急诊医学专业毕业论文急诊医学专业毕业论文 精品论文精品论文 丙酮酸乙酯对脓毒症大鼠肠丙酮酸乙酯对脓毒症大鼠肠黏膜屏障功能保护作用的研究黏膜屏障功能保护作用的研究关键词：脓毒症关键词：脓毒症 丙酮酸乙酯丙酮酸乙酯 肠黏膜屏障肠黏膜屏障 丙二醛丙二醛 髓过氧化物酶髓过氧化物酶 二胺氧化酶二胺氧化酶 一氧化氮一氧化氮 D D乳酸乳酸摘要：研究目的: 脓毒症是创伤、烧伤、休克、感染等临床急危重症患者的 严重并发症，也是脓毒性休克、多器官功能障碍综合征(MODS)的主要诱因，虽 然目前脓毒症的发病机制尚未完全阐明，但肠道屏障功能损害在脓毒症中的作 用日益受到重视。保护肠黏膜屏障、控制肠道细菌移位、减轻氧自由基损伤、 减少炎症介质及内毒素释放是控制肠源性脓毒症的重要环节。而丙酮酸乙酯恰 能在上述环节发挥作用。丙酮酸乙酯是糖酵解中间产物丙酮酸的酯化物形式， 是近年来在动物实验中发现的一种有效抗炎物质，具有抗氧化、抗炎症介质和 保护脏器等作用。本研究通过复制脓毒症模型，运用丙酮酸乙酯干预治疗，观 察丙酮酸乙酯对肠黏膜屏障功能的保护作用。 研究方法: 1、实验动物分 组 丙酮酸乙酯对脓毒症大鼠生存率的影响：100 只健康雄性 SD 大鼠随机分 为假手术组、脓毒症组、早期治疗组、延迟治疗组 4 组，每组 25 只，假手术组 仅行简单剖腹手术，脓毒症组、早期治疗组、延迟治疗组均采用盲肠结扎穿孔 法复制脓毒症模型，各组均于术后 6、12、18、24、36、48、60 及 72 小时腹腔 内注射给药。假手术组与脓毒症组注射 3ml 乳酸钠林格溶液(ringer lactate solution，RLS)；早期治疗组注射 3ml 丙酮酸乙酯溶液(ringer ethyl pyruvate solution，REPS)(40mg/kg 体重)；延迟治疗组除术后 6 小时注射 3ml 乳酸钠林格注射液外，其余处理均同早期治疗组。每隔 12 小时观察大鼠死亡情 况，记录大鼠 5 天生存率。 丙酮酸乙酯对脓毒症大鼠肠黏膜屏障功能的保护 作用：80 只健康雄性 SD 大鼠随机分为假手术组(A 组)、脓毒症组(B 组)、早期 治疗组(C 组)、延迟治疗组(D 组)4 组，每组 20 只，分别于术后 24、48 小时各 处死 10 只，留取血浆及小肠组织待检。各组均于术后 6、12、18、24、36h 腹 腔内注射给药，假手术组与脓毒症组注射 3ml 乳酸钠林格注射液；早期治疗组 注射丙酮酸乙酯 3ml(40mg/kg 体重)；延迟治疗组除术后 6 小时注射 3ml 乳酸钠 林格注射液外，其余处理均同早期治疗组。 2、实验方法：(1)各组生存率分 析；(2)光学显微镜观察各组小肠组织病理切片，根据 Chiu 肠黏膜损伤评分方 法，对小肠黏膜损伤程度进行分级；(3)电子显微镜下观察小肠黏膜超微结构； (4)测定肠黏膜组织丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)和血浆一氧化氮(NO)、D- 乳酸、二胺氧化酶(DAO)水平。 3、统计方法：多组均数比较采用单因素方差 分析的方法，均数间两两比较采用 q 检验；采用 Kaplan-Meier 生存分析法进行 生存分析；成组设计多个样本的等级资料比较采用 Kruskal-Wallis 秩和检验法， 组间比较用 Wilcoxon 秩和检验法。P0.05 为差别不显著，无统计学意义， P0.05 为统计学差异显著。 结果: 1、生存率分析：假手术组未发现动 物死亡，CLP 组生存率为 24，早期治疗组生存率为 68，延迟治疗组生存率 为 56。 2、小肠黏膜组织病理学改变：A 组光镜下可见小肠黏膜各层结构 完整，肠绒毛排列整齐。B 组光镜下可见小肠绒毛稀疏、排列不整齐、水肿、 充血、有中性粒细胞浸润，部分区域有黏膜上皮脱落，部分绒毛顶端破损，固 有层暴露。C、D 组光镜下亦见黏膜水肿、充血，有中性粒细胞浸润，但未见黏膜上皮脱落。病理损伤等级评分显示：B、C 及 D 组 CLP 术后小肠黏膜损伤均明 显比 A 组严重(P0.05)；与 B 组同时间点比较，C、D 组 CLP 术后小肠黏膜损 伤显著减轻(P0.05)；C、D 组术后各时间点小肠黏膜损伤严重程度差异不显 著(P0.05)，相互之间无统计学意义。 3、小肠黏膜超微结构改变：A 组电 镜下可见肠黏膜微绒毛形态正常，肠上皮细胞间紧密连接完好；B 组电镜下见 微绒毛稀疏，排列不整齐，内质网空泡变性，线粒体嵴消失，上皮细胞紧密连 接宽短，结构松弛；C、D 组电镜下见轻微微绒毛脱失，线粒体嵴模糊，内质网 空泡变性少，上皮细胞间紧密连接较清楚。 4、肠黏膜组织 MDA 含量：与 A 组相同时间点比较，B、C、D 组术后小肠黏膜 MDA 含量均显著升高(P0.05)； 与 B 组相同时间点比较，C、D 组术后小肠黏膜 MDA 含量显著下降(P0.05)； C、D 组术后各相同时间点小肠黏膜 MDA 含量差异不显著(P0.05)，相互之间 无统计学意义；B 组术后 48h 小肠黏膜 MDA 含量较 24h 显著下降(P0.05)； C、D 组组内不同时间点小肠黏膜 MDA 含量相互比较未见显著差异(P0.05)， 相互之间无统计学意义。 5、肠黏膜组织 MPO 活性：与 A 组相同时间点比较， B、C、D 组术后小肠黏膜 MPO 活性均显著升高(P0.05)；与 B 组同时间点比较， C、D 组术后小肠黏膜 MPO 活性显著下降(P0.05)；C、D 组术后 24 小时小肠黏 膜 MPO 活性差异显著(P0.05)；C、D 组术后 48 小时小肠黏膜 MPO 活性差异不 显著(P0.05)，相互之间无统计学意义；各组组内不同时间点相互比较未见显 著差异(P0.05)，相互之间无统计学意义。 6、血浆 NO 含量：与 A 组同时 间点比较，B、C、D 组术后血浆 NO 含量均显著升高(P0.05)；与 B 组同时间 点比较，C、D 组术后血浆 NO 含量显著降低(P0.05)；C、D 组术后相同时间点 血浆 NO 含量差异不显著(P0.05)，相互之间无统计学意义；B、C、D 各组 CLP 术后 48h 血浆 NO 含量较 24h 均显著升高。(P0.05)。 7、血浆 D-乳酸含量： 与 A 组同时间点比较，B、C 组、D 组术后血浆 D-乳酸含量均显著升高(P0.05)； 与 B 组同时间点比较，C、D 组术后血浆 D-乳酸含量显著下降(P0.05)；C、D 组术后各相同时间点血浆 D-乳酸含量差异不显著(P0.05)，相互之间无统计 学意义；各组组内不同时间点相互比较未见显著差异(P0.05)，相互之间无统 计学意义。 8、血浆 DAO 活性：与 A 组同时间点比较，B、C、D 组术后血浆 DAO 活性均升高(P0.05)；与 B 组同时间点比较，C、D 组术后血浆 DAO 活性显 著下降(P0.05)；C、D 组术后各相同时间点血浆 DAO 活性差异不显著 (P0.05)，相互之间无统计学意义；B 组组内不同时间点 DAO 活性差异显著 (P0.05)；C、D 组组内不同时间点相互比较未见显著差异(P0.05)，相互之 间无统计学意义。 结论: 脓毒症时肠黏膜病理损伤严重，肠黏膜上皮细胞 过氧化损伤是其重要原因，丙酮酸乙酯早期与延迟干预治疗均能有效清除脓毒 症大鼠血浆及组织中的活性氧，抑制肠黏膜上皮细胞脂质过氧化损伤及炎症细 胞浸润，从而抑制炎症因子级联反应，保护肠黏膜屏障功能，提高脓毒症大鼠 5 日生存率，具有较好的抗脓毒症作用。正文内容正文内容研究目的: 脓毒症是创伤、烧伤、休克、感染等临床急危重症患者的严 重并发症，也是脓毒性休克、多器官功能障碍综合征(MODS)的主要诱因，虽然 目前脓毒症的发病机制尚未完全阐明，但肠道屏障功能损害在脓毒症中的作用 日益受到重视。保护肠黏膜屏障、控制肠道细菌移位、减轻氧自由基损伤、减 少炎症介质及内毒素释放是控制肠源性脓毒症的重要环节。而丙酮酸乙酯恰能 在上述环节发挥作用。丙酮酸乙酯是糖酵解中间产物丙酮酸的酯化物形式，是 近年来在动物实验中发现的一种有效抗炎物质，具有抗氧化、抗炎症介质和保 护脏器等作用。本研究通过复制脓毒症模型，运用丙酮酸乙酯干预治疗，观察 丙酮酸乙酯对肠黏膜屏障功能的保护作用。 研究方法: 1、实验动物分组 丙酮酸乙酯对脓毒症大鼠生存率的影响：100 只健康雄性 SD 大鼠随机分为假手 术组、脓毒症组、早期治疗组、延迟治疗组 4 组，每组 25 只，假手术组仅行简 单剖腹手术，脓毒症组、早期治疗组、延迟治疗组均采用盲肠结扎穿孔法复制 脓毒症模型，各组均于术后 6、12、18、24、36、48、60 及 72 小时腹腔内注射 给药。假手术组与脓毒症组注射 3ml 乳酸钠林格溶液(ringer lactate solution，RLS)；早期治疗组注射 3ml 丙酮酸乙酯溶液(ringer ethyl pyruvate solution，REPS)(40mg/kg 体重)；延迟治疗组除术后 6 小时注射 3ml 乳酸钠林格注射液外，其余处理均同早期治疗组。每隔 12 小时观察大鼠死亡情 况，记录大鼠 5 天生存率。 丙酮酸乙酯对脓毒症大鼠肠黏膜屏障功能的保护 作用：80 只健康雄性 SD 大鼠随机分为假手术组(A 组)、脓毒症组(B 组)、早期 治疗组(C 组)、延迟治疗组(D 组)4 组，每组 20 只，分别于术后 24、48 小时各 处死 10 只，留取血浆及小肠组织待检。各组均于术后 6、12、18、24、36h 腹 腔内注射给药，假手术组与脓毒症组注射 3ml 乳酸钠林格注射液；早期治疗组 注射丙酮酸乙酯 3ml(40mg/kg 体重)；延迟治疗组除术后 6 小时注射 3ml 乳酸钠 林格注射液外，其余处理均同早期治疗组。 2、实验方法：(1)各组生存率分 析；(2)光学显微镜观察各组小肠组织病理切片，根据 Chiu 肠黏膜损伤评分方 法，对小肠黏膜损伤程度进行分级；(3)电子显微镜下观察小肠黏膜超微结构； (4)测定肠黏膜组织丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)和血浆一氧化氮(NO)、D- 乳酸、二胺氧化酶(DAO)水平。 3、统计方法：多组均数比较采用单因素方差 分析的方法，均数间两两比较采用 q 检验；采用 Kaplan-Meier 生存分析法进行 生存分析；成组设计多个样本的等级资料比较采用 Kruskal-Wallis 秩和检验法， 组间比较用 Wilcoxon 秩和检验法。P0.05 为差别不显著，无统计学意义， P0.05 为统计学差异显著。 结果: 1、生存率分析：假手术组未发现动 物死亡，CLP 组生存率为 24，早期治疗组生存率为 68，延迟治疗组生存率 为 56。 2、小肠黏膜组织病理学改变：A 组光镜下可见小肠黏膜各层结构 完整，肠绒毛排列整齐。B 组光镜下可见小肠绒毛稀疏、排列不整齐、水肿、 充血、有中性粒细胞浸润，部分区域有黏膜上皮脱落，部分绒毛顶端破损，固 有层暴露。C、D 组光镜下亦见黏膜水肿、充血，有中性粒细胞浸润，但未见黏 膜上皮脱落。病理损伤等级评分显示：B、C 及 D 组 CLP 术后小肠黏膜损伤均明 显比 A 组严重(P0.05)；与 B 组同时间点比较，C、D 组 CLP 术后小肠黏膜损 伤显著减轻(P0.05)；C、D 组术后各时间点小肠黏膜损伤严重程度差异不显 著(P0.05)，相互之间无统计学意义。 3、小肠黏膜超微结构改变：A 组电 镜下可见肠黏膜微绒毛形态正常，肠上皮细胞间紧密连接完好；B 组电镜下见微绒毛稀疏，排列不整齐，内质网空泡变性，线粒体嵴消失，上皮细胞紧密连 接宽短，结构松弛；C、D 组电镜下