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普通电泳的原理 生物大分子(如蛋白质,核酸,多糖等) 大多都有阳离子和阴离子基团,称为两性离 子。常以颗粒分散在溶液中,它们的静电 荷取决于介质的H+浓度或与其他大分子的 相互作用。 在电场中,带电颗粒向阴极或阳极迁移,迁 移的方向取决于它们带电的符号,这种迁移 现象即所谓电泳。 电泳的样品支持物,生物实验大多为凝胶 。普通电泳设备组成电泳仪 + 电泳槽普通电泳槽分三种:水平电泳垂直电泳转移电泳水平电泳 用琼脂糖凝胶作支持物的电泳法。借助琼 脂糖凝胶的分子筛作用,核酸片段因其分 子量或分子形状不同,电泳移动速度有差 异而分离。 是基因操作中常用的重要方法。水平电泳槽图片垂直电泳 作用:用于分离蛋白质和寡糖核苷酸。 作用原理 聚丙烯酰胺凝胶为网状结构,具 有分子筛效应。它有两种形式:非变性聚 丙烯酰胺凝胶及SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS- PAGE);非变性聚丙烯酰胺凝胶,在电泳 的过程中,蛋白质能够保持完整状态,并 依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状 及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开。垂直电泳槽图片湿转电泳 将混杂的蛋白质经聚丙烯酰胺凝胶电泳分 离后,转移至固相膜上,再用标记的抗体 或二抗与之反应,以显示膜上特定的蛋白 条带。 整个电泳过程完全浸在缓冲液中完成的称 为湿转电泳湿转电泳槽图片半干转电泳 将混杂的蛋白质经聚丙烯酰胺凝胶电泳分 离后,转移至固相膜上,再用标记的抗体 或二抗与之反应,以显示膜上特定的蛋白 条带。 膜和滤纸均为浸湿而非整个电泳过程完全 浸在缓冲液中完成的称为半干转电泳半干转电泳槽图片1.安全盖 2.带有弹簧锁的负 电极装置 3.滤纸 4.凝胶 5.膜 6.滤纸 7.带弹簧的正电极 平台固定于 4 个固定 栓上 8.电缆 9.底座普通电泳仪大体分三种基础电泳仪高电流电泳仪高电压电泳仪基础电泳仪 参数:一般电压为几百伏特,电流为几百 毫安。 应用:主要用于水平电泳、垂直电泳、湿 转电泳高电流电泳仪 参数:一般电压为几百伏特,电流为几千 毫安。 应用:主要应用于水平电泳、垂直电泳、 湿转电泳、半干转电泳高电压电泳仪 参数:一般电压为几千伏特,电流为几百 毫安。 应用:主要应用于等电聚焦电泳、DNA测序 电泳等。THANKS!具体操作及注意事项请见下一个PPT
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