海洋生物学专业毕业论文海洋生物学专业毕业论文 精品论文精品论文 三种弧菌外膜蛋白三种弧菌外膜蛋白 K K 基因基因的克隆、表达及其潜在应用的研究的克隆、表达及其潜在应用的研究关键词：弧菌外膜蛋白关键词：弧菌外膜蛋白 K K 基因表达基因表达 免疫荧光免疫荧光 大菱鲆大菱鲆 活疫苗活疫苗 注射免疫注射免疫摘要：本研究根据哈维氏弧菌 0mpK 基因序列，3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基 因序列和酒精酵母菌表面展示质粒载体 pYD1 上的多克隆位点设计引物，从哈维 氏弧菌基因组 DNA 和质粒 pET-OmpK-GAPDH 中通过 PCR 技术扩增外膜蛋白基因和 融合基因 0mpK-GAPDH，把该基因连接到表面展示质粒载体 pYD1 上，转化用于 表面展示的酵母 EBY100 菌株中，以不含载体和含空载体的酵母菌为对照，加 2(w/v)的半乳糖诱导 36 h 后，利用免疫荧光法在荧光显微镜下检测到了展示 在酵母菌细胞表面上的外膜蛋白。 同时利用大肠杆菌表达载体 pQE-30，构 建了哈维氏弧菌，副溶血弧菌，溶藻胶弧菌三种弧菌外膜蛋白 K 的重组大肠杆 菌，IPTG 诱导 4h 后能够在大肠杆菌 M15 中高效表达了的融合蛋白。通过诱导 表达用 Ni2+亲和柱纯化了重组的三种弧菌的外膜蛋白 K，SDS-PAGE 检测分子量 分别为 29 kDa，30 kDa，30 kDa。 用展示有哈维氏弧菌外膜蛋白 k 的酵母 菌细胞对大菱鲆进行注射免疫，采用间接 ELISA 的方法，利用上述制备的重组 哈维氏弧菌外膜蛋白 k 检测免疫鱼类血清中抗体的产生；间接 ELISA 对大菱鲆 特异抗体检测结果表明，实验组有效价，说明这种以酒精酵母为载体的活疫苗 可以刺激鱼类产生一定得抗体，但其平均效价却很低。正文内容正文内容本研究根据哈维氏弧菌 0mpK 基因序列，3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因 序列和酒精酵母菌表面展示质粒载体 pYD1 上的多克隆位点设计引物，从哈维氏 弧菌基因组 DNA 和质粒 pET-OmpK-GAPDH 中通过 PCR 技术扩增外膜蛋白基因和融 合基因 0mpK-GAPDH，把该基因连接到表面展示质粒载体 pYD1 上，转化用于表 面展示的酵母 EBY100 菌株中，以不含载体和含空载体的酵母菌为对照，加 2(w/v)的半乳糖诱导 36 h 后，利用免疫荧光法在荧光显微镜下检测到了展示 在酵母菌细胞表面上的外膜蛋白。 同时利用大肠杆菌表达载体 pQE-30，构 建了哈维氏弧菌，副溶血弧菌，溶藻胶弧菌三种弧菌外膜蛋白 K 的重组大肠杆 菌，IPTG 诱导 4h 后能够在大肠杆菌 M15 中高效表达了的融合蛋白。通过诱导 表达用 Ni2+亲和柱纯化了重组的三种弧菌的外膜蛋白 K，SDS-PAGE 检测分子量 分别为 29 kDa，30 kDa，30 kDa。 用展示有哈维氏弧菌外膜蛋白 k 的酵母 菌细胞对大菱鲆进行注射免疫，采用间接 ELISA 的方法，利用上述制备的重组 哈维氏弧菌外膜蛋白 k 检测免疫鱼类血清中抗体的产生；间接 ELISA 对大菱鲆 特异抗体检测结果表明，实验组有效价，说明这种以酒精酵母为载体的活疫苗 可以刺激鱼类产生一定得抗体，但其平均效价却很低。 本研究根据哈维氏弧菌 0mpK 基因序列，3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列 和酒精酵母菌表面展示质粒载体 pYD1 上的多克隆位点设计引物，从哈维氏弧菌 基因组 DNA 和质粒 pET-OmpK-GAPDH 中通过 PCR 技术扩增外膜蛋白基因和融合基 因 0mpK-GAPDH，把该基因连接到表面展示质粒载体 pYD1 上，转化用于表面展 示的酵母 EBY100 菌株中，以不含载体和含空载体的酵母菌为对照，加 2(w/v)的 半乳糖诱导 36 h 后，利用免疫荧光法在荧光显微镜下检测到了展示在酵母菌细 胞表面上的外膜蛋白。 同时利用大肠杆菌表达载体 pQE-30，构建了哈维氏 弧菌，副溶血弧菌，溶藻胶弧菌三种弧菌外膜蛋白 K 的重组大肠杆菌，IPTG 诱 导 4h 后能够在大肠杆菌 M15 中高效表达了的融合蛋白。通过诱导表达用 Ni2+ 亲和柱纯化了重组的三种弧菌的外膜蛋白 K，SDS-PAGE 检测分子量分别为 29 kDa，30 kDa，30 kDa。 用展示有哈维氏弧菌外膜蛋白 k 的酵母菌细胞对大 菱鲆进行注射免疫，采用间接 ELISA 的方法，利用上述制备的重组哈维氏弧菌 外膜蛋白 k 检测免疫鱼类血清中抗体的产生；间接 ELISA 对大菱鲆特异抗体检 测结果表明，实验组有效价，说明这种以酒精酵母为载体的活疫苗可以刺激鱼 类产生一定得抗体，但其平均效价却很低。 本研究根据哈维氏弧菌 0mpK 基因序列，3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列 和酒精酵母菌表面展示质粒载体 pYD1 上的多克隆位点设计引物，从哈维氏弧菌 基因组 DNA 和质粒 pET-OmpK-GAPDH 中通过 PCR 技术扩增外膜蛋白基因和融合基 因 0mpK-GAPDH，把该基因连接到表面展示质粒载体 pYD1 上，转化用于表面展 示的酵母 EBY100 菌株中，以不含载体和含空载体的酵母菌为对照，加 2(w/v)的 半乳糖诱导 36 h 后，利用免疫荧光法在荧光显微镜下检测到了展示在酵母菌细 胞表面上的外膜蛋白。 同时利用大肠杆菌表达载体 pQE-30，构建了哈维氏 弧菌，副溶血弧菌，溶藻胶弧菌三种弧菌外膜蛋白 K 的重组大肠杆菌，IPTG 诱 导 4h 后能够在大肠杆菌 M15 中高效表达了的融合蛋白。通过诱导表达用 Ni2+ 亲和柱纯化了重组的三种弧菌的外膜蛋白 K，SDS-PAGE 检测分子量分别为 29 kDa，30 kDa，30 kDa。 用展示有哈维氏弧菌外膜蛋白 k 的酵母菌细胞对大 菱鲆进行注射免疫，采用间接 ELISA 的方法，利用上述制备的重组哈维氏弧菌外膜蛋白 k 检测免疫鱼类血清中抗体的产生；间接 ELISA 对大菱鲆特异抗体检 测结果表明，实验组有效价，说明这种以酒精酵母为载体的活疫苗可以刺激鱼 类产生一定得抗体，但其平均效价却很低。 本研究根据哈维氏弧菌 0mpK 基因序列，3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列 和酒精酵母菌表面展示质粒载体 pYD1 上的多克隆位点设计引物，从哈维氏弧菌 基因组 DNA 和质粒 pET-OmpK-GAPDH 中通过 PCR 技术扩增外膜蛋白基因和融合基 因 0mpK-GAPDH，把该基因连接到表面展示质粒载体 pYD1 上，转化用于表面展 示的酵母 EBY100 菌株中，以不含载体和含空载体的酵母菌为对照，加 2(w/v)的 半乳糖诱导 36 h 后，利用免疫荧光法在荧光显微镜下检测到了展示在酵母菌细 胞表面上的外膜蛋白。 同时利用大肠杆菌表达载体 pQE-30，构建了哈维氏 弧菌，副溶血弧菌，溶藻胶弧菌三种弧菌外膜蛋白 K 的重组大肠杆菌，IPTG 诱 导 4h 后能够在大肠杆菌 M15 中高效表达了的融合蛋白。通过诱导表达用 Ni2+ 亲和柱纯化了重组的三种弧菌的外膜蛋白 K，SDS-PAGE 检测分子量分别为 29 kDa，30 kDa，30 kDa。 用展示有哈维氏弧菌外膜蛋白 k 的酵母菌细胞对大 菱鲆进行注射免疫，采用间接 ELISA 的方法，利用上述制备的重组哈维氏弧菌 外膜蛋白 k 检测免疫鱼类血清中抗体的产生；间接 ELISA 对大菱鲆特异抗体检 测结果表明，实验组有效价，说明这种以酒精酵母为载体的活疫苗可以刺激鱼 类产生一定得抗体，但其平均效价却很低。 本研究根据哈维氏弧菌 0mpK 基因序列，3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列 和酒精酵母菌表面展示质粒载体 pYD1 上的多克隆位点设计引物，从哈维氏弧菌 基因组 DNA 和质粒 pET-OmpK-GAPDH 中通过 PCR 技术扩增外膜蛋白基因和融合基 因 0mpK-GAPDH，把该基因连接到表面展示质粒载体 pYD1 上，转化用于表面展 示的酵母 EBY100 菌株中，以不含载体和含空载体的酵母菌为对照，加 2(w/v)的 半乳糖诱导 36 h 后，利用免疫荧光法在荧光显微镜下检测到了展示在酵母菌细 胞表面上的外膜蛋白。 同时利用大肠杆菌表达载体 pQE-30，构建了哈维氏 弧菌，副溶血弧菌，溶藻胶弧菌三种弧菌外膜蛋白 K 的重组大肠杆菌，IPTG 诱 导 4h 后能够在大肠杆菌 M15 中高效表达了的融合蛋白。通过诱导表达用 Ni2+ 亲和柱纯化了重组的三种弧菌的外膜蛋白 K，SDS-PAGE 检测分子量分别为 29 kDa，30 kDa，30 kDa。 用展示有哈维氏弧菌外膜蛋白 k 的酵母菌细胞对大 菱鲆进行注射免疫，采用间接 ELISA 的方法，利用上述制备的重组哈维氏弧菌 外膜蛋白 k 检测免疫鱼类血清中抗体的产生；间接 ELISA 对大菱鲆特异抗体检 测结果表明，实验组有效价，说明这种以酒精酵母为载体的活疫苗可以刺激鱼 类产生一定得抗体，但其平均效价却很低。 本研究根据哈维氏弧菌 0mpK 基因序列，3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列 和酒精酵母菌表面展示质粒载体 pYD1 上的多克隆位点设计引物，从哈维氏弧菌 基因组 DNA 和质粒 pET-OmpK-GAPDH 中通过 PCR 技术扩增外膜蛋白基因和融合基 因 0mpK-GAPDH，把该基因连接到表面展示质粒载体 pYD1 上，转化用于表面展 示的酵母 EBY100 菌株中，以不含载体和含空载体的酵母菌为对照，加 2(w/v)的 半乳糖诱导 36 h 后，利用免疫荧光法在荧光显微镜下检测到了展示在酵母菌细 胞表面上的外膜蛋白。 同时利用大肠杆菌表达载体 pQE-30，构建了哈维氏 弧菌，副溶血弧菌，溶藻胶弧菌三种弧菌外膜蛋白 K 的重组大肠杆菌，IPTG 诱 导 4h 后能够在大肠杆菌 M15 中高效表达了的融合蛋白。通过诱导表达用 Ni2+ 亲和柱纯化了重组的三种弧菌的外膜蛋白 K，SDS-PAGE 检测分子量分别为 29 kDa，30 kDa，30 kDa。 用展示有哈维氏弧菌外膜蛋白 k 的酵母菌细胞对大菱鲆进行注射免疫，采用间接 ELISA 的方法，利用上述制备的重组哈维氏弧菌 外膜蛋白 k 检测免疫鱼类血清中抗体的产生；间接 ELISA 对大菱鲆特异抗体检 测结果表明，实验组有效价，说明这种以酒精酵母为载体的活疫苗可以刺激鱼 类产生一定得抗体，但其平均效价却很低。 本研究根据哈维氏弧菌 0mpK 基因序列，3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列 和酒精酵母菌表面展示质粒载体 pYD1 上的多克隆位点设计引物，从哈维氏弧菌 基因组 DNA 和质粒 pET-OmpK-GAPDH 中通过 PCR 技术扩增外膜蛋白基因和融合基 因 0mpK-GAPDH，把该基因连接到表面展示质粒载体 pYD1 上，转化用于表面展 示的酵母 EBY100 菌株中，以不含载体和含空载体的酵母菌为对照，加 2(w/v)的 半乳糖诱导 36 h 后，利用免疫荧光法在荧光显微镜下检测到了展示在酵母菌细 胞表面上的外膜蛋白。 同时利用大肠杆菌表达载体 pQE-30，构建了哈维氏 弧菌，副溶血弧菌，溶藻胶弧菌三种弧菌外膜蛋白 K 的重组大肠杆菌，IPTG 诱 导 4h 后能够在大肠杆菌 M15 中高效表达了的融合蛋白。通过诱导表达用 Ni2+ 亲和柱纯化了重组的三种弧菌的外膜蛋白 K，SDS-PAGE 检测分子量分别为 29 kDa，30 kDa，30 kDa。 用展示有哈维氏弧菌外膜蛋白 k 的酵母菌细胞对大 菱鲆进行注射免疫，采用间接 ELISA 的方法，利用上述制备的重组哈维氏弧菌 外膜蛋白 k 检测免疫鱼类血清中抗体的产生；间接 ELISA 对大菱鲆特异抗体检 测结果表明，实验组有效价，说明这种以酒精酵母为载