儿科学儿科学( (呼吸呼吸) )专业毕业论文专业毕业论文 精品论文精品论文 内质网应激对慢性间歇内质网应激对慢性间歇低氧幼鼠神经元凋亡的影响及机制低氧幼鼠神经元凋亡的影响及机制关键词：慢性间歇低氧关键词：慢性间歇低氧 内质网应激内质网应激 细胞凋亡细胞凋亡摘要：目的： 通过模拟儿童阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征 (Obstructive sleep apnea hypopnea syndrome，OSAHS)的典型病理生理特征， 建立慢性间歇低氧幼鼠模型：(1)研究其空间学习记忆能力的变化；(2)光镜、 TUNEL(Terminal deoxynucleotidyl Transferase Biotin-dUTP Nick End Labeling)法观察海马、皮层神经元凋亡改变；(3)检测海马、皮层分子伴侣葡 萄糖调节蛋白 78(GRP78)、胱冬酶-12(caspase-12)蛋白与基因的表达水平；探 讨内质网应激对慢性间歇低氧幼鼠神经元凋亡的影响及机制。 方法： SPF 级健康雄性 Sprague-Dawley(SD)幼鼠(34 周龄)46 只，体重为 80100 克， 进行八臂迷宫训练。10 天后，其中 6 只因不能完成迷宫训练或绕臂被排除，训 练成功的幼鼠随机分为四组：间歇低氧 2 周组(2IH 组，n=10)、间歇低氧 4 周 组(4IH 组，n=10)、空气对照 2 周组(2C 组，n=10)、空气对照 4 周组(4C 组， n=10)。将 2IH、4IH 组幼鼠放入间歇低氧舱内，计算机程控 N2(99.99)和 O2(99.5)轮流输入，使舱内低氧时氧浓度在 9.01.5，复氧时氧浓度在 21.00.5，舱内 CO2 浓度lt;0.1，90s 一次循环，每天 7.5 小时， 每周 7 天；两对照组除输入气体为压缩空气外，其他条件与前者相同。在慢性 间歇低氧的第 2 周、4 周，分别对实验组及对照组进行八臂迷宫测试。测试结 束，每组随机抽取 1 只幼鼠，以戊巴比妥钠(35mgkg-1 bw，ip)麻醉后， 04的 4戊二醛缓慢灌注，取脑分离海马、皮层组织后常规制作石蜡标本， HE 染色、TUNEL 观察海马、皮层神经元病理学改变及凋亡变化。余幼鼠立即处 死，断头分离海马、皮层，Western blot 法检测海马、皮层 GRP78 蛋白表达， 免疫组化法检测海马、皮层 caspase-12 蛋白表达，RT-PCR 法测海马、皮层 GRP78mRNA、caspase-12mRNA 基因表达。 结果： (1)2IH、4IH、2C 和 4C 组的参考记忆错误次数(RME)、工作记忆错误次数(WME)和总错误次数(TE)的比 较均有显著差别(P 均lt;0.01)，4 组间两两间比较后发现除 2IH 与 2C 组 之 WME 项外，其余各间歇低氧组记忆均受损，尤以 4IH 为甚，两对照组之间无 显著性差异(Pgt;0.05)。 (2)光镜观察显示，2IH 和 4IH 组幼鼠海马和 皮层神经元出现胞核固缩，胞浆空泡化，部分染色质碎裂，且损伤范围和程度 以 4IH 组最重，呈现时间依赖性，而对照组则基本正常。TUNEL 结果示：与相 应对照组比较，2IH、4IH 组幼鼠海马、皮层神经元凋亡较多，差异有显著性(P 均lt;0.01)，且随时间的延长，两低氧组间幼鼠海马、皮层神经元凋亡差 异有显著性(Plt;0.01、Plt;0.05)，两对照组之间无显著性差异 (Pgt;0.05)。 (3)与相应对照组比较，2IH、4IH 组幼鼠海马、皮层 GRP78mRNA 和 GRP78 蛋白的表达显著增加(P 均lt;0.05)，差异有显著性， 两对照组之间无显著性差异(Pgt;0.05)。 (4)与相应对照组相比， 2IH、4IH 组幼鼠海马、皮层 caspase-12mRNA 和 caspase-12 蛋白的表达水平显 著增加(P 均lt;0.01)，且以 4IH 组最高(P 均lt;0.05)，差异有显著 性，两对照组之间无显著性差异(Pgt;0.05)。 结论： (1)慢性间歇 低氧导致幼鼠海马、皮层神经元凋亡，从而引起幼鼠学习记忆障碍，且呈时间依赖性。 (2)慢性间歇低氧上调海马、皮层 GRP78mRNA 和 GRP78 蛋白的表达， 提示慢性间歇低氧诱发内质网应激。 (3)慢性间歇低氧上调幼鼠海马、皮层 caspase-12mRNA 和 caspase-12 蛋白的表达，提示慢性间歇低氧启动了 caspase-12 介导的细胞凋亡信号通路。 综上所述：慢性间歇低氧诱发了内 质网应激，启动了 caspase-12 介导的细胞凋亡信号通路，caspase-12 上调导 致幼鼠海马神经元凋亡，从而引起学习记忆能力下降。正文内容正文内容目的： 通过模拟儿童阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(Obstructive sleep apnea hypopnea syndrome，OSAHS)的典型病理生理特征，建立慢性间歇 低氧幼鼠模型：(1)研究其空间学习记忆能力的变化；(2)光镜、 TUNEL(Terminal deoxynucleotidyl Transferase Biotin-dUTP Nick End Labeling)法观察海马、皮层神经元凋亡改变；(3)检测海马、皮层分子伴侣葡 萄糖调节蛋白 78(GRP78)、胱冬酶-12(caspase-12)蛋白与基因的表达水平；探 讨内质网应激对慢性间歇低氧幼鼠神经元凋亡的影响及机制。 方法： SPF 级健康雄性 Sprague-Dawley(SD)幼鼠(34 周龄)46 只，体重为 80100 克， 进行八臂迷宫训练。10 天后，其中 6 只因不能完成迷宫训练或绕臂被排除，训 练成功的幼鼠随机分为四组：间歇低氧 2 周组(2IH 组，n=10)、间歇低氧 4 周 组(4IH 组，n=10)、空气对照 2 周组(2C 组，n=10)、空气对照 4 周组(4C 组， n=10)。将 2IH、4IH 组幼鼠放入间歇低氧舱内，计算机程控 N2(99.99)和 O2(99.5)轮流输入，使舱内低氧时氧浓度在 9.01.5，复氧时氧浓度在 21.00.5，舱内 CO2 浓度lt;0.1，90s 一次循环，每天 7.5 小时， 每周 7 天；两对照组除输入气体为压缩空气外，其他条件与前者相同。在慢性 间歇低氧的第 2 周、4 周，分别对实验组及对照组进行八臂迷宫测试。测试结 束，每组随机抽取 1 只幼鼠，以戊巴比妥钠(35mgkg-1 bw，ip)麻醉后， 04的 4戊二醛缓慢灌注，取脑分离海马、皮层组织后常规制作石蜡标本， HE 染色、TUNEL 观察海马、皮层神经元病理学改变及凋亡变化。余幼鼠立即处 死，断头分离海马、皮层，Western blot 法检测海马、皮层 GRP78 蛋白表达， 免疫组化法检测海马、皮层 caspase-12 蛋白表达，RT-PCR 法测海马、皮层 GRP78mRNA、caspase-12mRNA 基因表达。 结果： (1)2IH、4IH、2C 和 4C 组的参考记忆错误次数(RME)、工作记忆错误次数(WME)和总错误次数(TE)的比 较均有显著差别(P 均lt;0.01)，4 组间两两间比较后发现除 2IH 与 2C 组 之 WME 项外，其余各间歇低氧组记忆均受损，尤以 4IH 为甚，两对照组之间无 显著性差异(Pgt;0.05)。 (2)光镜观察显示，2IH 和 4IH 组幼鼠海马和 皮层神经元出现胞核固缩，胞浆空泡化，部分染色质碎裂，且损伤范围和程度 以 4IH 组最重，呈现时间依赖性，而对照组则基本正常。TUNEL 结果示：与相 应对照组比较，2IH、4IH 组幼鼠海马、皮层神经元凋亡较多，差异有显著性(P 均lt;0.01)，且随时间的延长，两低氧组间幼鼠海马、皮层神经元凋亡差 异有显著性(Plt;0.01、Plt;0.05)，两对照组之间无显著性差异 (Pgt;0.05)。 (3)与相应对照组比较，2IH、4IH 组幼鼠海马、皮层 GRP78mRNA 和 GRP78 蛋白的表达显著增加(P 均lt;0.05)，差异有显著性， 两对照组之间无显著性差异(Pgt;0.05)。 (4)与相应对照组相比， 2IH、4IH 组幼鼠海马、皮层 caspase-12mRNA 和 caspase-12 蛋白的表达水平显 著增加(P 均lt;0.01)，且以 4IH 组最高(P 均lt;0.05)，差异有显著 性，两对照组之间无显著性差异(Pgt;0.05)。 结论： (1)慢性间歇 低氧导致幼鼠海马、皮层神经元凋亡，从而引起幼鼠学习记忆障碍，且呈时间 依赖性。 (2)慢性间歇低氧上调海马、皮层 GRP78mRNA 和 GRP78 蛋白的表达， 提示慢性间歇低氧诱发内质网应激。 (3)慢性间歇低氧上调幼鼠海马、皮层 caspase-12mRNA 和 caspase-12 蛋白的表达，提示慢性间歇低氧启动了 caspase-12 介导的细胞凋亡信号通路。 综上所述：慢性间歇低氧诱发了内质网应激，启动了 caspase-12 介导的细胞凋亡信号通路，caspase-12 上调导 致幼鼠海马神经元凋亡，从而引起学习记忆能力下降。 目的： 通过模拟儿童阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(Obstructive sleep apnea hypopnea syndrome，OSAHS)的典型病理生理特征，建立慢性间歇 低氧幼鼠模型：(1)研究其空间学习记忆能力的变化；(2)光镜、 TUNEL(Terminal deoxynucleotidyl Transferase Biotin-dUTP Nick End Labeling)法观察海马、皮层神经元凋亡改变；(3)检测海马、皮层分子伴侣葡 萄糖调节蛋白 78(GRP78)、胱冬酶-12(caspase-12)蛋白与基因的表达水平；探 讨内质网应激对慢性间歇低氧幼鼠神经元凋亡的影响及机制。 方法： SPF 级健康雄性 Sprague-Dawley(SD)幼鼠(34 周龄)46 只，体重为 80100 克， 进行八臂迷宫训练。10 天后，其中 6 只因不能完成迷宫训练或绕臂被排除，训 练成功的幼鼠随机分为四组：间歇低氧 2 周组(2IH 组，n=10)、间歇低氧 4 周 组(4IH 组，n=10)、空气对照 2 周组(2C 组，n=10)、空气对照 4 周组(4C 组， n=10)。将 2IH、4IH 组幼鼠放入间歇低氧舱内，计算机程控 N2(99.99)和 O2(99.5)轮流输入，使舱内低氧时氧浓度在 9.01.5，复氧时氧浓度在 21.00.5，舱内 CO2 浓度lt;0.1，90s 一次循环，每天 7.5 小时， 每周 7 天；两对照组除输入气体为压缩空气外，其他条件与前者相同。在慢性 间歇低氧的第 2 周、4 周，分别对实验组及对照组进行八臂迷宫测试。测试结 束，每组随机抽取 1 只幼鼠，以戊巴比妥钠(35mgkg-1 bw，ip)麻醉后， 04的 4戊二醛缓慢灌注，取脑分离海马、皮层组织后常规制作石蜡标本， HE 染色、TUNEL 观察海马、皮层神经元病理学改变及凋亡变化。余幼鼠立即处 死，断头分离海马、皮层，Western blot 法检测海马、皮层 GRP78 蛋白表达， 免疫组化法检测海马、皮层 caspase-12 蛋白表达，RT-PCR 法测海马、皮层 GRP78mRNA、caspase-12mRNA 基因表达。 结果： (1)2IH、4IH、2C 和 4C 组的参考记忆错误次数(RME)、工作记忆错误次数(WME)和总错误次数(TE)的比 较均