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资源描述
内膜系统内膜系统:真核细胞的胞质中,除线粒体和叶绿体之外,由膜围成的小管、小泡和扁囊组成的细胞器,它们彼此相互关联,组成复杂膜系统主要包括:核膜、内质网和高尔基复合体三大部分,质膜、溶酶体和分泌泡:可看作是衍生物内膜系统内膜系统:不含DNA,功能活动和装配完全受核DNA控制各种内膜之间可通过出芽融合式交流 线粒体和叶绿体:含自身DNA,功能活动和装配受DNA和自身DNA共同调 控不参加出芽和融合式的交流内膜系统:细胞质分区化形成上具有一定的顺序相关性、膜分化动态结构,具有流动性、镶嵌性、不对称性和蛋白质极 性内质网:一、内质网的形态结构细胞中只有一个内质网是连续系统,保证功能上具有连续性透射电镜:平行的双层膜状,两层膜之间的宽距不等三维立体:形状大小不同的小管、小囊或扁平囊连续网状膜系统内腔相通大而扁平的片状结构,内质网的独有特征细胞核周围:网状三维结构,细胞质内:树枝状一、内质网的形态结构根据形态不同,内质网分为两个区域:粗面内质网(RER):胞质面附着有核糖体,多为扁囊状,合成蛋白质 光面内质网(SER):无核糖体附着,小管或小囊状,合成类固醇 例:肝细胞,RER为扁囊状,SER为扁囊边缘伸出的小管网 二、内质网的化学组成主要来源于对微粒体(microsome)膜的研究 微粒体:不是细胞内固有结构细胞匀浆在差速离心过程中分离出的一种膜泡成 分由内膜系统中各组分的膜断片自然卷曲而成,根据RER和SER密度差异、差速离心可分离两种ER高盐度介质中,微粒体上核糖体脱落下来。内质网膜脂类约占13,蛋白质约占23;SER脂类要比RER多一些二、内质网的化学组成脂类:磷脂、中性脂肪、磷脂酰肌醇、缩醛磷脂和一些神经节苷脂等 蛋白质含量:比质膜多。约含30-40种酶,有些酶与合成甘油三酯、磷脂和胆固 醇有关至少有两种黄素蛋白和两种血红蛋白细胞色素P-450是SER特有标记酶 蛋白质:边周蛋白、整合膜蛋白;膜上分布不对称,有的偏向腔面,有的偏向胞质面三、粗面内质网的功能1. 蛋白质的合成 所有蛋白质的合成起始:均在游离核糖体上翻译分泌蛋白的核糖体:结合在粗面内质网膜上继续进 行 翻译非分泌蛋白核糖体:只能留在细胞质基质中继续进RER上合成的多肽链:均具有信号肽序列; 内质网膜上含有核糖体亲合蛋白与信号识别颗粒的受体 , 在信号识别颗粒协助下,多肽链可被转移到RER上合成 , 合成的多肽链可穿过内质网膜进入内质网腔。 穿膜时多肽链呈非折叠状态,HSP70可能参与了去折叠三、粗面内质网的功能RER合成的蛋白质:主要为分泌蛋白及装配内膜系统和质膜所需要的蛋白 质当活跃合成蛋白质:内质网扁平囊扩大,里面充满了浓密的大分子物 质 当细胞内必需营养物缺乏、能源不足或受毒素刺 激:ER具有降低蛋白质合成起始速率的调控作 用三、粗面内质网的功能2合成蛋白质的修饰与加工修饰、加工:多肽链的糖基化和羟基化等糖基化:内质网腔面;预先合成的寡糖链,通过焦磷酸键,连接在一个插入到膜内的磷酸多萜醇上;当穿过内质网膜的多肽链上出现天冬酰胺残基时,在膜中糖基转移酶作用下,将寡糖链从磷酸多萜醇上转移到天冬酰胺残基 上三、粗面内质网的功能RER糖基化:多为N-连接寡糖链分两部分:核心区:各种寡糖链中均相同与天冬酰胺残基直接相连的第一个糖总是N-乙酰葡萄糖胺末端区:各种寡糖链中不同加工修饰只发生在寡糖链的末端区,核心区保持不变酰基化、羟化、二硫键的形成等修饰, 使新生多肽链折叠成正确的三维结 构3膜的生成 RER能不断地进行自身装配和生成实验:蛋白质和脂类前体物用14C-亮氨酸和14C-甘油标记 发现:标记前体物掺入到RER数量要比掺入到SER大得多 表明:膜的生成方向由RER到SER膜的生成:首先合成基本膜脂和整合膜蛋白然后按顺序依次添加酶、专一性糖和脂类 膜分化过程:膜的生成要经过化学和结构上的改造,逐步转变为内膜系统中各种膜,以至质膜三、粗面内质网的功能三、粗面内质网的功能三、粗面内质网的功能4物质的运输运输各种物质的通道,胞内物质运输循环系统3H-亮氨酸做脉冲追踪实验表明:RER合成分泌蛋白,经内质网腔进入GC腔,包装成分泌颗粒后,运输至胞外或其他细胞器内质网在离子和小分子物质运输方面也起一定作用 物质在内质网膜上可发生穿膜扩散和主动运输三、粗面内质网的功能5贮积钙离子 细胞的基本需求之一:对胞质中钙水平的控制因为Ca2+变化在细胞内信号系统中起关键作用 胞质中Ca2+浓度极低(10-7 molL),内质网腔中的Ca2+浓度很 高 膜上的钙泵来维持 内质网是细胞信号传递途径的Ca2+储备库 一旦受到信号刺激,膜上的钙通道打开, Ca2+迅速涌人胞质 中,参与信号的 进一步传递,引起细胞发生一定的反应 内质网含有呈强酸性的网质蛋白如内质蛋白和钙网蛋白,对Ca2+具有高度亲合性,在 贮积Ca2方面具有重要作用四、滑面内质网的功能1合成脂类SER有许多与脂类合成有关酶,如:乙酰转移酶、磷酸酶和胆碱磷酸转移酶 等 合成:除脂肪酸和两种线粒体磷脂外,新膜所需的各种脂 类, 包括磷脂、胆固醇、甾体激素合成的脂类:掺入到内质网膜自身,出芽或专一性载体蛋白运往其他细胞 器四、滑面内质网的功能翻转酶:能把含胆碱的磷脂从膜的胞质溶质一半反转到邻腔的一半造成膜两半脂类分布的不对称现象磷脂交换蛋白:位于胞质溶质中,水溶性的蛋白;可同脂类结合,携带脂类随机扩散,把脂分子从含脂多的膜转运到含脂少的膜中每一种磷脂都由专一的磷脂交换蛋白转运四、滑面内质网的功能2解毒作用有些酶与外源性有害物质结合,使其发生氧化而失 活清除脂溶性废物和代谢产生的有害物质例:SER细胞色素P-450的解毒反应过程 细胞色素P-450:末端氧化酶;在肝中具有解毒作用;通过羟基化使脂溶性废物或代谢产物失活并溶解于 水;使一些农药或其他药物失活;排出细胞后送入尿液服用大量药物的动物,与解毒有关酶活性增加,SER增 生; 一旦药物消失,多余SER被溶酶体消化,几天内又恢复四、滑面内质网的功能3糖原代谢肝细胞SER膜胞质面上附着有许多糖原小颗粒当体内需要化学能时,糖原在激素的调控下被磷酸化酶降解为葡萄糖-1-磷 酸,于胞质中再转化为葡萄糖-6-磷酸;内质网膜对葡萄糖-6-磷酸具有不可通透性,因而无法离开肝细胞,也不能被其他细胞所利用;SER含葡萄糖-6-磷酸酶,使之变成葡萄糖葡萄糖穿越内质网膜进入SER腔,再输送至血液中,供使 用核 糖 体一、核糖体的基本结构 原核、真核、线粒体、叶绿体:均有核糖体 原核、真核核糖体:外形和功能基本相同,大小不同 电镜下分:大、小亚单位肝核糖体负染色:大亚单位:略呈半圆形,直经约为23nm,一侧伸出三个突起,中央为一凹陷,有一垂直通道,新合成的肽链由此通道穿出,保护新生肽链免受蛋白水解酶的降解一、核糖体的基本结构小亚单位:长条形,约13长度处有一细的缢痕大小亚单位结合成核糖体:凹陷部位彼此对应,从而形成一个隧道,为蛋白质翻译时mRNA的穿行通路大亚单位:肽基转移酶中心 小亚单位:解码中心核糖体重要活性部位(6个)mRNA的结合位点:小亚单位能识别并结合mRNA的起始端 如:大多数原核细胞16S rRNA的3端有一段序列同mRNA结合位点具有互补关系 A位点(氨酰基位点,亦称氨基酸受位):大亚单位接受新掺入的氨酰-tRNA的结合位点P位点(肽酰基位点,肽基部位或释放部位):小亚单位为延伸中肽酰tRNA的结合位点核糖体重要活性部位(6个)E位点:大亚单位肽基转移后即将释放的tRNA的结合位点; 肽基转移酶的催化位点:大亚单位中的rRNA可催化氨基酸间形成肽键,这是蛋白质合成过程中 的关键反应 GTP酶(易位酶)的结合位点:大亚单位延伸因子EF-G的结合位点,简称G因子,对GTP具有 活性,可催化肽酰-tRNA从A位点转移到P位点,促 使肽链的延伸两亚单位常游离于细胞质溶质中 当小亚单位与mRNA结合后,大亚单位才与小亚单位 结合成完整的核糖体 肽链翻译结束后,大小亚单位解离,重新游离细胞 质两亚单位的结合与分离受Mg2+影响 Mg2+lmmolL时,两亚单位结合成单核糖体; Mg2+10mmolL时,两个核糖体则结合成二聚体细胞进行蛋白质合成时:常多个核糖体同时结合在一条mRNA链上,卷曲成蜗牛壳状的结构,称为多核糖体,为细胞正在合成蛋白质的标志。二、核糖体的化学组成主要成分:蛋白质和RNA蛋白质占40-50,RNA占50-60RNA:占细胞中RNA总量80以上rRNA的磷酸基所带的负电荷量多于蛋白质所带的正电荷量,因而核糖体呈现出很强的负电性,可同阳离子和碱性染料相结合 含核糖体多的细胞,其细胞质可被碱性染料(如甲苯 胺蓝)所浓染二、核糖体的化学组成核糖体RNA:原核生物3种rRNA;真核生物4种rRNA rRNA具有高度复杂的二级结构线性rRNA分子内部有70的区段形成双链螺旋各种蛋白质则结合到折叠的rRNA分子上 16SrRNA的3端一段序列:同大多数原核生物mRNA的核糖体结合部位具有互补 关系,从而使30S亚单位能识别mRNA的起始端 5SrRNA一段序列:同tRNA中的TCG顺序互补,使tRNA能结合到核糖体 上二、核糖体的化学组成核糖体蛋白:适当条件下,CsCL离心,可将核糖体各成分分离出 来蛋白质成分按照一定的顺序一组一组地被分离出来大部分蛋白质均含有丰富的碱性氨基酸组成核糖体的蛋白质,在大小亚单位中均有一定的空间分布利用专一性抗体,在电镜下可对各种蛋白质做定位测定三、核糖体的功能合成蛋白质的场所 由核糖体、mRNA和tRNA三者密切配合共同完成 肽链合成的起始、延伸和终止三个阶段的反应(一)核糖体与tRNA相互识别的分子机制 Paul Schimmel等(1998)提出一个模型,该模型认为: 1.带有反密码子的呈”L”型的tRNA具有两个不同的臂 :一个臂:其3端的通用CCA单链序列为氨基酸的结合 位点氨基酸通过酯化作用可连接到末端的A上;另一个臂:含有三联体的反密码子,与mRNA上的三联体密码子进行配对结合 (一)核糖体与tRNA相互识别的分子机制2.一旦被氨基酸酰化结合,tRNA的反密码子功能区通过 密码子-反密码子相结合方式,作为一个模板阅读探头来破译mRNA上三联体密码子3.根据mRNA上的三联体密码子,氨基酸酰化的tRNA线性 排列在mRNA上,其带电的小螺旋区紧靠在一起,从而使一个氨基酸的氨基端能攻击另一个氨基酸的羧基端,在两个氨基酸之间便可形成肽键(二)核糖体在翻译起始复合物形成中的作用机制转译过程均是由起始密码子AUG启动 起始密码子AUG:编码产物:甲硫氨酸可为特定的tRNA的反密码子所识别而形成一种特异 性的起始物tRNAMet原核生物、线粒体、叶绿体:甲酰甲硫氨酸对AUG正确识别: 原核:16SrRNA3端的一段核苷酸序列和mRNA5端起始部位(AUG上游)3-9个互补核苷酸序列(SD sequence)碱基配 对(二)核糖体在翻译起始复合物形成中的作用机制真核:异三聚体的翻译因子eIF2,先与GTP和tRNAMet结合形成一个稳定的三元复合物 ;然后能与40S核糖体亚单位稳定结合形成43S的前起始复合物;此复合物与mRNA 5端附近的起始部位结合,开始向3端扫描;靠tRNAMet上反密码子和mRNA上AUG的配对作用搜寻起始密码子AUG(三)核糖体在肽键形成中的催化活性多肽合成起始:tRNAMet结合到P部位,A部位空着接纳的种类要依A部位上mRNA所暴露的密码子决定 A部位一旦被占据,在肽基转移酶的催化下,P部位上 tRNA所携带的甲酰甲硫氨酸(或肽链)与A部位
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