血涂片及骨髓片的制 备及瑞氏染色一、目的n掌握血涂片、骨髓涂片的制作及染色技术 。 鉴别外周血中各种白细胞的形态特点及分 类计数方法。二、原理n瑞氏染液是由伊红美兰所组成的复合物， 经物理吸附及化学作用对细胞进行染色。 三、材料n血针、玻片、酒精棉光学显微镜、香柏油 、二甲苯、一次性采血针 四、方法n 血涂片的制作n 采血：每组两个同学，练习耳垂采血（包括消 毒、扎针、挤压、取血），用推片取血液一滴， 于玻片右端，从其右侧接触血液，使之成40度角 ，均匀平稳地向左侧推进，至血滴推尽为止， 其厚度要适中，且有头体尾之分。n 待血片干后，滴加瑞氏染液数滴（盖住血膜） ，静置40 秒，加缓冲液等量混匀，染1020分钟 ，用水冲洗，干燥后镜检。n 镜检计数：在血膜头尾交界处，计数100个白 细胞，并对其进行分类。 骨髓片的制备 n 将临床医生所取骨髓至玻片高端（在准备涂片 时，将两玻片倾斜放置），使过多血液流下。n 蘸取骨髓适量（选择骨髓小粒部分），以 3045度角，用力推开，速度适宜。然后将玻片于 空中挥动，使之干燥，以免细胞缩小或细胞皱缩 。n 骨髓片制备好后，用标记笔在膜的头部注明病 人的姓名、取材部位及穿刺部位。 五、结果n杆状核粒细胞 (Stab Granulocyte)n细胞呈圆形，直径1015um。n胞核狭长，弯曲呈带状，两端钝圆。核染色质 粗糙呈块状，染深紫红色。n胞质中含特异性颗粒的不同，也可分为中性、 嗜酸性、嗜碱性杆状核粒细胞三种，颗粒特点 同中幼粒细胞。n中性分叶核细胞n细胞呈圆形，直径1015um。n胞核常分为25叶，以分3叶者多见，叶 与叶之间有细丝状相连或完全断开，核 染色质浓集或呈小块状，染深紫红色。n胞质丰富，呈淡红色，布满细小紫红色 的中性颗粒。n嗜酸粒细胞n嗜酸粒细胞胞体直径1116um，n胞核多分为近似对称的两叶。n胞质中充密集粗大、大小均匀的桔红色嗜酸 性颗粒。n嗜碱性粒细胞n嗜碱性粒细胞胞体直径10-12umn胞核分叶不明显，或融合呈堆集状。n胞质中有稀疏的大小不一、分布不均、呈紫 黑色的嗜碱性颗粒，颗粒常掩盖在核上，致 使核的轮廓和结构模糊不清。n大淋巴细胞n呈圆形，直径13-18um。n胞核圆形或椭圆形，偏于一侧或着边。染 色质常质密呈块状，排列均匀，深染呈深 紫红色。n胞质丰富，呈透明天蓝色，可有少量大而 稀疏的嗜天青颗粒。 小淋巴细胞 呈圆形或椭圆形，直径6-10um 胞核圆形或椭圆形，或有切迹，核着边，染色质 粗糙致密，呈大块状，染深紫红色。 胞质量极少，仅在核的一侧见到少量淡蓝色胞质 ，有时几乎不见而似裸核，一般无颗粒。单核细胞 (Monocyte) 圆形或不规则形，直径12-20um，边缘常见伪足 突出。 胞核形状不规则，常呈肾形、马蹄形、笔架形、 “S”形等，并有明显扭曲折叠。染色质疏松细致 ，呈淡紫红色丝网状。 胞质丰富，呈淡灰蓝色或淡粉红色，可见多数细 小、分布均匀、细尘样淡紫红色颗粒。血 小 板直径2-5um ，约为成熟红细胞的1/4-3/4 ，类圆形，星形与不规则形，淡红色，无核 。成熟红细胞正常形态呈双凹盘形，直径7.5um，瑞氏染色为 红色中心稍淡染