高效液相色谱法测定茶叶中的茶多酚 摘要： 本文采用高效液相法，应用 L-3000 高效液相色谱系统建立了茶叶提取物中茶多酚的 分析分离方法，取得了理想的分离效果。实验证明该方法前处理简便，分析结果准确度高， 精密度好，非常适合用于测定绿茶提取物中的茶多酚。 一、引言 茶多酚是一类存在于茶树中的多羟基酚类化合物的简称， 尤以茶叶中含量最高， 干茶叶 中含茶多酚在 30%左右。茶多酚主要包括儿茶素类（黄烷酮类） ，黄酮，黄酮醇类，花青素 类，花白素类和酚酸及缩酚酸类。其中儿茶素类是茶多酚的主体组分，约占茶多酚总量的 90%左右。 茶多酚是茶叶中最具生物活性的成份， 尤其其中的主要组分儿茶素。 研究证实儿茶素具 有良好的抗氧化能力，同时具有抗肿瘤，抗诱变，预防龋齿等功效。因此儿茶素日益受到人 们重视，成为一类重要的食品添加剂和药物成分。 在茶多酚的色谱分析方法中，反相 HPLC 法是目前普遍使用，技术最为成熟的方法。本 文应用北京普源精仪科技有限责任公司自主研发的 RIGOL L-3000 高效液相色谱仪建立了绿 茶提取物中茶多酚的分离分析方法。 实验证明该方法分离效果好， 分析准确度高， 重现性好。 同时，RIGOL L-3000 高效液相色谱仪非常适用于绿茶提取物中茶多酚的分离分析工作。 二、实验部分 2.1 仪器及试剂 高效液相色谱仪：RIGOL L-3000 高效液相色谱系统（配 L-3300 自动进样器） （北京普源精 仪科技有限责任公司） ； 超纯水纯化系统：milli-Q（美国Millipore）； 天平：BT 124S （德国塞多利斯）； 粉碎机:天津泰斯特 FW80； 酸度计：PHSJ-4A(上海雷磁)； 移液枪： 10-100 l，100-1,000 l(eppendorf)； 绿茶提取物：某天然产物公司； 其余试剂均为市售 HPLC 级或分析纯。 2.2 色谱条件 色谱柱: Rigol：Compass , C18, 5 m，4.6 x 250mm id， 柱 温：35； 进样量:10L； 流动相：A：乙腈：水：TFA溶液 B：乙腈：水溶液，采用梯度洗脱 梯度方法： 时间(min) A% B% 0 100 0 20 100-25 0-75 25 25 75 25.1 100 0 30 100 0 流速: 1.0ml/min 检测波长：280 nm 2.3 试样准备 2.3.1 样品溶液的制备 精密称取绿茶提取物（从绿茶中经过一系列工业提取纯化制得）约 23mg，置于 10 ml 容量瓶中，加 80%乙醇溶解，超声提取 20 min，加 80%乙醇定容，以 0.45 m 微孔滤膜滤 过，滤液作为样品供试液备用。 2.4 实验方法 2.4.1 样品测试 在选定的色谱条件下以样品供试液进样，进样量 10l。 三、结果及讨论 3.1 样品的分离 图 1 绿茶提取物样品的色谱分离图 1 - EGC ; 2 - CAF ; 3 DL-C ; 4 - EC ; 5 -EGCG ; 6 GCG; 7-ECG 3.2 精密度实验 取茶叶提取物供试溶液连续进样 6 次, 进样量 10ul。 根据测定结果,计算保留时间及峰 面积的 RSD（相对标准偏差），得到如下结果： 图 2 样品重复性实验谱图 表 1 精密度实验结果 化合物 定性重复性RSD% 定量重复性RSD% EGC 0.2213 0.5687 CAF 0.1899 0.8121 DL-C 0.2354 0.7847 EC ; 0.6101 1.2534 EGCG 0.2714 0.9165 GCG 0.3112 1.0211 ECG 0.2415 0.8741 以上实验结果该方法可将绿茶提取物中茶多酚的多种成分分离开，定性定量重复性好。 3.3 流动相的选择实验 流动相的选择实验发现， 茶叶成分的分析多采用梯度洗脱， 其调节酸碱度的试剂多种多 样，可以用醋酸、磷酸、DMF、TFA 等，分析时间从 10 几分钟到 1 个小时不等。本实验先 采用磷酸盐做流动相分析，出峰少且峰型不理想，后改用 TFA，得到的峰型对称性比较好。 此外，文献采用的梯度方法是 A 相在 17 分钟内由 100%变化到 25%，采用这一方法实际的 结果显示，DL-C 和 EC 分离效果不理想，调整了梯度方法后，这一问题得到了解决。 四、结论 应用RIGOL L-3000高效液相色谱仪，采用本文的方法进行绿茶提取物中茶多酚活性物 质的分离分析实验，结果准确，重现性好。该仪器与方法结合，可充分满足绿茶提取物产品 质量控制的实验要求。