1目 录 一、英文缩略词表（abbreviation） . 4 二、中文摘要 . 6 三、英文摘要 . 9 四、前言 . 12 五、第一部分：补阳还五汤有效部位对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究 1、实验材料 1.1. 实验动物 . 14 1.2. 药品与试剂 . 14 1.3. 主要仪器 . 15 2、实验方法 2.1. 动物分组及给药 .15 2.2. 大鼠脑缺血再灌注(MCAO)损伤模型的制备.16 2.3. 神经功能缺失症状评分 .16 2.4. 大鼠血标本的采集及脑梗死体积的测定 .17 2.5. 血清各指标的测定 .17 2.6. 用于病理及免疫组化检测脑组织标本的采集 .17 2.7. HE 染色. 17 2.8. 免疫组织化学检测 . 18 2.9. 数据处理 . 19 3、实验结果 3.1. 补阳还五汤有效部位对 MCAO 大鼠神经功能缺失症状评分和脑梗死体积比的影响 . 19 3.2. 补阳还五汤有效部位对MCAO大鼠血清中LDH活性和MDA含量的影响.20 23.3. 补阳还五汤有效部位对 MCAO 大鼠血清细胞因子 TNF-、IL-1、IL-6含量的影响 .21 3.4. 补阳还五汤有效部位对 MCAO 大鼠脑组织病理形态学影响 . 22 3.5. 补阳还五汤有效部位对 MCAO 大鼠脑组织 TNF-、NF-B/p65 和 Nestin蛋白表达的影响 3.5.1 免疫组化法检测脑组织 TNF- 蛋白表达水平 . 24 3.5.2 免疫组化法检测脑组织 NF-B/p65 蛋白表达水平. 26 3.5.3 免疫组化法检测脑组织 Nestin 蛋白表达水平. 28 4、讨论 4.1. MCAO 动物模型的选择 . 30 4.2. 补阳还五汤有效部位对 MCAO 再灌注损伤大鼠脑梗死体积的影响 . 31 4.3. 补阳还五汤有效部位对 MCAO 再灌注损伤大鼠炎症反应的影响 . 31 4.4. 补阳还五汤有效部位对 MCAO 再灌注损伤大鼠 TNF-、NF-B/p65 和Nestin 蛋白表达水平的影响. 32 5、结论. 34 六、 第二部分：补阳还五汤有效部位对 HT22 海马神经元细胞缺糖缺氧损伤的保护作用及机制研究 1实验材料 1.1 HT22 海马神经元细胞株. 35 1.2 药品与试剂 . 35 1.3 主要仪器 . 36 2实验方法 2.1 HT22 海马神经元细胞的培养.36 2.2 Na2S2O4致 HT22 海马神经元细胞缺糖缺氧损伤模型的制备及分组. 37 2.3 细胞上清液中 LDH 和 MDA 的测定. 37 2.4 MTT 法测 HT22 海马神经元细胞活力值. 37 2.5 Hoechst33342 荧光核染色检测 HT22 海马神经元细胞凋亡. 37 32.6 流式细胞仪（FCM）测 HT22 海马神经元细胞凋亡率. 38 2.7 统计学处理 . 38 3、实验结果 3.1 补阳还五汤有效部位对 HT22 海马神经元细胞缺糖缺氧损伤的形态学影响38 3.2 补阳还五汤有效部位对 HT22 海马神经元缺糖缺氧损伤细胞存活率、 LDH和 MDA 影响. 40 3.3 补阳还五汤有效部位对 HT22 海马神经元细胞缺糖缺氧损伤凋亡的影响41 3.4 补阳还五汤有效部位对 HT22 海马神经元细胞缺糖缺氧损伤凋亡率的影响43 4、讨论 4.1 阳性药 EGB 的选择 . 46 4.2 补阳还五汤有效部位对 HT22 海马神经元细胞活力影响. 47 4.3 补阳还五汤有效部位对 HT22 海马神经元细胞凋亡影响. 47 5、结论 . 48 六、参考文献 . 49 七、附录 . 55 八、致谢 .