草业科学专业优秀论文草业科学专业优秀论文 匍匐翦股颖高效再生体系的建立及农杆菌匍匐翦股颖高效再生体系的建立及农杆菌介导的溶菌酶介导的溶菌酶-GFP-GFP 基因的转化基因的转化关键词：匍匐翦股颖关键词：匍匐翦股颖 再生体系再生体系 农杆菌介导农杆菌介导 基因转化基因转化 抗病基因抗病基因 溶菌酶溶菌酶-GFP-GFP 基因基因摘要：匍匐翦股颖（AgrostisstoloniferaL） ，英文名 Creeping Bentgrass。它具有较强的耐寒性、耐旱性、耐荫性，并耐低度修剪。利用转基 因技术培养匍匐翦股颖抗病新品种是目前草坪草育种中较为有效的手段之一。 本研究的目的是利用农杆菌介导法，将抗病基因溶菌酶基因转入匍匐翦股颖中， 以提高其抗病性能。 本文比较了 3 个匍匐翦股颖育成品种（潘娜 1 号、海滨、 普特）的再生能力，建立了这三个品种的植株再生体系，从中筛选出再生能力 较强的品种。并利用农杆菌介导法对其进行了溶菌酶基因的转化。主要研究内 容及结果如下： 1建立了匍匐翦股颖三个品种植株再生体系。以匍匐翦股 颖潘娜 1 号、海滨和普特的成熟种子为外植体，进行愈伤组织诱导、分化及生 根研究。结果表明：在 MS 培养基上，以不同浓度 2，4-D 诱导潘娜 1 号、海滨 和普特的愈伤组织时，普特的愈伤组织诱导率高于潘娜 1 号和海滨。 2mg/L2，4-D+01 mg/L6-BA 为潘娜 1 号和海滨诱导愈伤组织的最适激素组合， 3mg/L2，4-D+01 mg/L6-BA 为普特愈伤组织诱导的最适激素组合。诱导率分 别为 452%、765%、870%； MSO 为最适合的分化培养基，分化率分别为 500%、590%、576%。1/2MS+10mg/LIBA 为生根培养基。经比较海滨、 普特的再生能力优于潘娜 1 号。 2探索了匍匐翦股颖基因转化的影响因素， 建立了其基因转化体系。以培养 10 周的匍匐翦股颖海滨、普特品种愈伤组织为 外植体，以农杆菌菌株为介体，研究了该品种基因转化的若干影响因素，结果 如下：匍匐翦股颖对卡那霉素不敏感，因此利用卡那霉素筛选匍匐翦股颖抗性 品种没有效果；抑菌剂选取羧苄青霉素为宜，浓度为 300mg/L；浸染时间为 10min 为宜；菌液浓度 OD600=0305，与农杆菌共培养 3 天有利于转化。 本试验得到 46 株转化植株，19 株为普特品种，27 株为海滨品种。取 4 株海滨 品种和 4 株普特品种经荧光检测和 PCR 检测均呈阴性。正文内容正文内容匍匐翦股颖（AgrostisstoloniferaL） ，英文名 Creeping Bentgrass。它具有较强的耐寒性、耐旱性、耐荫性，并耐低度修剪。利用转基 因技术培养匍匐翦股颖抗病新品种是目前草坪草育种中较为有效的手段之一。 本研究的目的是利用农杆菌介导法，将抗病基因溶菌酶基因转入匍匐翦股颖中， 以提高其抗病性能。 本文比较了 3 个匍匐翦股颖育成品种（潘娜 1 号、海滨、 普特）的再生能力，建立了这三个品种的植株再生体系，从中筛选出再生能力 较强的品种。并利用农杆菌介导法对其进行了溶菌酶基因的转化。主要研究内 容及结果如下： 1建立了匍匐翦股颖三个品种植株再生体系。以匍匐翦股 颖潘娜 1 号、海滨和普特的成熟种子为外植体，进行愈伤组织诱导、分化及生 根研究。结果表明：在 MS 培养基上，以不同浓度 2，4-D 诱导潘娜 1 号、海滨 和普特的愈伤组织时，普特的愈伤组织诱导率高于潘娜 1 号和海滨。 2mg/L2，4-D+01 mg/L6-BA 为潘娜 1 号和海滨诱导愈伤组织的最适激素组合， 3mg/L2，4-D+01 mg/L6-BA 为普特愈伤组织诱导的最适激素组合。诱导率分 别为 452%、765%、870%； MSO 为最适合的分化培养基，分化率分别为 500%、590%、576%。1/2MS+10mg/LIBA 为生根培养基。经比较海滨、 普特的再生能力优于潘娜 1 号。 2探索了匍匐翦股颖基因转化的影响因素， 建立了其基因转化体系。以培养 10 周的匍匐翦股颖海滨、普特品种愈伤组织为 外植体，以农杆菌菌株为介体，研究了该品种基因转化的若干影响因素，结果 如下：匍匐翦股颖对卡那霉素不敏感，因此利用卡那霉素筛选匍匐翦股颖抗性 品种没有效果；抑菌剂选取羧苄青霉素为宜，浓度为 300mg/L；浸染时间为 10min 为宜；菌液浓度 OD600=0305，与农杆菌共培养 3 天有利于转化。 本试验得到 46 株转化植株，19 株为普特品种，27 株为海滨品种。取 4 株海滨 品种和 4 株普特品种经荧光检测和 PCR 检测均呈阴性。 匍匐翦股颖（AgrostisstoloniferaL） ，英文名 Creeping Bentgrass。它 具有较强的耐寒性、耐旱性、耐荫性，并耐低度修剪。利用转基因技术培养匍 匐翦股颖抗病新品种是目前草坪草育种中较为有效的手段之一。本研究的目的 是利用农杆菌介导法，将抗病基因溶菌酶基因转入匍匐翦股颖中，以提高其抗 病性能。 本文比较了 3 个匍匐翦股颖育成品种（潘娜 1 号、海滨、普特）的 再生能力，建立了这三个品种的植株再生体系，从中筛选出再生能力较强的品 种。并利用农杆菌介导法对其进行了溶菌酶基因的转化。主要研究内容及结果 如下： 1建立了匍匐翦股颖三个品种植株再生体系。以匍匐翦股颖潘娜 1 号、海滨和普特的成熟种子为外植体，进行愈伤组织诱导、分化及生根研究。 结果表明：在 MS 培养基上，以不同浓度 2，4-D 诱导潘娜 1 号、海滨和普特的 愈伤组织时，普特的愈伤组织诱导率高于潘娜 1 号和海滨。2mg/L2，4-D+01 mg/L6-BA 为潘娜 1 号和海滨诱导愈伤组织的最适激素组合，3mg/L2，4-D+01 mg/L6-BA 为普特愈伤组织诱导的最适激素组合。诱导率分别为 452%、765%、870%； MSO 为最适合的分化培养基，分化率分别为 500%、590%、576%。1/2MS+10mg/LIBA 为生根培养基。经比较海滨、 普特的再生能力优于潘娜 1 号。 2探索了匍匐翦股颖基因转化的影响因素， 建立了其基因转化体系。以培养 10 周的匍匐翦股颖海滨、普特品种愈伤组织为 外植体，以农杆菌菌株为介体，研究了该品种基因转化的若干影响因素，结果 如下：匍匐翦股颖对卡那霉素不敏感，因此利用卡那霉素筛选匍匐翦股颖抗性品种没有效果；抑菌剂选取羧苄青霉素为宜，浓度为 300mg/L；浸染时间为 10min 为宜；菌液浓度 OD600=0305，与农杆菌共培养 3 天有利于转化。 本试验得到 46 株转化植株，19 株为普特品种，27 株为海滨品种。取 4 株海滨 品种和 4 株普特品种经荧光检测和 PCR 检测均呈阴性。 匍匐翦股颖（AgrostisstoloniferaL） ，英文名 Creeping Bentgrass。它 具有较强的耐寒性、耐旱性、耐荫性，并耐低度修剪。利用转基因技术培养匍 匐翦股颖抗病新品种是目前草坪草育种中较为有效的手段之一。本研究的目的 是利用农杆菌介导法，将抗病基因溶菌酶基因转入匍匐翦股颖中，以提高其抗 病性能。 本文比较了 3 个匍匐翦股颖育成品种（潘娜 1 号、海滨、普特）的 再生能力，建立了这三个品种的植株再生体系，从中筛选出再生能力较强的品 种。并利用农杆菌介导法对其进行了溶菌酶基因的转化。主要研究内容及结果 如下： 1建立了匍匐翦股颖三个品种植株再生体系。以匍匐翦股颖潘娜 1 号、海滨和普特的成熟种子为外植体，进行愈伤组织诱导、分化及生根研究。 结果表明：在 MS 培养基上，以不同浓度 2，4-D 诱导潘娜 1 号、海滨和普特的 愈伤组织时，普特的愈伤组织诱导率高于潘娜 1 号和海滨。2mg/L2，4-D+01 mg/L6-BA 为潘娜 1 号和海滨诱导愈伤组织的最适激素组合，3mg/L2，4-D+01 mg/L6-BA 为普特愈伤组织诱导的最适激素组合。诱导率分别为 452%、765%、870%； MSO 为最适合的分化培养基，分化率分别为 500%、590%、576%。1/2MS+10mg/LIBA 为生根培养基。经比较海滨、 普特的再生能力优于潘娜 1 号。 2探索了匍匐翦股颖基因转化的影响因素， 建立了其基因转化体系。以培养 10 周的匍匐翦股颖海滨、普特品种愈伤组织为 外植体，以农杆菌菌株为介体，研究了该品种基因转化的若干影响因素，结果 如下：匍匐翦股颖对卡那霉素不敏感，因此利用卡那霉素筛选匍匐翦股颖抗性 品种没有效果；抑菌剂选取羧苄青霉素为宜，浓度为 300mg/L；浸染时间为 10min 为宜；菌液浓度 OD600=0305，与农杆菌共培养 3 天有利于转化。 本试验得到 46 株转化植株，19 株为普特品种，27 株为海滨品种。取 4 株海滨 品种和 4 株普特品种经荧光检测和 PCR 检测均呈阴性。 匍匐翦股颖（AgrostisstoloniferaL） ，英文名 Creeping Bentgrass。它 具有较强的耐寒性、耐旱性、耐荫性，并耐低度修剪。利用转基因技术培养匍 匐翦股颖抗病新品种是目前草坪草育种中较为有效的手段之一。本研究的目的 是利用农杆菌介导法，将抗病基因溶菌酶基因转入匍匐翦股颖中，以提高其抗 病性能。 本文比较了 3 个匍匐翦股颖育成品种（潘娜 1 号、海滨、普特）的 再生能力，建立了这三个品种的植株再生体系，从中筛选出再生能力较强的品 种。并利用农杆菌介导法对其进行了溶菌酶基因的转化。主要研究内容及结果 如下： 1建立了匍匐翦股颖三个品种植株再生体系。以匍匐翦股颖潘娜 1 号、海滨和普特的成熟种子为外植体，进行愈伤组织诱导、分化及生根研究。 结果表明：在 MS 培养基上，以不同浓度 2，4-D 诱导潘娜 1 号、海滨和普特的 愈伤组织时，普特的愈伤组织诱导率高于潘娜 1 号和海滨。2mg/L2，4-D+01 mg/L6-BA 为潘娜 1 号和海滨诱导愈伤组织的最适激素组合，3mg/L2，4-D+01 mg/L6-BA 为普特愈伤组织诱导的最适激素组合。诱导率分别为 452%、765%、870%； MSO 为最适合的分化培养基，分化率分别为 500%、590%、576%。1/2MS+10mg/LIBA 为生根培养基。经比较海滨、 普特的再生能力优于潘娜 1 号。 2探索了匍匐翦股颖基因转化的影响因素， 建立了其基因转化体系。以培养 10 周的匍匐翦股颖海滨、普特品种愈伤组织为外植体，以农杆菌菌株为介体，研究了该品种基因转化的若干影响因素，结果 如下：匍匐翦股颖对卡那霉素不敏感，因此利用卡那霉素筛选匍匐翦股颖抗性 品种没有效果；抑菌剂选取羧苄青霉素为宜，浓度为 300mg/L；浸染时间为 10min 为宜；菌液浓度 OD600=0305，与农杆菌共培养 3 天有利于转化。 本试验得到 46 株转化植株，19 株为普特品种，27 株为海滨品种。取 4 株海滨 品种和 4 株普特品种经荧光检测和 PCR 检测均呈阴性。 匍匐翦股颖（AgrostisstoloniferaL） ，英文名 Creeping Bentgrass。它 具有较强的耐寒性、耐旱性、耐荫性，并耐低度修剪。利用转基因技术培养匍 匐翦股颖抗病新品种是目前草坪草育种中较为有效的手段之一。本研究的目的 是利用农杆菌介导法，将抗病基因溶菌酶基因转入匍匐翦股颖中，以提高其抗 病性能。 本文比较了 3 个匍匐翦股颖育成品种（潘娜 1 号、海滨、普特）的 再生能力，建立了这三个品种的植株再生体系，从中筛选出再生能力较强的品 种。并利用农杆菌介导法对其进行了溶菌酶基因的转化。主要研究内容及结果