基金申请技巧讲座第四军医大学科研部苏景宽苏景宽第一部分如何撰写申请书一、摘一、摘 要（限要（限400400字）字）包括：研究方法、内容、目标、科学意义。包括：研究方法、内容、目标、科学意义。如：采用方法，进行研究，阐明机制或揭示规律，为奠定基础提供思路。作用：画龙点睛效果：引发评议专家的兴趣，使其产生探个究竟的好奇心“他到底是怎么做的 ？ ”采用改良的消减杂交技术采用改良的消减杂交技术建立老年性白内障晶状建立老年性白内障晶状体上皮细胞差异表达基因文库并制备基因芯片，利用体上皮细胞差异表达基因文库并制备基因芯片，利用此芯片筛选出白内障相关基因。此芯片筛选出白内障相关基因。通过基因转染在体和通过基因转染在体和培养的晶状体上皮细胞，培养的晶状体上皮细胞，观察细胞的形态、增殖和凋观察细胞的形态、增殖和凋亡、骨架蛋白及晶状体蛋白的变化，研究基因的功能亡、骨架蛋白及晶状体蛋白的变化，研究基因的功能。从晶状体上皮细胞的角度阐明老年性白内障发生的从晶状体上皮细胞的角度阐明老年性白内障发生的分子生物学机制，分子生物学机制，为防治白内障提供新思路和理论依为防治白内障提供新思路和理论依据。据。二、立论依据二、立论依据对基础研究，对基础研究，着重结合国际科学发展趋势，着重结合国际科学发展趋势，论述论述科学意义科学意义对应用基础研究，对应用基础研究，着重结合学科前沿，围着重结合学科前沿，围绕国民经济和社会发展中的重要科技问题绕国民经济和社会发展中的重要科技问题论述论述应用前景应用前景在立论依据的阐述中，对研究领域、研究方向、在立论依据的阐述中，对研究领域、研究方向、 具体科学问题的理解具体科学问题的理解研究领域：研究领域：白内障的研究，包括发病机制、预防、诊断、白内障的研究，包括发病机制、预防、诊断、 治疗措施等研究治疗措施等研究研究方向：研究方向：白内障发病机制的研究，包括环境因素、致病白内障发病机制的研究，包括环境因素、致病靶点、细胞水平、分子水平研究等靶点、细胞水平、分子水平研究等科学问题：科学问题：白内障发病过程中的相关基因研究，包括致病白内障发病过程中的相关基因研究，包括致病基因筛选、功能研究、调控机制、信号转导等基因筛选、功能研究、调控机制、信号转导等在研究领域层面从研究方向展开围绕某一具体科学问题（本项目研究目标）进行归纳分析提出研究设想从研究领域切入研究意义国内外现状分析1 1、项目的研究意义、项目的研究意义存在问题：存在问题：对科学意义的阐述不足或夸大对科学意义的阐述不足或夸大撰写方法：撰写方法：从领域入手，提出主要问题，引出热点研究方向。从领域入手，提出主要问题，引出热点研究方向。围绕热点研究方向进行简要分析，找出目前尚未解决的围绕热点研究方向进行简要分析，找出目前尚未解决的具体科学问题，以此为切入点提出假设，阐述如果解决了该具体科学问题，以此为切入点提出假设，阐述如果解决了该问题（研究目标），对该领域甚至相关领域的科学贡献（理问题（研究目标），对该领域甚至相关领域的科学贡献（理论意义或应用前景）。论意义或应用前景）。老年性白内障老年性白内障是与年龄相关的疾病，随着年龄的增是与年龄相关的疾病，随着年龄的增加，其发病比率也不断升高。特别是人类趋向老龄化，加，其发病比率也不断升高。特别是人类趋向老龄化，白内障的患病人数还将持续增加。目前，白内障的患病人数还将持续增加。目前，它已是人类它已是人类第一位的致盲疾病。第一位的致盲疾病。迄今为止迄今为止, , 治疗白内障唯一有效的治疗白内障唯一有效的方法是通过手术摘除混浊的晶状体并植入人工晶状体。方法是通过手术摘除混浊的晶状体并植入人工晶状体。虽然手术后患者可以恢复良好的视力，但是不可避免的虽然手术后患者可以恢复良好的视力，但是不可避免的术后并发症以及手术设备、材料耗资巨大，治疗白内障术后并发症以及手术设备、材料耗资巨大，治疗白内障所花费的资金已成为世界各国包括富裕的发达国家严重所花费的资金已成为世界各国包括富裕的发达国家严重的医疗负担。最近的调查表明，如果把老年性白内障的的医疗负担。最近的调查表明，如果把老年性白内障的发病时间延缓发病时间延缓1010年，白内障手术的数量就会减少年，白内障手术的数量就会减少45%45%11。所以，一些学者认为通过所以，一些学者认为通过预防白内障预防白内障发生或延缓其发展发生或延缓其发展的途径征服白内障的途径征服白内障已成为一项全球性的社会和社会经济已成为一项全球性的社会和社会经济问题问题22。但是目前我们对老年性白内障但是目前我们对老年性白内障发病机理发病机理的认识的认识还不十分还不十分清楚。清楚。多年以来许多学者的研究结果证实晶状体上皮细胞在多年以来许多学者的研究结果证实晶状体上皮细胞在老年性白内障发生中起重要的作用，但对其中进一步的基因老年性白内障发生中起重要的作用，但对其中进一步的基因调控知之甚少。如果从参与老年性白内障调控知之甚少。如果从参与老年性白内障晶状体上皮细胞变晶状体上皮细胞变化的相关基因化的相关基因入手，研究基因的生物学功能，有可能抓住引入手，研究基因的生物学功能，有可能抓住引起白内障发生、发展的主要环节。据此，本研究拟利用改良起白内障发生、发展的主要环节。据此，本研究拟利用改良的消减杂交技术和基因芯片技术准确、全面、快速的特点，的消减杂交技术和基因芯片技术准确、全面、快速的特点，以晶状体上皮细胞为研究对象，一次性筛选出老年性白内障以晶状体上皮细胞为研究对象，一次性筛选出老年性白内障全部有差异表达的基因，从中再筛选出与白内障相关基因，全部有差异表达的基因，从中再筛选出与白内障相关基因，并着重对其功能进行研究，从基因水平阐明白内障的发病机并着重对其功能进行研究，从基因水平阐明白内障的发病机制，为防治白内障提供新思路和理论依据。制，为防治白内障提供新思路和理论依据。2 2、国内外现状分析（与综述的区别）、国内外现状分析（与综述的区别）存在问题：存在问题：A A、低水平重复：、低水平重复：不了解最新进展，对国内外现不了解最新进展，对国内外现状缺乏真正了解，提出的问题别人已解决。状缺乏真正了解，提出的问题别人已解决。B B、文献复习不全：、文献复习不全：检索文献方法不当、选择关键词检索文献方法不当、选择关键词不妥，甚至人为缩小检索范围。不妥，甚至人为缩小检索范围。C C、总结表达不够：、总结表达不够：对国内外现状缺乏归纳分析，对国内外现状缺乏归纳分析， 只是简单罗列，缺乏逻辑性和针对性。只是简单罗列，缺乏逻辑性和针对性。D D 、对方法原理理解不够：对方法原理理解不够：对研究方法不熟悉，简对研究方法不熟悉，简单移植或夸大其作用，缺乏实际应用的可行性。单移植或夸大其作用，缺乏实际应用的可行性。撰写方法：撰写方法：要要紧紧围绕紧紧围绕本次申请项目的主题。本次申请项目的主题。A A、从领域切入，、从领域切入，简要论述简要论述国内外研究国内外研究成果成果，并引，并引出当前的热点研究方向。出当前的热点研究方向。B B、从研究方向展开，、从研究方向展开，较详细地分析较详细地分析国内外的研究国内外的研究进展进展，阐明在该方向上存在的问题。，阐明在该方向上存在的问题。C C、围绕存在的问题，结合国内外以往的研究、围绕存在的问题，结合国内外以往的研究结果、结果、当前的当前的现状现状及今后的及今后的发展趋势发展趋势，详细论述和分详细论述和分析析这些问题产生的原因，这些问题产生的原因，提出该方面的空白点、提出该方面的空白点、未知数、以及研究的难点、焦点，未知数、以及研究的难点、焦点，从而为自己从而为自己申请项目确立研究目标奠定充分的立论基础。申请项目确立研究目标奠定充分的立论基础。DD、对拟采用的技术方法进行介绍和分析。、对拟采用的技术方法进行介绍和分析。成熟的方法成熟的方法重点介绍可以应用于本研究的理论依重点介绍可以应用于本研究的理论依 据和实验依据。据和实验依据。新方法在详细介绍其原理的基础上新方法在详细介绍其原理的基础上，阐明可以应，阐明可以应用于本研究的理论依据和实验依据。用于本研究的理论依据和实验依据。需特别注意的问题：需特别注意的问题：必须对所运用的技术方法的必须对所运用的技术方法的原理、流程尤其是在实际运用中可能出现的问题要十原理、流程尤其是在实际运用中可能出现的问题要十分清楚，分清楚，绝不能是一种简单的移植。绝不能是一种简单的移植。例如：抗体例如：抗体 + + 功能基团，理论上可以实现融合，功能基团，理论上可以实现融合，但存在但存在“活性、表达载体选择、纯化等问题。活性、表达载体选择、纯化等问题。E E、提出本项目的研究设想。、提出本项目的研究设想。防治白内障必须针对其发病的主要环节。多年以来防治白内障必须针对其发病的主要环节。多年以来，国内外学者从不同的角度探讨白内障的发生机理。，国内外学者从不同的角度探讨白内障的发生机理。就就致病的环境因素讲，致病的环境因素讲，氧化因子、紫外线辐射、晶状体周氧化因子、紫外线辐射、晶状体周围环境中离子浓度改变及一些生长因子、细胞因子的改围环境中离子浓度改变及一些生长因子、细胞因子的改变均与老年性白内障的发生有关。变均与老年性白内障的发生有关。就研究的部位分，就研究的部位分，晶晶状体中皮质与核的蛋白质改变及晶状体纤维的改变与白状体中皮质与核的蛋白质改变及晶状体纤维的改变与白内障的形成有关，而位于晶状体前囊膜下单层的内障的形成有关，而位于晶状体前囊膜下单层的晶状体晶状体上皮细胞上皮细胞在白内障的形成中的变化更引人关注。在白内障的形成中的变化更引人关注。因为因为晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞是晶状体中唯一有分裂活性、是晶状体中唯一有分裂活性、数量相对稳定的细胞，它们分裂、分化出晶状体纤维细数量相对稳定的细胞，它们分裂、分化出晶状体纤维细胞、产生晶体蛋白，终生不停息，形成了晶状体均一、胞、产生晶体蛋白，终生不停息，形成了晶状体均一、对称的结构，对维持晶状体的透明起重要作用。不仅如对称的结构，对维持晶状体的透明起重要作用。不仅如此，此，晶状体上皮细胞晶状体上皮细胞还是晶状体中还是晶状体中受外来刺激影响受外来刺激影响较早较早的部位，已有研究证实老年性白内障的晶状体上皮细胞的部位，已有研究证实老年性白内障的晶状体上皮细胞还发生还发生退行性变、细胞膜通透性增加、细胞内酶活性改退行性变、细胞膜通透性增加、细胞内酶活性改变、细胞数量减少、凋亡细胞增多等改变，变、细胞数量减少、凋亡细胞增多等改变，与单纯老化与单纯老化的晶状体之间存在差异的晶状体之间存在差异3-53-5 。 体外实验也证实体外实验也证实多种因素多种因素(H2O2(H2O2、UV-BUV-B、晶状体、晶状体蛋白的自身抗体蛋白的自身抗体) )诱发的白内障模型中诱发的白内障模型中晶状体上皮的损晶状体上皮的损伤是晶状体混浊的主要环节伤是晶状体混浊的主要环节6-86-8。因此，从晶状体上皮因此，从晶状体上皮细胞的变化入手探讨白内障的成因，有可能抓住揭示白细胞的变化入手探讨白内障的成因，有可能抓住揭示白内障发病机理的主要环节。而内障发病机理的主要环节。而晶状体上皮细胞变化的基晶状体上皮细胞变化的基因调控机制因调控机制是问题的关键所在，也是有待我们深入研究是问题的关键所在，也是有待我们深入研究的问题。的问题。白内障的形成与白内障的形成与晶状体的老化晶状体的老化密不可分，是晶状密不可分，是晶状体老化的极端表现。晶状体的老化是多种因素相互作用体老化的极端表现。晶状体的老化是多种因素相互作用的结果，的结果，包括基因的和非基因的随机变化的不断积累，包括基因的和非基因的随机变化的不断积累，也有程序性的、非随机性的组织特异性也有程序性的、非随机性的组织特异性多种基因表达的多种基因表达的改变。改变。目前，国内外对白内障相关基因的研究主要以下目前，国内外对白内障相关基因的研究主要以下三方面：三方面：一是对体外培养的晶状体白内障模型及上皮细胞的一是对体外培养的晶状体白内障模型