实验三 血球计数板的使用及酵母菌的直接计数微生物血球计数板直接计数法一、目的要求 二、基本原因：此法是利用血球计数板在显微镜下直接 进行测定。它观察在一定的容积中的微生物 的个体数目，然后推算出含菌数，包括死活 细胞均被计算在内，还有微小杂物也被计算 在内。这样得出结果往往偏高。这种方法常用 于形态个体较大的菌体或孢子。计数板是一块特制的厚玻璃片，玻片上有四个槽构成三个平台，中央平台又由一短槽隔成两半，其上各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中 央的一大格作为计数用，称为计数室。计数室刻度有2种：一种是25中格X16小格，而另一种为16中格X25小格，它们都是由400个小格组成。 每个大方格边长为1mm，则每个大方格面积为 1X1=1mm2。盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间高 度为0.1mm,所以每个计数室的体积为0.1 X 1 X 1=0.1mm3,每个大格有400个小格，所以每个小方格 体积为0.1/400=1/4000mm3=1/4000,000ml。血球计数板的分区与分格例一 例二 1大格=16中格 1大格=25中格 =16 X 25小格 =25 X 16小格 =400小格 =400小格 *#三、材料与仪器：1、待测样品：酵母菌悬液2、显微镜，血球计数板，接种环,盖玻片等。四、方法与步骤:1、取洁净的血球计数板，在计数室上面盖上 盖玻片。2、取稀释到一定程度（510个酵母/小格） 酵母液，从盖片边缘滴一小滴，使菌液自行 渗入，计数室内不能有气泡。先在低倍镜下 找到小方格网后，再转换高倍镜观察并计数 。四、方法与步骤:3、如用16 X 25计数板，只计四个角上中方 格的菌数。若是25 X 16的计数板，除计数四个角上的中格菌数外，还要计算中央中格的菌数。每个样品重复计数23次。计数时应不 时调节焦距，才能观察到不同深度的菌体。4、位于格线上的酵母菌一般只计此格的上方 线及左方线上的菌体。5、计数方法：样品中菌数/ml=每小格平均菌数 x 4000 ,000x 稀释倍数，本实验采用25 x 16规格， 要求数这些方格中的全部小格即80个小格。设：每个中方格的菌数为A，则每小格平均菌数=（A1+A2+A3+A4+A5)/80 A1+A2+A3+A4+A5 样品中的菌数/ml= X 4000,000 X 稀释倍数 80 结果记录：微生物名称 总菌数 个/ml第一个中格第二个中格第三个中格第四个中格第五个中格第一次 测定 第二次 测定平均四、测定注意事项:1、测定时，酵母菌液要摇匀，防止酵母 凝聚沉淀。2、活酵母有芽殖现象，若芽体达到母细 胞大小的一半时，即可作为两个菌体计 数，若芽体小于母细胞一半时为1个酵母 细胞。3、位于格线上的酵母菌一般只计此格的 上方线及左方线上的菌体。五、思考题：1、用血球计数板计数时，哪些步骤易造 成误差？2、血球计数板测定原理是什么？它有哪 些优点？