动物遗传育种与繁殖专业优秀论文动物遗传育种与繁殖专业优秀论文 丙烯酰胺对雄性大鼠生殖毒性丙烯酰胺对雄性大鼠生殖毒性的研究的研究关键词：丙烯酰胺关键词：丙烯酰胺 生殖毒性生殖毒性 药物毒性药物毒性 精原细胞精原细胞 细胞凋亡细胞凋亡 睾丸睾丸摘要：丙烯酰胺(acrylamide，AA)为白色晶体物质，是一种重要的化工原料， 广泛用于饮水净化、污水处理、造纸、采矿业及科研实验等。丙烯酰胺可经皮 肤迅速吸收，是一种重要的职业接触化合物。此外，丙烯酰胺主要在高碳水化 合物、低蛋白质的植物性食物加热(120以上)烹调过程中形成，成为非职业人 群暴露的一个重要途径，因而引起广泛的关注。人体还可能通过吸烟的途径接 触丙烯酰胺。丙烯酰胺具有多种毒性，可影响雄性动物生殖和发育，但其作用 机制目前尚不清楚。以往研究中多采用高剂量急性染毒，而对丙烯酰胺经口长 期染毒所产生的生殖毒性作用的报道较少。本研究采用亚慢性毒性试验，结合 整体动物研究和体外实验，系统研究了丙烯酰胺对雄性大鼠生殖机能、脂质过 氧化水平和睾丸生殖内分泌功能的影响，旨在探究丙烯酰胺对雄性生殖及睾丸 内分泌功能活动产生的影响，为进一步研究丙烯酰胺对雄性生殖毒性作用及其 机制提供科学依据。 一、丙烯酰胺对雄性大鼠生殖功能的影响 8 周龄体 重(20010)g 健康雄性 SD 大鼠 40 只，随机分成 4 组，每组 10 只。灌胃给予 丙烯酰胺，剂量为 0(对照组)、4、10、18 mg/kg.d，每周染毒 6d，共染毒 9 周。 观察动物一般情况、体重以及脏器系数的变化染毒结束后，测量后肢支撑力， 处死大鼠收集睾丸、附睾和血清。测定精子存活率、精子畸形率、睾丸匀浆中 碱性磷酸酶(ALP)、酸性磷酸酶(ACP)、乳酸脱氢酶(LDH)和 -谷氨酰转移酶 (-GT)活性。结果表明：随着染毒剂量的增加，各剂量组与对照组比较，后肢 展开距离显著加宽(Plt;0.01)，精子存活率显著下降(Plt;0.01)。 10 mg/kg.d 和 18 mg/kg.d 剂量组精子畸形率明显上升(Plt;0.05)。ACP 活性呈下降趋势，ALP 活性呈现先上升后下降的趋势，两者的活性在 18 mg/kg.d 剂量组与对照组比较差异显著(Plt;0.05)。LDH 活性有下降的趋 势，-GT 活性有上升的趋势，但两者各组间比较差异都不显著 (Pgt;0.05)。 二、丙烯酰胺对雄性大鼠脂质过氧化水平的影响 染毒 结束后，处死大鼠收集睾丸及其他脏器和血清，测定血清和睾丸匀浆中丙二醛 (MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平以及谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)和超氧化物 歧化酶(SOD)的活性。结果表明：各剂量组与对照组比较，血清中的 GSH 水平、 MDA 水平、GSHPx 活性和 SOD 活性，无明显差异(Pgt;0.05)；而睾丸匀浆 中 GSH 水平和 sOD 活性显著下降(Plt;0.01)，GSHPx 活性也显著受到抑制 (Plt;0.05)，MDA 水平无显著差异(Pgt;0.05)。 三、丙烯酰胺对 雄性大鼠睾丸生殖内分泌功能的影响 染毒结束后，测定血清和睾丸匀浆中睾 酮(T)及 17-雌二醇(17-Elt;,2gt;)浓度。分离纯化睾丸 Leydig 细胞，建立睾丸 Leydig 细胞体外原代培养模型。Leydig 细胞培养 24h 后，通 过 CCK-8 法测定各剂量组 Leydig 细胞活性并测定细胞培养液 T 浓度。体外丙烯 酰胺染毒剂量分为对照(0mmol/L)、0.1、0.75、4、8mmol/L，同样通过 CCK-8 法观察 Leydig 细胞活性。结果表明：各染毒剂量组血清和睾丸匀浆中 T 显著下 降(Plt;0.05)，17 -Elt;,2gt;水平无明显差异，Leydig 细 胞活性明显受到抑制(Plt;0.01)，细胞培养液 T 浓度显著降低(Plt;0.01)。体外丙烯酰胺染毒 24h 后，Leydig 细胞活性受到显著抑制 (Plt;0.01)。 以上结果表明亚慢性丙烯酰胺染毒损伤雄性生育能力， 影响生精过程中有关一些特征酶活性，睾丸是丙烯酰胺毒性作用的重要靶器官， 大鼠后肢运动协调性明显受到影响；破坏睾丸氧化-抗氧化系统的平衡，诱导雄 性大鼠睾丸氧化损伤的增加，脂质过氧化可能是丙烯酰胺导致睾丸毒性作用的 机制之一；影响睾丸 Leydig 细胞的功能，改变了雄性大鼠体内 T/Elt;,2gt;分泌水平，干扰了正常的雄性生殖内分泌功能。正文内容正文内容丙烯酰胺(acrylamide，AA)为白色晶体物质，是一种重要的化工原料，广 泛用于饮水净化、污水处理、造纸、采矿业及科研实验等。丙烯酰胺可经皮肤 迅速吸收，是一种重要的职业接触化合物。此外，丙烯酰胺主要在高碳水化合 物、低蛋白质的植物性食物加热(120以上)烹调过程中形成，成为非职业人群 暴露的一个重要途径，因而引起广泛的关注。人体还可能通过吸烟的途径接触 丙烯酰胺。丙烯酰胺具有多种毒性，可影响雄性动物生殖和发育，但其作用机 制目前尚不清楚。以往研究中多采用高剂量急性染毒，而对丙烯酰胺经口长期 染毒所产生的生殖毒性作用的报道较少。本研究采用亚慢性毒性试验，结合整 体动物研究和体外实验，系统研究了丙烯酰胺对雄性大鼠生殖机能、脂质过氧 化水平和睾丸生殖内分泌功能的影响，旨在探究丙烯酰胺对雄性生殖及睾丸内 分泌功能活动产生的影响，为进一步研究丙烯酰胺对雄性生殖毒性作用及其机 制提供科学依据。 一、丙烯酰胺对雄性大鼠生殖功能的影响 8 周龄体重 (20010)g 健康雄性 SD 大鼠 40 只，随机分成 4 组，每组 10 只。灌胃给予丙 烯酰胺，剂量为 0(对照组)、4、10、18 mg/kg.d，每周染毒 6d，共染毒 9 周。 观察动物一般情况、体重以及脏器系数的变化染毒结束后，测量后肢支撑力， 处死大鼠收集睾丸、附睾和血清。测定精子存活率、精子畸形率、睾丸匀浆中 碱性磷酸酶(ALP)、酸性磷酸酶(ACP)、乳酸脱氢酶(LDH)和 -谷氨酰转移酶 (-GT)活性。结果表明：随着染毒剂量的增加，各剂量组与对照组比较，后肢 展开距离显著加宽(Plt;0.01)，精子存活率显著下降(Plt;0.01)。 10 mg/kg.d 和 18 mg/kg.d 剂量组精子畸形率明显上升(Plt;0.05)。ACP 活性呈下降趋势，ALP 活性呈现先上升后下降的趋势，两者的活性在 18 mg/kg.d 剂量组与对照组比较差异显著(Plt;0.05)。LDH 活性有下降的趋 势，-GT 活性有上升的趋势，但两者各组间比较差异都不显著 (Pgt;0.05)。 二、丙烯酰胺对雄性大鼠脂质过氧化水平的影响 染毒 结束后，处死大鼠收集睾丸及其他脏器和血清，测定血清和睾丸匀浆中丙二醛 (MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平以及谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)和超氧化物 歧化酶(SOD)的活性。结果表明：各剂量组与对照组比较，血清中的 GSH 水平、 MDA 水平、GSHPx 活性和 SOD 活性，无明显差异(Pgt;0.05)；而睾丸匀浆 中 GSH 水平和 sOD 活性显著下降(Plt;0.01)，GSHPx 活性也显著受到抑制 (Plt;0.05)，MDA 水平无显著差异(Pgt;0.05)。 三、丙烯酰胺对 雄性大鼠睾丸生殖内分泌功能的影响 染毒结束后，测定血清和睾丸匀浆中睾 酮(T)及 17-雌二醇(17-Elt;,2gt;)浓度。分离纯化睾丸 Leydig 细胞，建立睾丸 Leydig 细胞体外原代培养模型。Leydig 细胞培养 24h 后，通 过 CCK-8 法测定各剂量组 Leydig 细胞活性并测定细胞培养液 T 浓度。体外丙烯 酰胺染毒剂量分为对照(0mmol/L)、0.1、0.75、4、8mmol/L，同样通过 CCK-8 法观察 Leydig 细胞活性。结果表明：各染毒剂量组血清和睾丸匀浆中 T 显著下 降(Plt;0.05)，17 -Elt;,2gt;水平无明显差异，Leydig 细 胞活性明显受到抑制(Plt;0.01)，细胞培养液 T 浓度显著降低 (Plt;0.01)。体外丙烯酰胺染毒 24h 后，Leydig 细胞活性受到显著抑制 (Plt;0.01)。 以上结果表明亚慢性丙烯酰胺染毒损伤雄性生育能力， 影响生精过程中有关一些特征酶活性，睾丸是丙烯酰胺毒性作用的重要靶器官， 大鼠后肢运动协调性明显受到影响；破坏睾丸氧化-抗氧化系统的平衡，诱导雄性大鼠睾丸氧化损伤的增加，脂质过氧化可能是丙烯酰胺导致睾丸毒性作用的 机制之一；影响睾丸 Leydig 细胞的功能，改变了雄性大鼠体内 T/Elt;,2gt;分泌水平，干扰了正常的雄性生殖内分泌功能。 丙烯酰胺(acrylamide，AA)为白色晶体物质，是一种重要的化工原料，广泛用 于饮水净化、污水处理、造纸、采矿业及科研实验等。丙烯酰胺可经皮肤迅速 吸收，是一种重要的职业接触化合物。此外，丙烯酰胺主要在高碳水化合物、 低蛋白质的植物性食物加热(120以上)烹调过程中形成，成为非职业人群暴露 的一个重要途径，因而引起广泛的关注。人体还可能通过吸烟的途径接触丙烯 酰胺。丙烯酰胺具有多种毒性，可影响雄性动物生殖和发育，但其作用机制目 前尚不清楚。以往研究中多采用高剂量急性染毒，而对丙烯酰胺经口长期染毒 所产生的生殖毒性作用的报道较少。本研究采用亚慢性毒性试验，结合整体动 物研究和体外实验，系统研究了丙烯酰胺对雄性大鼠生殖机能、脂质过氧化水 平和睾丸生殖内分泌功能的影响，旨在探究丙烯酰胺对雄性生殖及睾丸内分泌 功能活动产生的影响，为进一步研究丙烯酰胺对雄性生殖毒性作用及其机制提 供科学依据。 一、丙烯酰胺对雄性大鼠生殖功能的影响 8 周龄体重 (20010)g 健康雄性 SD 大鼠 40 只，随机分成 4 组，每组 10 只。灌胃给予丙 烯酰胺，剂量为 0(对照组)、4、10、18 mg/kg.d，每周染毒 6d，共染毒 9 周。 观察动物一般情况、体重以及脏器系数的变化染毒结束后，测量后肢支撑力， 处死大鼠收集睾丸、附睾和血清。测定精子存活率、精子畸形率、睾丸匀浆中 碱性磷酸酶(ALP)、酸性磷酸酶(ACP)、乳酸脱氢酶(LDH)和 -谷氨酰转移酶 (-GT)活性。结果表明：随着染毒剂量的增加，各剂量组与对照组比较，后肢 展开距离显著加宽(Plt;0.01)，精子存活率显著下降(Plt;0.01)。 10 mg/kg.d 和 18 mg/kg.d 剂量组精子畸形率明显上升(Plt;0.05)。ACP 活性呈下降趋势，ALP 活性呈现先上升后下降的趋势，两者的活性在 18 mg/kg.d 剂量组与对照组比较差异显著(Plt;0.05)。LDH 活性有下降的趋 势，-GT 活性有上升的趋势，但两者各组间比较差异都不显著 (Pgt;0.05)。 二、丙烯酰胺对雄性大鼠脂质过氧化水平的影响 染毒 结束后，处死大鼠收集睾丸及其他脏器和血清，测定血清和睾丸匀浆中丙二醛 (MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平以及谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)和超氧化物 歧化酶(SOD)的活性。结果表明：各剂量组与对照组比较，血清中的 GSH 水平、 MDA 水平、GSHPx 活性和 SOD 活性，无明显差异(Pgt;0.05)；而睾丸匀浆 中 GSH 水平和 sOD 活性显著下降(Plt;0.01)，GSHPx 活性也显著受到抑制 (Plt;0.05)，MDA 水平无显著差异(Pgt;0.05)。 三、丙烯酰胺对 雄性大鼠睾丸生殖内分泌功能的影响 染毒结束后，测定血清和睾丸匀浆中睾 酮(T)及 17-雌二醇(17-Elt;,2gt;)浓度。分离纯化睾丸 Leydig 细胞，建立睾丸 Leydig 细胞体外原代培养模型。Leydig 细胞培