动物遗传育种与繁殖专业优秀论文动物遗传育种与繁殖专业优秀论文 小鼠卵细胞质对供体核小鼠卵细胞质对供体核 DNADNA 甲甲基化和基化和“印记印记”基因表达的调控基因表达的调控关键词：卵细胞质关键词：卵细胞质 DNADNA 甲基化甲基化 基因组印记基因组印记 基因表达基因表达 核重序核重序 U2afbp-rsU2afbp-rs摘要：为了区分核移植重组胚中所表达的 U2afbp-rs 基因是来源于父源还是母 源的，本文作者利用单核苷酸单链构象多态性(SSCP)方法检测 KM、B6、Balb/c、129S1、C3H、DBA 和 A/J 品系中小鼠 U2afbp-rs 基因的多态 性，以检测出这些品系小鼠间可能存在的多态位点；利用细胞核移植技术将 NIH3T3 细胞核和孤雌桑椹胚单个卵裂球分别移植到去核 M期受体卵母细胞中， 通过免疫荧光染色后比较体外受精胚、孤雌胚、NIH3T3 核移植重组胚和孤雌桑 椹胚核移植重组胚附殖前各时期胚胎 DNA 甲基化水平的变化，以探明克隆胚细 胞核去分化与 DNA 甲基化的相互关系；利用 Real-time PCR 技术检测体外受精 胚、孤雌胚和孤雌桑椹胚核移植重组胚附殖前各时期胚胎中印记基因 U2afbp- rs 基因以及非印记基因 eIF-4C 基因表达量的变化，以探明小鼠卵细胞质对克 隆胚细胞核中印记基因表达的调控。结果表明： 1尽管国外有文献报道了 U2afbp-rs 基因在 C57BL/6J 和 PWK 品系间存在着丰富的多态位点，但这些位点 在本研究所检测的小鼠品系中并不存在多态性，提示 U2afbp-rs 基因可能在 KM、B6、Balb/c、129S1、C3H、DBA 和 A/J 品系小鼠中并不存在多态位点。 2体外受精胚中印记基因 U2afbp-rs 和非印记基因 eIF-4C 都正常表达，它们 在小鼠 ZGA 时期都发生瞬时高表达。但在孤雌胚中，U2afbp-rs 和 eIF-4C 基因 都出现异常的表达模式，这可能是 DNA 甲基化与染色质结构改变的相互影响所 导致的，染色质的重构在印记基因以及非印记基因的表达中都起着重要的调控 作用。 3孤雌桑椹胚核移植重组胚中 U2afbp-rs 基因和 eIF-4C 基因的表达 水平要显著低于对照孤雌胚，但其表达量变化规律与对照孤雌胚相同，说明了 卵细胞质对供体核印记基因的表达具有一定的调控作用。 4NIH3T3 体细胞 核移植重组胚和孤雌桑椹胚核移植重组胚中供体核基因组 DNA 在核移植后无显 著变化，说明了克隆胚基因组 DNA 的主动去甲基化不完全。正文内容正文内容为了区分核移植重组胚中所表达的 U2afbp-rs 基因是来源于父源还是母源 的，本文作者利用单核苷酸单链构象多态性(SSCP)方法检测 KM、B6、Balb/c、129S1、C3H、DBA 和 A/J 品系中小鼠 U2afbp-rs 基因的多态 性，以检测出这些品系小鼠间可能存在的多态位点；利用细胞核移植技术将 NIH3T3 细胞核和孤雌桑椹胚单个卵裂球分别移植到去核 M期受体卵母细胞中， 通过免疫荧光染色后比较体外受精胚、孤雌胚、NIH3T3 核移植重组胚和孤雌桑 椹胚核移植重组胚附殖前各时期胚胎 DNA 甲基化水平的变化，以探明克隆胚细 胞核去分化与 DNA 甲基化的相互关系；利用 Real-time PCR 技术检测体外受精 胚、孤雌胚和孤雌桑椹胚核移植重组胚附殖前各时期胚胎中印记基因 U2afbp- rs 基因以及非印记基因 eIF-4C 基因表达量的变化，以探明小鼠卵细胞质对克 隆胚细胞核中印记基因表达的调控。结果表明： 1尽管国外有文献报道了 U2afbp-rs 基因在 C57BL/6J 和 PWK 品系间存在着丰富的多态位点，但这些位点 在本研究所检测的小鼠品系中并不存在多态性，提示 U2afbp-rs 基因可能在 KM、B6、Balb/c、129S1、C3H、DBA 和 A/J 品系小鼠中并不存在多态位点。 2体外受精胚中印记基因 U2afbp-rs 和非印记基因 eIF-4C 都正常表达，它们 在小鼠 ZGA 时期都发生瞬时高表达。但在孤雌胚中，U2afbp-rs 和 eIF-4C 基因 都出现异常的表达模式，这可能是 DNA 甲基化与染色质结构改变的相互影响所 导致的，染色质的重构在印记基因以及非印记基因的表达中都起着重要的调控 作用。 3孤雌桑椹胚核移植重组胚中 U2afbp-rs 基因和 eIF-4C 基因的表达 水平要显著低于对照孤雌胚，但其表达量变化规律与对照孤雌胚相同，说明了 卵细胞质对供体核印记基因的表达具有一定的调控作用。 4NIH3T3 体细胞 核移植重组胚和孤雌桑椹胚核移植重组胚中供体核基因组 DNA 在核移植后无显 著变化，说明了克隆胚基因组 DNA 的主动去甲基化不完全。 为了区分核移植重组胚中所表达的 U2afbp-rs 基因是来源于父源还是母源的， 本文作者利用单核苷酸单链构象多态性(SSCP)方法检测 KM、B6、Balb/c、129S1、C3H、DBA 和 A/J 品系中小鼠 U2afbp-rs 基因的多态 性，以检测出这些品系小鼠间可能存在的多态位点；利用细胞核移植技术将 NIH3T3 细胞核和孤雌桑椹胚单个卵裂球分别移植到去核 M期受体卵母细胞中， 通过免疫荧光染色后比较体外受精胚、孤雌胚、NIH3T3 核移植重组胚和孤雌桑 椹胚核移植重组胚附殖前各时期胚胎 DNA 甲基化水平的变化，以探明克隆胚细 胞核去分化与 DNA 甲基化的相互关系；利用 Real-time PCR 技术检测体外受精 胚、孤雌胚和孤雌桑椹胚核移植重组胚附殖前各时期胚胎中印记基因 U2afbp- rs 基因以及非印记基因 eIF-4C 基因表达量的变化，以探明小鼠卵细胞质对克 隆胚细胞核中印记基因表达的调控。结果表明： 1尽管国外有文献报道了 U2afbp-rs 基因在 C57BL/6J 和 PWK 品系间存在着丰富的多态位点，但这些位点 在本研究所检测的小鼠品系中并不存在多态性，提示 U2afbp-rs 基因可能在 KM、B6、Balb/c、129S1、C3H、DBA 和 A/J 品系小鼠中并不存在多态位点。 2体外受精胚中印记基因 U2afbp-rs 和非印记基因 eIF-4C 都正常表达，它们 在小鼠 ZGA 时期都发生瞬时高表达。但在孤雌胚中，U2afbp-rs 和 eIF-4C 基因 都出现异常的表达模式，这可能是 DNA 甲基化与染色质结构改变的相互影响所 导致的，染色质的重构在印记基因以及非印记基因的表达中都起着重要的调控 作用。 3孤雌桑椹胚核移植重组胚中 U2afbp-rs 基因和 eIF-4C 基因的表达水平要显著低于对照孤雌胚，但其表达量变化规律与对照孤雌胚相同，说明了 卵细胞质对供体核印记基因的表达具有一定的调控作用。 4NIH3T3 体细胞 核移植重组胚和孤雌桑椹胚核移植重组胚中供体核基因组 DNA 在核移植后无显 著变化，说明了克隆胚基因组 DNA 的主动去甲基化不完全。 为了区分核移植重组胚中所表达的 U2afbp-rs 基因是来源于父源还是母源的， 本文作者利用单核苷酸单链构象多态性(SSCP)方法检测 KM、B6、Balb/c、129S1、C3H、DBA 和 A/J 品系中小鼠 U2afbp-rs 基因的多态 性，以检测出这些品系小鼠间可能存在的多态位点；利用细胞核移植技术将 NIH3T3 细胞核和孤雌桑椹胚单个卵裂球分别移植到去核 M期受体卵母细胞中， 通过免疫荧光染色后比较体外受精胚、孤雌胚、NIH3T3 核移植重组胚和孤雌桑 椹胚核移植重组胚附殖前各时期胚胎 DNA 甲基化水平的变化，以探明克隆胚细 胞核去分化与 DNA 甲基化的相互关系；利用 Real-time PCR 技术检测体外受精 胚、孤雌胚和孤雌桑椹胚核移植重组胚附殖前各时期胚胎中印记基因 U2afbp- rs 基因以及非印记基因 eIF-4C 基因表达量的变化，以探明小鼠卵细胞质对克 隆胚细胞核中印记基因表达的调控。结果表明： 1尽管国外有文献报道了 U2afbp-rs 基因在 C57BL/6J 和 PWK 品系间存在着丰富的多态位点，但这些位点 在本研究所检测的小鼠品系中并不存在多态性，提示 U2afbp-rs 基因可能在 KM、B6、Balb/c、129S1、C3H、DBA 和 A/J 品系小鼠中并不存在多态位点。 2体外受精胚中印记基因 U2afbp-rs 和非印记基因 eIF-4C 都正常表达，它们 在小鼠 ZGA 时期都发生瞬时高表达。但在孤雌胚中，U2afbp-rs 和 eIF-4C 基因 都出现异常的表达模式，这可能是 DNA 甲基化与染色质结构改变的相互影响所 导致的，染色质的重构在印记基因以及非印记基因的表达中都起着重要的调控 作用。 3孤雌桑椹胚核移植重组胚中 U2afbp-rs 基因和 eIF-4C 基因的表达 水平要显著低于对照孤雌胚，但其表达量变化规律与对照孤雌胚相同，说明了 卵细胞质对供体核印记基因的表达具有一定的调控作用。 4NIH3T3 体细胞 核移植重组胚和孤雌桑椹胚核移植重组胚中供体核基因组 DNA 在核移植后无显 著变化，说明了克隆胚基因组 DNA 的主动去甲基化不完全。 为了区分核移植重组胚中所表达的 U2afbp-rs 基因是来源于父源还是母源的， 本文作者利用单核苷酸单链构象多态性(SSCP)方法检测 KM、B6、Balb/c、129S1、C3H、DBA 和 A/J 品系中小鼠 U2afbp-rs 基因的多态 性，以检测出这些品系小鼠间可能存在的多态位点；利用细胞核移植技术将 NIH3T3 细胞核和孤雌桑椹胚单个卵裂球分别移植到去核 M期受体卵母细胞中， 通过免疫荧光染色后比较体外受精胚、孤雌胚、NIH3T3 核移植重组胚和孤雌桑 椹胚核移植重组胚附殖前各时期胚胎 DNA 甲基化水平的变化，以探明克隆胚细 胞核去分化与 DNA 甲基化的相互关系；利用 Real-time PCR 技术检测体外受精 胚、孤雌胚和孤雌桑椹胚核移植重组胚附殖前各时期胚胎中印记基因 U2afbp- rs 基因以及非印记基因 eIF-4C 基因表达量的变化，以探明小鼠卵细胞质对克 隆胚细胞核中印记基因表达的调控。结果表明： 1尽管国外有文献报道了 U2afbp-rs 基因在 C57BL/6J 和 PWK 品系间存在着丰富的多态位点，但这些位点 在本研究所检测的小鼠品系中并不存在多态性，提示 U2afbp-rs 基因可能在 KM、B6、Balb/c、129S1、C3H、DBA 和 A/J 品系小鼠中并不存在多态位点。 2体外受精胚中印记基因 U2afbp-rs 和非印记基因 eIF-4C 都正常表达，它们 在小鼠 ZGA 时期都发生瞬时高表达。但在孤雌胚中，U2afbp-rs 和 eIF-4C 基因 都出现异常的表达模式，这可能是 DNA 甲基化与染色质结构改变的相互影响所导致的，染色质的重构在印记基因以及非印记基因的表达中都起着重要的调控 作用。 3孤雌桑椹胚核移植重组胚中 U2afbp-rs 基因和 eIF-4C 基因的表达 水平要显著低于对照孤雌胚，但其表达量变化规律与对照孤雌胚相同，说明了 卵细胞质对供体核印记基因的表达具有一定的调控作用。 4NIH3T3 体细胞 核移植重组胚和孤雌桑椹胚核移植重组胚中供体核基因组 DNA 在核移植后无显 著变化，说明了克隆胚基因组 DNA 的主动去甲基化不完全。 为了区分核移植重组胚中所表达的 U2afbp-rs 基因是来源于父源还是母源的， 本文作者利用单核苷酸单链构象多态性(SSCP)方法检测 KM、B6、Balb/c、129S1、C3H、DBA 和 A/J 品系中小鼠 U2afbp-rs 基因的多态 性，以检测