如何选择荧光二抗如何选择荧光二抗 如何选择二抗-根据一抗种属及类型选择合适的二抗 二抗广义上是指专门和一抗进行特异性反应和结合的抗体， 在免疫学反应中， 经常 需要针对试验选择不同的二抗， 检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择， 同时在后 继试验中也会有不同的检测方案， 因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测 方案的要求，一般来说，选择合适的二抗需要从下面几个方面考虑： 【一抗的种属来源】 二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源， 例如： 如果你的一抗是小鼠源的单克隆 抗体，二抗则选抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可） ；如果一抗是从兔血清里 制备的兔源多克隆抗体， 则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。 即根据一抗的物种来源选择相 应的抗该物种的二抗。抗不同种属的原装进口二抗，包括抗小鼠、大鼠、兔、山羊、绵羊、 人、豚鼠、猪、马、牛、鸡、鸭等二抗。 【一抗的类别亚型】 二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。 这通常是针对单克隆抗体而言。 多克隆抗体主 要是 IgG 类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗 IgG 抗体。其中单克隆抗体的类别及亚类 通常会在产品说明书中都会有描述， 如果你的一抗是小鼠 IgM， 那么相应的二抗就应当是抗 小鼠 IgM。如果单克隆一抗是小鼠 IgG 的某一亚类（IgG1，IgG2a，IgG2b，IgG3） ，那么几 乎所有的抗小鼠 IgG 都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗，例如， 如果你的一抗是小鼠 IgG1，那么你可以选择抗 IgG1 的二抗，此种抗体在双标记实验中尤其 适合。在不清楚一抗为何种类/亚类的情况下，可以选用抗相应物种 IgG。通用的 IgG（H+L） 二抗， 或者特异性只结合 IgM 的 Anti IgM （mu） Antibody、 IgA 的 Anti IgA （alpha-Antibody、 IgE 的 Anti IgE （epsilon） Antibody 等。 【二抗的种属来源】 一般来说， 不同的种属来源与二抗的质量没有必然的联系， 来源于山羊的二抗与来 源于驴的二抗在一般的实验里没有太多的差别。 然而在一些特殊的实验里， 如双标实验里， 如果其中一个一抗是山羊来源的， 一个是小鼠来源的， 则相应的二抗分别要抗山羊和抗小鼠的二抗，这时候，二抗就不能选择山羊或者小鼠来源的。 【二抗的耦联标记】 一般来讲，耦联到二抗上的探针主要有酶（辣根过氧化酶 HRP 和碱性磷酸酶 AP 或其衍生物 APAAP，PAP） ，荧光基团（FITC、 Rhodamine、Texas Red、PE、Rhodamine、 Dylight 等） 、 生物素、 金颗粒。 选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验。 对于 Western Blot 和 ELISA，最常用的二抗是酶标二抗；而细胞或组织标记实验（细胞免疫化学，组织免疫 化学，流式细胞术）中通常使用荧光基团标记的二抗，免疫组化中也可以使用辣根过氧化酶 或碱性磷酸酶标记的二抗。 如果想要更大程度的放大检测信号， 可以使用 Biotin/Avidin 检测 系统。在一些荧光检测方案中，则需要选择不同的荧光标记；而金颗粒标记的二抗则更多的 应用于免疫电镜中。 【是否经过血清吸附过的二抗】 为减少二抗与样本的非特异性结合， 需提供不同血清吸附的原装进口二抗。如您的检测样本是人源的蛋白，一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗就需要选择抗小鼠源的二抗， 如果您对实验的特异性要求很高， 那我们向您推荐经过人血清吸附过的抗小鼠源的二抗， 这种二抗由于经过人血清吸附而排除了与人源组织（如 IgG 等）可能发生非特异性反应的 IgG，因此将非特异性结合降低到最低。 【Anti-IgG 还是 Anti-IgG, F（ab）2 fragment】 在一些如胸腺、脾脏、血液的组织以及造血细胞、淋巴细胞、B 细胞等细胞内， 通常含有较多的 Fc 受体， 这时候选择二抗时最好选择 Anti-IgG, F （ab ）2 fragment 这样的特异性二抗，这样就消除了由于 Fc 部分与 IgG 的非特异性结合。常规的 Anti-IgG （H+L）二抗与 IgG 的重链和轻链都有结合反应，即与 IgG的 Fc 的 F（ab）2 片段都能结合；由于 IgG、IgM、IgA 都有保守的轻链结构域，因此 Anti-IgG （H+L）与它们都有交叉反应。而 Anti-IgG, F（ab）2 fragment经过了 IgG Fc 片段的吸附，因此只与 IgG 的 F（ab）2 片段结合，然而 IgG、IgM、IgA 都有保守的轻链结构域，因此与它们也有交叉反应。 【Anti-IgG（H+L）、Anti-IgG （gamma）、Anti-IgM （mu）、Anti-IgA （alpha）】 在一些特殊的实验里，只需要检测样本里的 IgG 或者 IgM，常规的Anti-IgG （H+L）由于与 IgG 的重链和轻链都有结合反应，而 IgG、IgM、IgA都有保守的轻链结构域，因此不能特异性的检测某种类型的 IgG 或者 IgM。这时候就需要针对特殊类型 Ig 分子的二抗。按照标记分，有 HRP、AP、生物素等标记二抗，FITC、TRITC、Rhodamine、Cy3/5、Dylight 等荧光二抗；按照检测物种分，有抗人、大鼠、小鼠、猪、驴、绵羊、山羊、小鸡、马、兔、仓鼠、狗、牛， 以及多种细菌类二抗； 另外， 还有 IgG、 IgA、 IgM 以及 IgG（Fc） 、 IgG （ab ）2 等不同类型抗体。