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实验三 外周血单个核细胞分离实验目的n掌握外周血单个核细胞分离的原理与操作n掌握外周血单个核细胞的概念实验原理人外周血单单个核细细胞 (peripheral blood mononuclear cell, PBMC)包括淋巴细细胞 和单单核细细胞。n单单个核细细胞的体积积、形态态和比重与外周 血其他细细胞不同。因此利用一种介于 1.075-1.090之间间的聚蔗糖-泛影葡胺( ficoll-hypaque)分离液作密度梯度离 心,离心后不同比重的血细细胞在分离液 中呈梯度分布,从而分离出PBMC。人血液中各种细胞的密度如下:红细胞:1.093 白细胞:1.092 淋巴细胞和单核细胞:1.075-1.090 血小板:1.030-1.035F/H= 1.0770.001实验步骤1.用抗凝管抽取外周血2ml; 2.将装有2ml分离液的试管微微倾斜,用吸管 将抽取的抗凝外周血缓缓加入到分离液上 层,保持液面分层清晰; 3.水平离心机中离心,2000rpm,20min; 4.将离心好的试管轻轻拿出,用毛细吸管吸取 PBMC层细胞涂片; 5.将涂片进行瑞氏染色。
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