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实验三、牛乳蛋白质的实验三、牛乳蛋白质的提取与鉴定提取与鉴定一、实验目的:一、实验目的: 了解蛋白质的化学性质; 掌握蛋白质的提取方法和鉴定理。 二、实验原理:二、实验原理: 牛乳中含丰富的蛋白质(水分87.8%、脂肪3.5%、蛋白质3.1%、乳糖4.9%、灰分0.7%、能量29.kg/100kg),其中主要是酪蛋白。酪蛋白在牛乳中约占总蛋白量的5/6。 1 1、酪蛋白提取的原理、酪蛋白提取的原理 蛋白质是含羧基和氨基的两性电解质,在某 一pH值溶液中,蛋白质分子所带的正电荷和 负电荷相等,蛋白质以两性离子状态存在, 这时溶液的pH值,称为该蛋白质的等电点( PI),酪蛋白PI=4.8 。 在等电点时,蛋白质所带净电荷为零, 溶解度最小,蛋白质沉淀析出,利用蛋白质 的这个特点可将蛋白质提取出来。 由于粗提出的酪蛋白中还含有脂肪,可 用乙醇和乙醚洗涤除去。2 2、酪蛋白鉴定的原理、酪蛋白鉴定的原理 酪蛋白中含有酪氨酸残基,酪氨酸残基的R基团为: 含酚羟基,可与米伦试剂反应先生成白色絮状沉淀,继续反应生成红色沉淀。三、操作步骤(一)酪蛋白的制备新鲜牛奶、醋酸纳缓冲液各5ml 40 分别加热至同样温度上清液:保留做鉴定(三)边加边摇混匀5min 沉淀 加4ml95%的乙醇 离心5分钟上清液:弃去沉淀:做鉴定2000r/min离心(二)酪蛋白的性质鉴定1、溶解度取3支试管+ 0.1M NaOH、 0.2M HCl、 10%NaCl各2ml+少许酪蛋白 振荡观察溶解快慢。2、米伦反应1ml H2O少许酪蛋白 加热观察10滴米伦试剂(三)乳清中可凝固性蛋白质鉴定:将第一次离心所得的上清液徐徐加热,出现蛋白质沉淀(球蛋白、清蛋白)。 四、实验结果 五、讨论实验室普通离心机使用方法 1.将离心机放在坚实而平整的工作台上; 2.在适用的离心管中加入样品,必须对称配重,否则会 损坏离心机; 3.按离心机转头的离心管位置刻度所对应孔插入,放下 离心机顶盖; 4.检查确认调速钮处于最低速位置; 5.打开电源开关,调速到需要的转速; 6.选择工作时间,调“选时”钮到需要的位置。 7.离心完成,离心机自然停止。 2、离心机使用注意事项 (1)严禁各种液体和杂物进入离心工作室, 那样会损坏主机; (2)仪器电源线应有良好的接地,以免发生 意外; (3)离心机工作时不要打开顶盖; (4)电压的高低以及不稳定现象直接影响本 机的转速(但不会损坏电机)。对转速要求 较高的使用场合,请使用稳压装置,使运转 速度稳定。
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