质反应，引起难治性休克；抑制环氧化酶活性。有学者指出：N O 是S A P 产生M S O F 的关键介质，N O 损伤的根本原因在于N O + O i 。一O N 0 0 ，O N ( X ) 一才是机体产生缺血再灌注损害的根本化学活性基团，因此N O ：O N O O 一在肠粘膜屏障损伤中占有核心地位。肠粘膜的损害与S A P 时分布性休克导致全身缺血再灌注损伤相关。肠牯膜对缺血再灌注损害非常敏感，再灌注后肠上皮通透性增加1 0倍并持续4 小时以上。我们的研究工作也发现实验性重症急性胰腺炎大鼠小肠组织和血清中M D A水平上升、S O D 活性显著降低，说明在炎性介质、细胞因子、内毒素等因素作用下。小肠牯膜不但存在缺血佴灌注损伤，而且黏膜自身抗氧化能力下降。缺血时肠上皮细胞缺氧，细胞能量生成和物质代谢障碍，毒性、酸性产物积聚，溶酶体酶释放，细胞亚结构破坏，组织损伤；再灌注时组织氧分压升高，无氧代谢生成的次黄嘌呤使H e i b e r - W e i s s 反应进行：o = - + H 2 0 2 一0 2 + O H + O H 一，使核酸和蛋白质变性，并产生毛细血管渗漏综台征，加重和扩大肠上皮细胞损伤。S O D 活性水平低下，分解O ；。能力不足，不能阻断自由基连锁反应。实验结果提示：S A P 小肠粘膜屏障结构和功能的损伤持续存在。A A 一2 于预后实验性重症急性胰腺炎大鼠小肠组织和血清中M D A 水平下降、S O D 活性显著升高，说明中药治疗后小肠粘膜缺血再灌注损伤减轻，黏膜自身抗氧化能力恢复。A A 一2 干预后N O 活性水平下调，提示炎性介质的自我损伤作用减弱。目前认为：小肠黏膜缺血或缺血再灌注损伤是介导细菌移位的主要机制，缺血、缺氧是小肠黏膜损伤和细菌移位的主要原因。因此，中医治则“通里攻下，活血化瘀，清热解毒”是通过保护小肠牯膜屏障、阻止肠源性感染和阻断急性胰腺炎重症化的内在机制，达到在临床上减少S A P 并发症和降低死亡率的治疗结果。可以认为：肠粘膜低灌流、氧化应激、炎性介质是S A P 小肠粘膜屏障损害三大因素。4 结论S A P 小肠粘膜屏障结构和功能的损伤持续存在；肠粘膜低灌流、氧化应激、炎性介质是S A P小肠牯膜屏障损害三大因素；“通里攻下，活血化瘀，清热解毒”对S A P 持续存在的小肠粘膜屏障结构和功能损伤有肯定的治疗作用。中药保护急性胰腺炎大鼠肠粘膜屏障的系列研究之二 肠粘膜形态学改变李钢陈海平王凯诚杭州市中医院外一科( 3 1 0 0 0 7 )肠粘膜形态学改变反应肠粘膜屏障结构损害，实验二通过中药合剂A A 一2 对实验性大鼠重症急性胰腺炎( s e v e r ea c u t ep a n c e t i t i s ，S A P ) 干预的研究，利用光镜、扫描电镜和透射电镜技术，连续、动态观察小肠粘膜组织病理进程和超微形态改变以及亚细胞结构变化，阐明中医治则“通里攻下，活血化瘀，清热解毒”对S A P 大鼠肠粘膜屏障结构损伤的保护作用。3 4 11 材料与方法11 实验动物与分组：健康S D I I 大鼠t 由浙江省实验医学动物中心提供，共8 0 只，体重2 0 0 1 0 9 ，雌性。在实验室用标准颗粒混合饲料喂养1 周后，随机分成三组( s On = 2 4 ，S A Pn = 2 4 ，A A 一2n = 2 4 ) 。动物禁食、自由饮水2 4 h r ，开放乙醚麻醉。改良式激活荆胰被膜均匀浸润法造模，术后双侧腹股沟皮下注射生理盐水2 m l 1 0 0 9 w ，饮水，保温。中药( A A 一2 ) 由杭州市中医院制剂室制备。A A 一2 组造模前2 h r 后q 8 h ，l m l 1 0 0 9 w 中药灌胃，连续给药至各取材时间；S A P 缉等量双蒸水灌胃；S O 组仅模拟手术创伤。1 2 主要设备：透射电镜，扫描电镜，光学显微镜。13 观察项目：13 1 扫描电镜观察：造模后8 h r 1 2 h r ，2 4 h r 3 6 h r 各组分别取存活大鼠s On = 2 4 、S A Pn = 34 、A A 一2n = 3 4 ，4 “ C ，采血处死，迅速取末端回肠3 e r a ( 距回盲部5 c m ) ，生理盐水漂洗3 次，在冰面上将末端回肠沿长轴剖开，浆膜面在冰面上展平，快速切成5 5 m m 2 的标本，并置人2 5 戊二醛溶液中固定，固定液温度4 。送浙江大学湖滨校区电镜室，行扫描电镜末端回肠黏膜绒毛和微绒毛形态连续观察。1 3 ，2 光镜组织学检查：造模后各组在8 h r 1 2 h r 2 4 h r 3 6 h r 分别取存活大鼠6 只( S 0 1 2 = 6 4 、S A Pn = 6 4 、A A 一2n = 6 4 ) ，室温，采血处死，在距回盲部8 c m 处取回肠5 c m ，生理盐水漂洗2 次，将末端回肠沿长轴剖开，浆膜面在滤纸上展平，空气中置5 m i n 后，1 0 甲醛固定、H E 染色、光镜组织学检查回肠黏膜病理损害程度，应用c K u s 小肠黏膜损伤分级评分，每个标本5 张切片，低倍镜下( 1 0 0 ) 观察，以损伤最严重的视野记分；4 8 h r 组行回肠黏膜病理损害读片( S On = 2 、S A Pn = 3 、A A 2n = 3 ) 。1 3 ，3 透射电镜观察：造模4 8 h r ，各组取存活大鼠s 0n = 2 、S A Pn = 3 、A A 一2n = 3 ，4 ，采血处死，迅速取上段空肠2 c m ( 距幽门5 e r a ) ，生理盐水漂洗3 次，在冰面上将上段空肠沿长轴剖开，浆膜面在冰面上展平，快速切成l 4 r a m 2 的标本。并置人2 5 戊二醛溶液中固定，固定液温度4 。送浙江大学华家池校区电镜室，行透射电镜上段空肠黏膜细胞超微结构观察和读片。14 统计学处理：统计学处理应用S P S S 软件进行，C h i u s 小肠黏膜损伤等级资料应用秩和检验，P 00 5 为差异有显著性。2 结果21 曰肠粘膜彤态改变：S O 组大鼠各时间段回肠桔膜绒毛形态正常完整，未见微绒毛倒伏、缺损、水肿、脱落和顶端抬高等形态改变。S A P8 h r 组回肠粘膜绒毛、微绒毛形态基本正常，表现为绒毛局灶性水肿，微绒毛顶端抬高、水肿；S A P1 2 h r 组回肠粘膜绒毛上皮脱落、基底膜裸露、组织破坏( 部分大片状、部分局灶性) ，微绒毛互相粘连、倒伏、局部破坏；S A P2 4 h r 组回肠牯膜广泛绒毛上皮破坏( 组织破坏星细小块状) 、组织高度水肿、细胞脱落渐进加重、基底部胶原纤维裸露，微绒毛大片状坏死、脱落、倒伏；S A P3 6 h r 组回肠粘膜广泛绒毛上皮破坏、组织破损( 自溶、坏死) 、严重水肿；微绒毛脱落、纤维性粘连、基底部破3 4 2坏。A A 一2 组各时间段回肠粘膜形态损伤均较S A P 组相应减轻。8 h r 组回肠粘膜绒毛、微绒毛形态基本正常；1 2 h r 组回肠粘膜组织损害轻、局部上皮脱落、有残存正常绒毛、部分基底膜裸露、绒毛僵硬，微绒毛排列相对规则、倒伏轻；2 4 h r 组回肠粘膜局灶性上皮脱落、破坏、水肿，大片组织基本正常；3 6 h r 组回肠枯膜上皮部分脱落、局灶性粘连形成、水肿明显减轻，可见组织修复现象。2 2 回肠粘膜病理变化：S O 组大鼠回肠粘膜绒毛结构完整，呈高柱状上皮，间质无水肿，未见炎症细胞浸润。S A P 组大鼠回肠牯膜出现严重破坏，表现为绒毛顶弥漫性溃疡，上皮细胞变性及灶性坏死、脱落，绒毛短小，中央乳糜管扩张，血管扩张，固有膜水肿，间质裸露和水肿，炎症细胞浸润，粘膜容积减少。经中药治疗后A A 一2 组大鼠回肠粘膜病理损害的程度较S A P 组大鼠有明显减轻。8 h r 、1 2 h r 、2 4 h r 、3 6 h r C h i u s小肠黏膜损伤连续评分( 每个标本5 张切片，以损伤最严重的视野记分) ，结果显示各组间统计学差异具显著性( T a b 1 4 ) 。T a b 18 h rC h i n sI n t e s t i n a lM n e lL 8 i o nS c o r ei nD i f f e r e n tG r o t t p ( 3 0 槐野组)P UU 0 l23 空肠细胞超微结构变化：S O 组大鼠空肠上皮细胞各结构清晰、完整，S A P 组大鼠空肠上皮细胞可见微绒毛倒伏、缺损，线粒体肿胀、嵴模糊、甚至空泡化，内质网扩张，细胞间隔增宽、上皮细胞间桥粒断裂，并可见细菌进入肠粘膜间质和在上皮细胞内穿越。中药治疗A A 一2 组大鼠空肠上皮细胞结构基本完整、清晰、微绒毛轻度排列紊乱，散在性脱落，肿胀的线粒体和扩张的内质网少见，细胞膜结构完整，细胞间隔增宽程度较S A P 组减轻，未见细菌进入肠粘膜闯质和在上皮细胞内穿越。3 讨论肠道是体内与外界相通的最太空腔器官，与呼吸道和泌尿道相比，肠道中所含细菌量最高，种类3 4 3多达4 0 0 种以上，其中G 一菌群在肠腔内生长、繁殖、代谢过程中释放大量内毒素。肠粘膜屏障是阻止肠腔内的肠道细菌和内毒索穿越肠壁向全身播散的最重要屏障。在上皮无缺损的情况下，肠粘膜细胞间紧密连接是水溶性大分子通透的动态闸门，间断开放时，允许水溶性代谢物质通过，而细菌和毒素正常时不能通过。肠粘膜紧密连接有两类：绒毛上皮问的紧密连接孔径小而层次多；腺管间细胞紧密连接孔径大而层次少。H 2 0 及小分子( 1 0 A ) 物质可通过两处连接，较大分子只能通过腺管间细胞紧密连接。任何原因导致肠粘膜屏障功能受损或紊乱。都将引起肠道细菌和内毒素向肠外组织器官播散。肠粘膜具有高代谢与绒毛微血管结构的特点，因此对血液灌流不足特别敏感，S A P 全身性血容量不足和小肠局部性缺血均可使肠系膜血流减少，绒毛呈低灌注状态，0 2 供出现短路现象，产生肠粘膜水肿，广泛的肠系膜缺血导致肠粘膜细胞坏死，绒毛脱离，肠壁固有膜断裂，我们的实验也显示出同样的结果。肠牯膜的完整性在肠屏障功能的的维持方面占有极为重要的地位，在肠上皮微绒毛缺失的情况下。肠屏障功能丧失6 2 8 6 。缺氧可使低灌流状态下肠道粘膜损害和渗透性增加。我们的工作也发现S A P 组大鼠肠上皮微绒毛缺损，缅胞超微结构损伤。细菌在肠上皮内穿越。保护应激和缺血造成的肠牯膜屏障结构和功能损害对于减少肠道细菌移位、肠源性感染、脓毒症以及提高临床疗效和降低死亡率具有十分重要的临床意义。实验结果表明中药合剂A A 一2 干预减轻S A P 肠粘膜屏障结构的损害。“通里攻下，活血化瘀，清热解毒”对S A P 肠粘膜屏障结构保护作用的内在因素有纠正小肠黏膜缺血、缺氧状态，S A P 一系列形态学变化与缺血、缺氧导致的病理损害一致；A A 一2 于预改善和缩短肠上皮细胞缺血、缺氧。缓解肠麻痹，促进肠道细菌和毒素外排，增加和增强小肠运动。刺激肠牿膜上皮细胞增殖、修复。下诃炎性介质。4 结论S A P 小肠黏膜结构破坏，屏障功能衰竭，成为肠道细菌移位引起肠源性感染的形态学基础；“通里攻下，活血化瘀，清热解毒”保护S A P 肠粘膜屏障结构。中药保护急性胰腺炎大鼠肠粘膜屏障的系列研究之三 细菌移位的连续观察李钢陈海平王凯诚杭州市中医院外一科( 3 1 0 0 0 7 )连续观察实验性重症急性胰腺炎( 9 e v e r ea c u t ep a n c r e a t i t i s ，s A P ) 大鼠门静脉血、腹水、胰腺和腹腔内重要器官细菌移人情况以及中药A A 一2 对细菌移位的阻止作用。1 材料与方法1 1 实验动物与分组：健康S D I 大鼠，由浙江省实验医学动物中心提供，共3 6 只，体重2 0 0 1 0 9 ，雌性。在实验室用3 4