大野荞清除活性氧作用研究大野荞清除活性氧作用研究摘摘 要：要：用NBT的光还原原理、Fenton体系产生的羟自由基与番红花红T作用后使体系吸光度降低、H2O2能和钼酸铵反应形成黄色络合物等原理研究了大野荞各器官（花、叶、茎、根、种子）水提液对羟基自由基（OH） 、超氧阴离子自由基（O2）和过氧化氢(H2O2)的清除作用。结果发现：花对OH的清除作用极显著高于种子，与叶、茎之间无显著差异；根对O2-的清除作用与花无显著差异，但都极显著高于叶、种子和茎；叶对H2O2的清除作用与花无显著差异，但都极显著高于根、种子和茎。关键词：关键词：大野荞；OH；O2-；H2O2；活性氧Scavenging of Reactive Oxygen Species by the Extraction of F. megaspartaniumAbstract: This experiment used the method of nitro blue terra-zolium photochemical reduction, the system of fenton can produce theOH, which can function with Saffron red T ,and then this system reduces the absorbance, H2O2 and ammonium molybdate can become the yellow soil thing and so on, to study the scavenging of the hydroxyl radical (OH) , superoxide anion radicals (O2 - ) and hydrogen peroxide ( H2O2 ) were estimated by aqueous extractions from various organs (flower, leaf, stem, root, seed)of F. megaspartanium. The results showed that: the cleaning effect of the flower on OH was more significant than the seed, the flower was not significant in difference between the leaf and stem; The root was not significant in difference in the scavenging effect of O2 - compared with the flower, but which was more significant than the leaf, seed and stem; The leaf was not significant in difference in the scavenging effect of H2O2 compared with the flower, but which was more significant than the root, seed and stem.Keywords: F. megaspartanium; OH; O2-; H2O2; Reactive oxygen species目目 录录引言引言 .11. 材料和方法材料和方法.21.1 供试材料 .21.2 仪器与试剂.21.3 方法.22. 数据处理数据处理.53. 结果与分析结果与分析.53.1 大野荞各器官水提液对OH 的清除作用 .53.2 大野荞各器官水提液对O2-的清除作用 .63.3 大野荞各器官水提液对 H2O2的清除作用 .64. 讨论讨论.7参考文献参考文献 .9致致 谢谢 .11引言引言荞麦属于蓼科(Polygonaceae)荞麦属(Fagopyrum)，全世界已见报道并正式命名的有 23 个种、3 个变种、2 个亚种和 1 个人工合成种，分为大粒和小粒两个组，以大粒组的荞麦较为重要1。荞麦在世界上分布较广，中国、俄罗斯、日本、韩国、尼泊尔、不丹、印度、波兰、匈牙利、斯洛文尼亚等是其主产国和主要利用国。我国是世界荞麦主要产地之一，我国的西南地区，分布有大量的野生荞麦种类2,3。荞麦富含蛋白质、淀粉、粗纤维、维生素、矿物元素等，并含有一些其他粮食作物不含或少含的营养物质，蛋白质的氨基酸组成十分平衡，与人类的营养非常吻合，能有效预防糖尿病、心血管硬化、高血压，具有健胃消食、增强免疫力，促进小孩生长及智力发育等功效。此外，荞麦还具有预防癌症的功效4-7。活性氧是指生物体内有氧代谢过程中产生的或者在外界物理化学因素诱导下产生的含有氧原子并且氧化能力很强的数种物质的总称。主要有超氧阴离子自由基(O2)，羟基自由基(0H)、过氧化氢(H202)等8。正常情况下，活性氧的产生和清除是平衡的，但受到生物和非生物胁迫时自由基会产生过多或清除过慢，便会通过攻击生命大分子物质及各种细胞，造成机体的各种损伤，加速机体衰老进程并诱发各种疾病 9。需氧生物有一套抗氧化系统 ，主要包括抗氧化酶类 、修复酶类及一些生物分子。人体本身有一套清除自由基的系统，以酶系统包括超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD) 和抗坏血酸过氧化物酶(ASP)等对活性氧的清除较为重要。约 90% 的02一是由 SOD 清除的，POD、 CAT、 ASP 则负责 H2O2的清除10。但是，这个系统的力量会随人的年龄增加而减弱，老年时达到最低点，残留的活性氧就会在体内与脂肪、蛋白质或者核酸等结合，形成氧化或过氧化物以增加人体发生各种疾病的危险性11。目前，有关植物清除活性氧的研究有一些报道，龚宁等12研究了金线兰提取液对活性氧的清除作用，发现金线兰全草水提液对02一和0H 具有较强的清除作用，而对 H2O2则无明显清除作用，并认为其研究结果对认识金线兰的药用和保健作用机理具有一定价值。龚宁等 13对金线兰各器官水提液清除OH 和02一的比较作了研究，发现金线兰各器官水提液均能清除OH 和02一。郭文莉等14分别采用 DPPH法和亚油酸对葡萄皮色素进行抗氧化作用研究，指出葡萄皮色素具有一定的抗氧化作用，且其抗氧化能力与多酚含量呈相关性。张泽生等15用荧光化学发光法测定了花色苷对活性氧自由基的清除作用，发现其对O2、OH、H2O2均具有清除作用，尤其对OH 的清除作用强于抗坏血酸，且清除作用与浓度呈量效关系。李丹等16报道了葡萄汁抗氧化作用的研究，通过 DPPH法、邻笨三酚自氧化法、Fenton 反应、烷基自由基引发的亚油酸氧化体系法分别测定不同浓度葡萄溶液的总抗氧化能力和清除O2、OH、烷基自由基的能力。结果表明葡萄溶液对 DPPH的清除作用随其试验浓度增加而逐渐增大，葡萄具有很好的抗氧化作用。朱振勤等17对葡萄籽原花青素提取物抗氧化作用进行了研究，结果显示葡萄籽原花青素提取物能有效地清除O2、OH、H2O2，保护DNA 免受OH 引起的氧化损伤，是良好的抗氧化剂。项光亚等18用化学发光法、分光光度法研究了金丝桃提取物对O2、H2O2的清除作用，指出金丝桃提取物能有效地清除O2、H2O2和OH，对 H2O2引起的红细胞损伤有一定的保护作用。许钢等19用氮蓝四唑 (NBT) 光化还原法，对从竹叶中提取的黄酮类化合物清除O2和OH 的效果进行了测定，并指出竹叶提取物对自由基有较强的清除作用。高云涛等20利用 Fenton 反应、光照核黄素产生活性氧自由基OH、O2，分光光度法研究了重楼总皂苷提取物体外清除OH、O2的作用，结果表明重楼总皂苷提取物能有效清除OH、O2自由基。而有关大野荞清除活性氧的研究，目前还未见报道。鉴于此，本研究对大野荞不同器官清除活性氧作用进行研究，探讨其不同器官对活性氧的清除作用，以期为荞麦食品、荞麦保健品、荞麦化妆品的开发及利用提供理论依据。1. 材料与方法材料与方法1.1 供试材料供试材料大野荞于 2012 年 7 月采自毕节市七星关区鸭池镇。1.2 仪器与试剂723 N 可见分光光度计：上海精科产品；电子天平：奥豪斯仪器（上海）有限公司产品；双功能水浴恒温振荡器：江苏金坛亿通电子有限公司产品。NBT 为 amresco 公司产品；L-MET、核黄素为国产生化试剂，番红花红 T 为国产生物染色素，EDTANa2-Fe()，PBS，EDTA，钼酸铵等。1.3 方法1.3.1 样品制备取大野荞植株的根、茎、叶、花和种子，蒸馏水洗净，40 下恒温烘干至恒重，将其打粉，分别加干重 15 倍蒸馏水，80 下恒温振荡（140 r/min）1 h，过滤收集滤液，残渣再加 5 倍蒸馏水，80 恒温振荡（140 r/min）1 h，过滤收集滤液，合并两次滤液即为大野荞各器官水提取液（浓度分别为 84 mg/mL、55 mg/mL、58 mg/mL、64 mg/mL 和 46 mg/mL） ，将其储存冰箱备用，用时根据预实验结果配成不同浓度供试液。1.3.2