,作 电信号模拟量导数法研 究,在获得普通色谱图的同时,得到其一阶导数色谱图。结果发现,在普通色谱图上完全看不出有峰重迭的情况下,其一阶导数色谱图可以敏锐地反 映出峰的不纯。自制的导数装置是通用 型 的,价格较低,不仅可用于各种国产紫外检测器,也可以连接在气相色谱仪、薄层扫描仪上,可以对色谱峰进行纯度鉴定。虽然实际 流出曲线的形状均有不同程度的拖 尾,但其导数图形却无本质的变化,故本文以理想情况为例。对(1 )式求一阶、二阶、三 阶导数可得下式:丝 d teo(t一tR)-卫二兰兰l犷 一沪了薪。2产C。沪滩孺(2)(卜止a)2卜二气牙(必一(3,=.e些d t zd3Cdt3C。as了薪(卜亡 盆)2 (t一t,)3-(t一t:)2a2(4)从数学角度看,对色谱流 出曲线可作任意阶导数。其导数函数的图象随导数阶数而变化的情况 见图1。理论部分理想色谱峰的流 出曲线可用 下式表达:一凸卜衬、C一甲,下于e一几沪以)U习乙万c:流出曲线上浓度c。:与进样量有关的常数t:流 出曲线的时间坐标饭:保留时间a:标准差Zeroder evativeFir stderev ativeFig1.Flgu r eof fu n etl o na nd is tfis rtd eriv ativ e如果一 色谱峰不纯,由A和B两组分构收稿日期1 991一04一2 6296中国药科大学学报22卷成,如图2所示:F地2.G.ner al C hromatq梦aPhyofA,BandA+B从图2中看出A十B混合物的色谱曲线不能分辨其中包含的两种组分,很容易被误认为是一单纯组分的色谱峰。我们对该混合物的流出曲线作一阶导数,则可获得图3所示的导数色谱图:F址3.G闭e r alC hrom at剑梦aPhya ndfis rtderlvativeehr omat- o肛即hyo fA+B.O一0Ge n e ra lchro ma t例犷ap h y;O一0F i rstde rivativ ec址。mat例梦叩hy图3可明 显地看出A、B二种组分的存在。如果再以A、B二组分的对照品分别进样,将纯组分的普通色谱图、导数色谱图与混合物的谱图对照,则可以有相当大的把握断定相应色谱峰的纯度。2实验部分2.1仅器与试荆高效液相色谱仪(上海科学仪器厂);紫外检测器(2 5 4nm,上海科学仪器厂);记录仪(双笔,上海大华仪表厂);甲醉(AR,南京化学试剂厂);禁(色谱纯)、联苯(色谱纯)、邻苯二甲酸二 丁酷(AR)、邻苯二 甲酸二甲醋(AR)、苯甲酸乙醋(AR)均为上海试剂一厂产品。2.2样品配制(l)蔡的甲醇溶液1.0 mg/ml;(2)联苯的甲醇溶液1.0 mg/m l;(3 )邻苯二甲酸二丁醋的甲醇溶液1.0mg/ml;(4 )禁、联苯混合溶液,由(1),(2)以1:1混合而成;(5 )邻苯二甲酸二 丁酷、蔡、联苯混合溶液,由(z),(2),(3)以1:l:1混合而成;( 6)邻苯二甲酸二 丁酷、苯甲酸乙酷混合溶液,由(3)、(5)以1:l混合而成。. 23色谱条件色谱柱:1 0林mc l。柱(自己装填);柱 长1 5em,柱径4.6m m,流动相:甲醇(10 0%);流速:loml/m i n;检钡归 皮长254nm;紫外检测器 灵敏度:火0.0 4;记录仪:普通色谱图x1 0mV,一阶导数色谱图x0.I v。2.4实验以禁、联苯、邻苯二甲酸二丁醋、邻苯二甲酸二 甲酷、苯甲酸乙酷分别单独进样(进样量均为1 0以),得到普通色谱图与其一阶导数色谱图,色谱数据见表1。Tab1.Retentiontimeo fsa幻叩口留翻mlPeRete ntio nt加e,m i nNaphtha】e ne2.6BIPhenyl2.6川b uy tlPhtha】ate2.4Eth y lb enzo ate2.4用禁、联苯混合溶液进样1 0.0时,得到普通色谱图和一阶导数色谱图见图4。将蔡、联苯溶液单独进样时获得的普通及一阶导数色谱图与蔡、联苯混合溶液的普通及一阶导数色谱图放在一起对照(图4),即可发现蔡、联苯混合溶液的一阶导数色谱图可敏锐地反映出该峰由二种组分构成。以邻苯二甲酸二 丁醋与苯甲醋乙酷的混合溶液进样,结果见图5。5期吉宁等:导数色谱法鉴定高效液相色谱峰纯度297NoPhthalene+BPIhenylNaPhthale!、生、尸;i了了/夕产.J一尹/ 、一一_尹/t/mnit/mniFgi4.G即relac址。川ta例犷aPhynad derlvtaivech rmota叩raphyofnaP hthlae朋,b1P heny la ndthei rmixtu邝 O一OG陌ner alchr o川atos rap h y;O一OF 妇tde riva t i veh cro mat阴梦ah Py八E。:,。e nz,? te. l ;,hv,Ben :。ateI、口、,. 、I、Z口、/、 如产、/、r 一尹沪、创尹、沪产 一一一一护,、 ,_一一、 、.一 一t/mi nF语5.Generala ndfisrtde rivativeh cromat例梦ah PyO feh ty lb enz oatedibutyl Phthalatea ndtheirm 饮tur e图5的结果也证实了一阶导数色谱法鉴定色谱峰纯度的优越性。用蔡、联苯、邻苯二甲酸二 丁酷的混合溶液进样,得到 图6。易辨别。但在其一阶导数色谱图上,可 明确蔡、联苯、邻苯二甲酸二 丁酷的存在。不仅如此,邻苯二甲酸二丁醋具有可被定量的前提条件。3讨论气而石-一一一厄)互 Fig6.Generala ndf诬srtderlva ti vech romatq梦aPh yO fthemx jtu r.eofn aPhtha】ene,b ih Pe nyla nddibuty lh Ptha】ate0一0Gen e阁c址。mat伪梦ah Py;O一0Fi s rtde rivativec址omat例梦aP hy从图6的普通色谱图上看,蔡、联苯完全重迭,邻苯二 甲酸二丁醋以肩峰的形式 出现,不鉴于导数色谱图上负半波噪音较大,影 响了负半波上的分辨率,故本实验在一阶导数的正半波上进行色谱峰纯度的鉴 定。参 考 文 献1Fa阴nma deA Aa ndFellAF.Th r e e一d imensio n al由tiv ative讲ctrO Chro matogramsinh ih g一沐rforma ne Cliqui dch ro mat企g rah Pya ndtheir而l Pie ation sfo r详akho moge neityv ali dation.月侧吐口面召月 匕如19 86;1 8 7:23 32Mar rJ GO,Hor va thP,C la rkB J,以以.AS S以资m朋tofp eakhomoge n eityi nHP L Cb ycon飞u Pte r一i ad团h Pot团io dea rr盯由c t etio n.月.以 资叭欢娥阮919 86;23:2 5 43Gr a ntAa ndB ha ttacha ry邓PK.App lic ationofde riv ativesp eetro sc0Pytoth ed st erminatio nofchromatogr即hiep eaku Prity.JC如哪画叩”内19 8 5;347:2 194Gemp erlineP J,Hamilto nJGCo ni dtionsf ordete Cti ngo v e r-laPp ed 侧组 kswithr Pi neia P】comp onenta nalysisinhyPhen ate deh ro matog raPh丈emeh t司5.为翻已记劲曰刀1 989;口l:2 2 J O298中国药科大学学报22卷DerivativeChromatograPhyMethd eforIdentifyingPurityofHP LCJ iNin,GaoGouqia ngandChenYuying烧娜艺州曰耐o f为妇寥勿o f己触溯晓幽今Ateeh niquef orva】 ldatlngPe aku Prityofh ih gp erfo rmanc ei l qui dehromatog raPhywa sd改rib ed.Iti sfo undthats everdyove ra tP少刃讲ak sCanb ei de ntifid eea sll ys uingthei frs tderivativ ee tehi nqu e,whentheimu Pri tyc anhardl yb eu jd邵沮fromth eeo nv ei f ti na nleh romatog ra r n s.NaP hth al ene,biPhenyl,eth y lb en zo ae t,i db uy tlh Pth a妞teandthei rmlxture sweres tud ledb ythi smethod.Theexe pr诵ena l teondi i to nswereasfol lows:琳ekedwith15 0X4.6m m(i.d.);YVVG一C, aH3:(10协m);moi blePha s e:methanol;deteetio nUV2 54nm;sa幻。Ples让e:10林1.h Ted erivativee tehniquec anb eus ednotonlyinHP L Cbuti as oinGCa nd T L C.T h lsmethod1 55加lPe,e rl lableande a sytooe pr ateKeywo rd sFi s rtde rivativ e;Pe aku Prity;HP L C中国医学、卫生期刊便览征订启事为了方便各类医院、医学院校图书馆、资料室订阅、查询邮局发行期刊、自办发行期刊以及交换资料,为方便广大医护人员订 阅、投稿以及学术交流的需要,中国医学、卫生期刊便览将向您展示全 国各种医学、卫 生期刊,杂志近千家。一册在手可纵览中华医学、中国医学、中国药物学、中国卫生、健康期刊的名称、刊期、主办单位、通迅地址、邮政编码、统一刊号、电话、主编、副主编、主要栏目以及订阅事宜等。便览特点:体积小,内容新、准确、简明、方便、实用。全书28 0页,3 2开本(压膜封面)单 价4.0 0 元,预计8月底前出版,订阅者可邮局汇款:大连海军政治学院图书馆 陈志安,邮政编码11 600 1,银行汇款:大连海军政治学院教保处,开户行:大连工商银行中山办事处帐号:020 08l 50 2l2 (注 明便览书款)。南京市医院制剂规范征订为医疗科学发展和管理工作的需要,总结医院制剂研究成果,南京市组织了医院、研 究所、药检 所和医药院校的药学技术人员撰写而成医院制剂规范,并蒙中国药学会药剂分科学会主任委员、中国药科大学刘国杰教授审定,已于1989年9月由南京大学出版社正式出版