1西双版纳地区铁皮石斛及齿瓣石斛品质的初步研究【摘要】 目的对比铁皮石斛与其常用替代品在品质方面的差异。方法采用苯酚-硫酸法与重量法，研究对比了西双版纳地区不同来源铁皮石斛及齿瓣石斛多糖含量及折干率的差异。结果铁皮石斛的多糖含量及折干率分别为 20.29%，20.16% ，齿瓣石斛为16.93%，18.92%。结论不同栽培类型的铁皮石斛存在品质差异；齿瓣石斛的野生苗品质优于组培苗。 【关键词】 铁皮石斛； 齿瓣石斛； 多糖； 折干率Abstract：ObjectiveTo compare the difference of quality between Dendrobium candidum and Dendrobium devonianum.MethodsPhenol-Sulphate Acid method and gravimetrict method were used to measure polysaccharides contents from Dendrobium and their weights after baking.ResultsThe polysaccharides content and drying rate of Dendrobium candidum were 20.29%,20.16% respectively, that of Dendrobium devonianum 16.93%, 18.92% separately.ConclusionThe cultivated type of Dendrobium candidum is significantly different in quality. The quality of natural seedling of Dendrobium devonianum is superior to 2that of tissue culture seedling.Key words：Dendrobium candidum; Dendrobium devonianum; Polysaccharides content; Drying rate石斛属(Dendrobium)是兰科中的第二大属，我国有 76 种(74个种，2 个变种)，主要分布于华南及西南地区，有近 40 种可作药用。石斛作为一种名贵中药被本草纲目收录，其有养胃生津、滋阴清热、明目的功能,用于阴伤津亏, 口干烦渴,食少干呕, 病后虚热,目暗不明等症状。石斛属植物中化学成分较为复杂，其主要有效成分为石斛多糖及生物碱，另外还有酚类、菲类、芪类、倍半萜类及香豆素等1 。现代药理实验证明，它们具有抗肿瘤、免疫调节、抗氧化、抗血小板聚集、扩张血管、降低血糖等多种活性2，3 ，同时在治疗胃肠道疾病和治疗白内障方面也有很好疗效。西双版纳有着丰富的石斛资源，是我国石斛属种类分布最多的地区之一，有石斛 43 种、1 变种4 。近年来，在西双版纳地区建成了铁皮石斛规范化生产基地，并采用人工仿野生栽培石斛的技术，对石斛属类植物进行了规模化的人工种植，目前已成为石斛类产品的主要原料之一。另外，在西双版纳地区，齿瓣石斛被大量用作铁皮石斛的替代品，有关这几种石斛质量差异尚未见报道。本文从石斛多糖含量及折干率的角度，比较了因不同栽培类型及栽培环3境导致的石斛品质的差异，为石斛的种植及应用提供理论依据。1 材料与仪器1.1 材料铁皮石斛Dendrobium candidum 采集于 2007-11-20，铁皮石斛Dendrobium candidum 采集于 2008-01-14，齿瓣石斛 Dendrobium devonianum 采集于 2007-11-20，采样产地均为云南西双版纳。1.2 试剂与仪器苯酚、浓硫酸、无水乙醇、氯仿、正丁醇等均为分析纯。旋转蒸发器 R-210(瑞士布奇)，TU-1901 新世纪紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司) ， 数显恒温水浴锅 HH-4(常州国华电器有限公司)，GZX-9140 恒温数显鼓风干燥箱 (上海博讯设备有限公司)， METTLER TOLEDO 分析天平 AB135-S，PL203 。2 方法2.1 折干率分别将新鲜采集的铁皮石斛样品（ 5 种 10 份，勐4海县)，齿瓣石斛样品（5 种 5 份，勐海县，景洪市普文镇）晾干，切成小段（约 1 cm） ，在恒温鼓风干燥箱中 50 干燥，称重，计算折干率。2.2 线性关系精确称取在 105干燥至恒重的葡萄糖标准品100 mg，置 100 ml 量瓶中，用蒸馏水溶解、定容。精取 10 ml于 100 ml 量瓶中，用蒸馏水定容即得。每 1 ml 溶液含葡萄糖 0.1 mg。精取葡萄糖对照液 0.1，0.2 ，0.3， 0.4，0.5 ，0.6.，0.7 ml，分别置于量瓶中，加蒸馏水使成 2.0 ml，各加苯酚试剂 1.0 ml，在旋转混匀器上摇匀，迅速滴加浓硫酸 5.0 ml，摇匀，放置 5 min，置沸水浴中加热 15 min，冷水迅速冷却至室温。另以蒸馏水2.0 ml 同法操作，作为空白对照，在 490 nm 处测其吸光度。2.3 多糖提取参照李满飞5方法改良，精密称取各石斛干燥后粗粉 10 g ，加入石油醚（6090）50 ml，回流提取 1 h脱脂。过滤，挥干溶媒，以 80乙醇回流提取 1 h（提取分离干扰组分） ，趁热过滤，挥干溶媒，加入蒸馏水 250 ml 回流提取 2 次，1 h/次，趁热过滤，减压浓缩至 30 ml，用 0.1活性炭脱色，过滤，加入 95乙醇使溶液含醇 80，静置过夜，分出沉淀物溶于蒸馏水，Sevag 法脱蛋白。上清液如上述醇沉，沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤。将沉淀再如上脱色、醇沉，得到多糖精制品于560烘干备用。2.4 换算因素精确称取 60干燥至恒重的石斛多糖精制品各10 mg，分别置于 100 ml 量瓶，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，作为储备液。分别精取多糖储备液 0.3 ml，按照标准曲线制备的方法操作，测定吸收度。另精取葡萄糖标准溶液 0.3ml（含葡萄糖 30 g） ，同法操作，求出石斛多糖溶液中的葡萄糖含量，按下式计算换算因素,F= 多糖浓度（gml-1）/多糖溶液的葡萄糖含量（gml-1 ）稀释倍数。2.5 样品多糖测定精密称取 60恒重的各石斛粗粉 0.5 g，置圆底烧瓶，用石油醚（6090）脱脂 1 h，加入 80乙醇 100 ml 回流提取 1 h，趁热过滤。药渣用 80热乙醇 8 ml 洗涤 3 次，再用 85 ml 蒸馏水回流提取 1 h，趁热过滤，用热水洗涤药渣和烧瓶，冷却后在 250 ml 量瓶中以水定容。分别精取 0.3 ml，按标准曲线项下操作，按下式计算样品中多糖的含量。多糖含量（）CsDFV/ W。式中：Cs 为供试品溶液中葡萄糖浓度（gml-1） ，D 为供试品溶液的稀释因素，F 为换算因素，V 为供试品的体积（ml） ，W 为供试品的质量（mg） 。3 结果63.1 折干率铁皮石斛（两次采集）和齿瓣石斛的折干率见表12 。表 1 铁皮石斛折干率（略）表 2 齿瓣石斛折干率（略）3.2 线性关系与线性范围依据方法“2.2”项绘成标准曲线,得回归方程: Y=-0.001 47+ 0.074 45X，r=0.998 4,说明在5.0035.00 g 间的线性较好。3.3 换算因素石斛中多糖成分比较复杂,将其分解成单糖分子后再根据单糖的含量换算出石斛多糖的含量。根据实验数据计算出铁皮石斛及齿瓣石斛的换算因素 F 值见表 3。表 3 铁皮石斛及齿瓣石斛换算因素（略）3.4 多糖含量采用硫酸-苯酚比色法测定石斛多糖的含量。每一种铁皮石斛及齿瓣石斛样品各取 5 个样品，分别编为1，2 ，3 ， 4，5 号，每个各取 3 份，对处理后的每份多糖供试液分别平行测定 3 次，取浓度的平均值计算多糖含量。结果见表 4。表4 铁皮石斛及齿瓣石斛多糖含量（略）4 讨论有文献报道，铁皮石斛的多糖含量约为 22%6，7 。本实验中，冬末采收的铁皮石斛的多糖含量及折干率（20.29%，20.16% ）高7于秋末采收的铁皮石斛（14.86% ，16.9%） ，因此选择冬末作为铁皮石斛的采收季节较为适宜。在相同栽培条件下，1 号样品多糖含量（22.27%）与 4 号样品多糖含量（17.75%）的最大差值为 4.52%，而 1 号样品折干率（22.1% ） 与 5 号样品折干率（17.0%）之间最大差值 5.1%，由此可推断，不同栽培类型铁皮石斛之间品质存在一定的差异。李满飞等5报道了用比色法测定石斛多糖时测定了齿瓣石斛，其多糖含量为 2109。本实验结果表明，作为铁皮石斛替代品的齿瓣石斛的平均多糖含量及折干率（16.93%,18.92%）与铁皮石斛（20.29%，20.16%）差异不大，其野生苗的多糖含量及折干率（17.91%，19.26%）均高于组培苗（15.47%，18.4%） ，因此选择野生苗作为药用更为适宜。【参考文献】1郁美娟,孟庆华，黄德音，等. 石斛属植物有效成分及药理作用研究J.中草药,2003,25(11):918.2林萍, 毕志明，徐 红，等. 石斛属植物药理活性研究进展J. 中草药，2003，34（11）：19.3张纪立, 何锦丽 .石斛药理研究进展 J.时珍国医国药,82000,11(5):469.4高江云. 西双版纳石斛资源的保护利用J.园艺学报,1996,23(2):160.5李满飞，徐国钧，平田义正，等.中药石斛类多糖的含量测定J.中草药,1990,21(10):10.6黄民权，黄步汉，蔡体育，等铁皮石斛多糖的提取、分离和分析J 中草药，1994，25(31) ：128.7李亚芳，张晓华，孙国明，等石斛中总生物碱和多糖的含量测定J 中国药事，2002，16(7)：426.