动物生理学实验指导教师：白华毅授课专业： 动科、动医、水产 云南农业大学动物科学学院动物生理学常用器械 一. 蛙类手术器械 1探针：用于破坏脑和脊髓。 2粗剪刀：用于剪骨、肌肉、皮肤等较粗硬组织 。 3眼科剪；用于剪神经、血管等细软组织。 4外科镊：用于夹捏组织和牵提切口处的皮肤。 5. 眼科镊：用于夹捏细软组织。 6玻璃分针：用于分离神经和血管等。 7蛙板：用于固定蛙类。二. 哺乳类手术器械 8玻璃板：用于制备神经肌肉标本。 1. 注射器：用于注射药液。 2剪毛翦：用于术部剪毛。 3手术刀：用于切割皮肤、肌肉和脏器。 4止血钳：除用于止血外，有齿的用于提起皮肤，无齿的用于分离皮下组织 。 5外科镊：用于夹捏较大或较厚的组织，牵拉皮肤切口。 6外科剪：用于剪皮肤、皮下组织、肌肉等。 7眼科剪：用于剪血管、神经。 8眼科镊：用于捏和分离神经、血管等。 9，骨钳：用于咬切骨质。 10.骨剪；用于剪切骨质。 11.颅骨钻：用于钻孔开颅 12.持针钳：用于夹持缝合针。 13.缝合针、线：用于缝合皮肤、肌肉脏器等。动物生理学实验动物 常用酌麻醉药物动物生理学实验动物 常用酌麻醉药物动物生理学实验动物 常用酌麻醉药物常用的给药方法 1. 经口投药法（口服、灌服） 2.注射给药法 （皮下、肌肉、腹腔、静脉 ）常用的动物麻醉方法及注意事项1. 全身麻醉：吸入、注射 2. 局部麻醉：点眼、注射麻醉注意事项 1、麻醉前应正确选用麻醉药品、用药剂量及给药途径。 2、密切观察动物麻醉状态及反应，以便准确判断麻醉深度。 3、如麻醉较浅，动物出现挣扎或呼吸急促等，需补充麻醉药以维持 适当的麻醉。一次补充药量不宜超过原总用药量的五分之一。 4、麻醉过程中，应随时保持呼吸道通畅，并注意保温。 5、在手术操作复杂、创伤大、实验时间较长或麻醉深度不理想等情 况下，可配合局部浸润麻醉或基础麻醉。 6、实验中注意液体的输入量及排出量，维持体液平衡，防止酸中毒 及肺水肿的发生。 实验一 血液的组成实验目的了解血液的组成，区别血浆、血清及纤维蛋白。实验原理 血液是由液态的血浆和悬浮于血浆中的血细胞组成。在血液中加一定量的抗凝剂柠檬酸钠或草酸钾，使血液抗凝，由于血细胞比重略大于血浆，静置或经过离心，将出现分层。上面无色（或淡黄色）透明的部分为血浆，下面红色部分为红细胞，在红细胞之上有一薄层灰白色部分为白细胞和血小板。下部压紧的血细胞占全血的体积比称为红细胞压积，又叫红细胞比容。若不加抗凝剂任血液自然凝固或去纤维蛋白，就可区别血清、血块及纤维蛋白。材料及用具 鸡，新鲜血，抗凝血，离心管，离心机，小试管刷，烧杯， 试管架，试管，天平。方法及步骤制备抗凝血:常用的抗凝剂为3.8%柠檬酸钠，其用量：1ml血需5mg柠檬酸钠10ml血50mg柠檬酸钠。（计算50mg柠檬酸钠相当于多少毫升3.8%柠檬酸钠） 100：3.8g=x：50mg100：3800mg=x：50mgx=(10050)38001.32柠檬酸钠抗凝机理：柠檬酸钠与血中的钙离子结合，形成可溶化物而抗凝。其优点是毒性低。方法及步骤1取抗凝血（1毫升血液加柠檬酸钠5毫克；或1毫升血液加草酸钾2毫克）10毫升（如抗凝血放置过久，还须将其充分摇匀），置于有刻度的离心管中。将离心管放入电动离心机中，以每分钟3000转的速度旋转2030分钟，使血细胞完全沉于管底，然后取出离心管观察，其上层为血浆，底层为压紧的深红色的红细胞，中间一白色薄层为白细胞和血小板。2取新鲜血50毫升放在小烧杯中，用小试管刷搅动数分钟后，取出试管刷，可见试管刷上有许多丝状物缠绕，此即为纤维蛋白。用水冲洗后，观察其颜色及韧性。脱去纤维蛋白的血液称“去纤维蛋白血”。3取“去纤维蛋白血液”10毫升，依1法离心后，上层为血清，下层为血细胞。观察其颜色及透明度。4取新鲜血10毫升置试管中，静置片刻。则见有凝固现象发生，浑浊的血变为一条血凝块(凝块称血块)，血块回缩，周围有清亮的液体析出，该液体为血清。为加速此过程，可先离心几分钟或略加温。注意事项使用离心机时，应用天平称量使离心机旋转轴两侧相应的两个套筒及其内容物的总重量相等。开动离心机应由慢而快，使转速逐渐达到3000转/分，停止时应由快而慢逐渐停止。 要求与思考题1.血浆与血清有哪些区别？2写出实验报告，该实验报告采用画图法最直观。实验二 血红蛋白的测定实验目的 熟悉用比色法测定血红蛋白的方法。实验原理 血红蛋白测定的方法有多种，最常用而最简单的是比色法。由于血红蛋白的颜色，常随结合的氧量多少而改变，因而不利于比色，但血红蛋白与稀盐酸作用后，能使亚铁血红素变成不易变色的棕色的高铁血红蛋白，用水稀释后可与标准比色板比色，从而测得血红蛋白含量。通常以每100毫升血液中血红蛋白的克数来表示。材料及用具 血红蛋白计，抗凝血，吸血管，滤纸，1/10N盐酸，蒸馏水等。方法及步骤1.实验前先检查血红蛋白计的测定管是否清洁。2.将1/10N盐酸加入测定管中至刻度“2”或“10%”处。3.用吸血管吸制备好的抗凝血至刻度20立方毫米处。4.将吸血管内的血液完全移入稀释管内，混合均匀，放置10分钟。5.把稀释管插入比色架中，使无刻度的两侧面位于空格的前后。6.用滴管向稀释管内逐滴加入蒸馏水，边滴边抖动手腕摇匀边观察颜色，直至颜色与标准比色柱相同为止。7.从比色箱中取出测定管，读出其中液体表面（凹面）的刻度。稀释管上液面的刻度读数即为每100ml血液中血红蛋白的克数。注意事项 1.血液和盐酸作用的时间不可少于10分钟，否则，血红蛋白不能充分转变成高铁血红蛋白，使结果偏低。2.加蒸馏水时，开始可以稍多加几滴，随后则不能过快，以防稀释过头。3.比色时最好在自然光下，而不应在黄色光下进行，以免影响结果。4.整个实验过程中均应注意避免起泡。实验三 红细胞的脆性试验实验目的 红细胞的理化特性及其变化受动物自身状况影响，在临床上具有检验诊断价值。通过红细胞渗透脆性实验学习测定红细胞对不同低渗溶液的渗透抵抗力，即测定正常动物红细胞渗透脆性的方法，理解细胞外液渗透张力对维持细胞正常形态与功能的重要性。实验原理 正常红细悬浮于等渗的血浆中，若置于高渗溶液内，则红细胞会因失水而皱缩；反之，置于低渗溶液内，则水进入红细胞，使红细胞膨胀。如环境渗透压继续下降，红细胞会因继续膨胀而破裂，释放血红蛋白，称之为溶血。红细胞膜对低渗溶液具有一定的抵抗力，红细胞膜对低渗溶液的抵抗力越大，红细胞在低渗溶液中越不容易发生溶血，即红细胞渗透脆性越小。将血液滴入不同的低渗溶液中，可检查红细胞膜对于低渗溶液抵抗力的大小。红细胞脆性试验就是测定红细胞对低于0.9%NaCl溶液的耐受能力。耐受力高者，红细胞不易破裂，即脆性低，反之，耐受力低者，红细胞易于破裂，即脆性高。凡上层溶液开始微呈淡红色，而极大部分红细胞下沉，称开始溶血或最小抗力（红细胞的最小抵抗力）。凡液体呈均匀红色，管底无红细胞下沉，则称完全溶血或最大抗力（红细胞的最大抵抗力）。材料及用具试管，试管架，吸管，移液管，抗凝血，1%NaCl，蒸馏水。方法及步骤1.先将试管分别排列在试管架上，按下表把1%NaCl，稀释成不同浓度的低渗溶液，每管溶液均为2ml。试管 号123456789101% NaCl1.401.301.201.101.000.900.800.700.600.50蒸馏 水0.600.700.800.901.001.101.201.301.401.50NaCl浓度0.700.650.600.550.500.450.400.350.300.252.采取血液，并在上列各管中各加入大小相等的血液1滴，然后，用拇指堵住试管口，将试管慢慢倒置一、二次，使血液与管内盐水混合均匀。3.在室温中静置1小时，观察结果：根据各管中液体颜色和浑浊度的不同，判断红细胞脆性。4.依上述说明，判定出开始溶血及开始完全溶血的氯化钠浓度百分率。前者为红细胞的最小抗力，后者为红细胞的最大抗力。未发生溶血的试管：液体下层为大量红细胞沉淀，上层为无色透明，表明无红细胞破裂。 部分红细胞溶血的试管：液体下层为红细胞沉淀，上层出现透明淡红（淡红棕）色，表明部分红细胞已经破裂，称为不完全溶血。 红细胞全部溶血的试管：液体完全变成透明红色，管底无红细胞沉淀，表明红细胞完全破裂，称为完全溶血。注意事项1.小试管要干燥，加血的量要一致，只加一滴。 2.混匀时，轻轻倾倒12次，减少机械震动，避免人为溶血。 3.配制不同浓度的NaCl溶液时应力求准确、无误。实验四 红细胞沉降率（血沉）的测定实验目的 了解正常动物红细胞沉降率并掌握其测定方法。实验原理 红细胞在循环血液中具有悬浮稳定性,但在血沉管中,会因重力逐渐下沉。将加有抗凝剂的血液置于一特制的具有刻度的玻管内，置于血沉架上，红细胞因重力作用而逐渐下沉，上层留下一层黄色透明的血浆。经一定时间(通常以第1小时末红细胞下降的距离,作为沉降率的指标，简称为血沉)沉降的红细胞上面的血浆柱的高度，即表示红细胞的沉降率。血浆中的某些特性能改变红细胞的沉降率,因此血沉可作为某些疾病检测的指标之一。材料及用具 血沉管，血沉管架，洗耳球，抗凝血，干棉球。方法及步骤1.制备抗凝血（鸡血）。2.用清洁、干燥的血沉管，小心地吸血至最高刻度“0”处，搽去血沉管尖端外周的血液。在吸血之前，须将血液充分摇匀（但不可过份振荡以免红细胞破坏）。吸血时，要绝对避免产生气泡，否则须重做。将吸有血液的血沉管垂直置于血沉管架上，分别在15分钟、30分钟、45分钟、1小时（4只管），检查血沉管上部血浆的高度，以毫米表示之，并将所得结果记录于下表：时间15mi n30mi n45mi n 1h血沉注意事项1.采血后实验应在2小时内完毕，否则血液放置过久，会影响实验结果的准确性。2.沉降管应垂直竖立，不能稍有倾斜，不得有气泡和漏血。3.沉降率随温度的升高而加快，故应在室温1827时测定为宜。4.血沉管必须清结，如内壁不清洁可使血沉显著变慢。实验 ABO血型的鉴定实验原理 ABO血型是根据红细胞表面存在的凝集原决定的。存在A凝集原的称为A血型，存在B凝集原的称为B血型。而血清中还存在凝集素。当A凝集原与抗A凝集素相遇或B凝集原与抗B凝集素相遇时，会发生红细胞凝集反应。一般A型标准血清中含有抗B凝集素，B型标准血清中含有抗A凝集素，因此可以用标准血清中的凝集素与被测者红细胞反应，以确定其血型。设计要求 ：已知甲某的血型为A型（或B型），现在又无标准血清,要求设计一实验来判断乙某的血型？材料及用具 正常人，双凹玻片，采血针，竹签，75%酒精棉球，干棉球，玻璃蜡笔（记号笔），尖头滴管。方法与步骤 1.在双凹玻片两端分别标上A和B，中央标记受试者的号码。 2.在A端和B端的凹面中分别滴上相应的标准血清少许。 3.75%酒精棉球消毒无名指端，用采血针刺破指端，用消毒后的尖头滴管吸取少量血，分别与A端和B端凹面中的标准血清混合，放置12 min后，肉眼观察有无凝血现象，肉眼不易分辨的用显微镜观察。 4.根据凝集现象的有无判断血型。 血型鉴定血型鉴定Type AType BType OType AB anti-Aanti-Banti-Aanti-Banti-Aanti-Banti-Aanti-B注意事项 1.指端、采血针和尖头滴管务必做好消毒准备。做到一人一针，不能混用。使用过的物品（包括竹签）均应放入污物桶，不得再到采血部位采血。 2.消毒部位自然风干后再采血，血液容易聚集成滴，便于取血。取血不宜过少，以免影响观察。 3.采血后要迅速与标准血清混匀，以防血液凝固。 4.在进行交叉配血实验时，一定要防止将主侧配血