实验九 人类X染色质的观察哈尔滨师范大学 生命科学与技术学院 遗传学教研室 2010年3月一、实验目的1. 掌握观察与鉴别X染色质的简易方法；2. 识别X染色质的形态特征及所在部位。 1. X-染色质的发现 p 1949年M.L.Barr等研究发现：雌猫神经元细胞间期核内凝缩的深染小体。p 进一步发现：其它雌性哺乳动物（包括人类）也同样有这种 结构。p 而且在其它细胞的间期核中也可以见到这一结构，称之为 Barr小体（巴氏小体）。p 研究表明，巴氏小体是X染色体异固缩的结果，也称为X染 色质或X小体，在细胞周期中比有活性的X染色体复制稍晚 。二、实验原理2.莱昂氏假说 (Lyon hypothesis)p 1961年 M.F.Lyon提出： 正常雌性哺乳动物体细胞中的两条 X染色体之一在遗传性状表达上是 失活的； 在同一个体的不同细胞中， X染色 体失活是随机而恒定的； 失活现象发生在胚胎发育的早期。3.剂量补偿效应(dosage compensation)o 由于雌性体细胞中的两个X染色体中的一个发生异固缩（也称 为Lyon化现象），失去活性，这样保证了雌雄两性体细胞中 都只有一条X染色体保持转录活性，使两性X连锁基因产物的 量保持在相同水平上，这种效应称为X染色体的剂量补偿。o Barr小体的数目 X染色体数目 14.莱昂氏假说的修正（新莱昂氏假说）o （1）提出：1967年，美国的遗传学家Ohno 提出45，X46，XX；47XXY46，XY， 这两个不等式是否成立的疑问。 o （2）按照莱昂假说应该是两者完全相同，但45 ，X与47，XXY实际是两种综合症。 o （3）修正：1974年，失活的X染色体上并非 全部基因都呈莱昂化失活。 5. X染色质检查的应用o X染色质检查广泛应用于临床，作为性别鉴定和性染色体异常的一种辅助诊断方法。例如：克氏综合症（XXY）、特纳氏综合征（XO） 、其它性染色体异常的患者如XXX， XXYY等。三、实验材料、器具和药品材料：女性口腔黏膜细胞、发根细胞。器具：显微镜、载玻片、盖玻片、无菌牙签等。药品： 60%醋酸 、45%的醋酸 、石炭酸品红。四、实验方法1.口腔黏膜细胞X染色质（Barr小体）显示方法 取材：漱口34次后，用无菌牙签从面颊部内侧刮取 口腔黏膜细胞，第一次的刮取物弃去，在原位重复刮 23下，涂在载玻片上； 固定：加一滴60%醋酸固定5min，用滤纸吸去多余 醋酸； 染色：加一滴石炭酸品红染色2min； 制片：盖上盖片，垫垫上滤纸滤纸 用拇指压压片； 镜检：低倍高倍。2. 发发根毛囊细细胞的X染色质（Barr小体）显显示方法取材：拔取女性带带毛囊细细胞的头发头发 ，置于载载玻片上；固定：在毛囊上滴加一滴45%的醋酸（或5mol/L盐盐酸）固定5min，吸掉多余的醋酸；染色：用镊镊子将软软化的毛囊剥下，加一滴石炭酸品红红染色23min；制片：盖上盖片，垫垫上滤纸滤纸 用拇指压压片；镜检镜检 ：低倍高倍。X染色质的辨别：（1）低倍镜下检出典型的可数细胞，标准是： 核质呈网状或细颗粒状分布 核膜清晰，核无缺损 染色适度 周围无杂菌在高倍镜下进一步观察。五、观察结果p X染色质是一结构致密的浓染小体，轮廓清楚，大小 11.5m ； p 形态态：微凸形、三角形、卵形、短棒形等，常附于核 膜边缘边缘 或靠近内侧侧。 （2）高倍镜下观察X染色质的形态特征及所在部位：X染色质箭头所示为巴氏小体 （女性细胞左中存在，男性细胞右中没有）o 从理论上讲，正常女性的间期细胞中都应该有一个X染色质，但事实上由于个体的生理状态、染色方法、染色技术以及X染色质在细胞核中的位置不同，实际检查中不可能在每个细胞中都看到。o 正常女性间期细胞核中X染色质阳性率一般约为1030%，有的可高达50%以上，在男性间期细胞核中则平均低于1%。六、作业1. 观察50个女性可数的细胞，并计算巴氏小体细胞所占的百分比。2. 绘制3个典型的显示X染色质的细胞。