动物遗传育种与繁殖专业优秀论文动物遗传育种与繁殖专业优秀论文 小鼠异性移植卵巢卵泡及卵母小鼠异性移植卵巢卵泡及卵母细胞发育研究细胞发育研究关键词：卵巢移植技术关键词：卵巢移植技术 雌性动物雌性动物 生殖细胞生殖细胞 卵泡发育卵泡发育 卵母细胞生长卵母细胞生长摘要：卵巢移植技术对雌性动物生殖细胞资源的保存和利用具有潜在应用价值。 移植卵巢不仅可以在雌性移植受体中存活发育，而且成年期卵巢也可在雄性移 植受体中存活并维持卵泡发育。为了进一步探索小鼠异性异位移植卵巢卵泡及 卵母细胞生长发育规律，本研究将 1 日龄小鼠卵巢移植到雄性受体肾囊下，把 移植受体鼠分为睾丸在位受体组、切除睾丸受体组和促性腺激素处理受体组， 并以同期雌鼠为对照，于移植后 2149 d 回收卵巢移植体，采用形态学、组织 学、体外成熟、体外受精和 RT-PCR 等方法对卵泡发育、卵母细胞生长及卵泡发 育相关基因的表达进行研究。结果如下： 在 264 只移植雄性受体中共移植 1 日龄小鼠卵巢 588 个，受体总有效率为 84.5，卵巢总回收率为 73.3；移植 21d、28d、35d、42d 和 49 d 后，移植卵巢显著生长增大(Plt;0.01)，其 生长趋势与正常雌性小鼠在位卵巢基本一致；外源性促性腺激素处理能够显著 增加移植卵巢平均直径(Plt;0.05)。 初生期移植卵巢能够在雄性在位 睾丸受体内完成原始卵泡的形成、募集和生长发育；移植后 2149 d 回收的卵 巢移植体中有各级生长卵泡发育并能达到成熟卵泡阶段，未观察到黄体；切除 受体睾丸对移植卵巢卵泡生长发育无明显影响，但在 49 d 卵巢移植体可观察到 黄体；外源性促性腺激素处理使卵泡发生排卵前变化，卵丘细胞扩展、黏液化， 形成黄体。 从在位睾丸受体回收有腔卵泡的卵母细胞主要为 GV 期，28d 卵 巢移植体可分离到 M期卵母细胞；从 21d、28d 和 35d 卵巢移植体中回收有腔 卵泡的卵母细胞数量分别为 40.529、28.421.1 和 11.17.6 个，35d 卵巢 移植体的卵母细胞数量显著低于 21d 移植体(Plt;0.05)；卵母细胞的平均 直径分别为 73.62.5、74.63.4 和 74.75.3m，35d 卵巢移植体卵母细胞 平均直径显著大于 21d 移植体(Plt;0.05)；试验期内，随着移植时间的延 长，回收卵母细胞的数量呈减少的趋势，卵母细胞的平均直径有增大的趋势。 在切除睾丸受体中，从 21d 卵巢移植体回收的卵母细胞主要为 GV 期卵母细胞， 有的发育到 M期；回收的卵母细胞数量为 32.814.8 个，平均直径为 73.63.6m，均与同期睾丸在位受体组差异不显著(Pgt;0.05)。 外 源性促性腺激素处理雄性受体 21 和 28d 卵巢移植体卵母细胞产量分别为 31.520.3 和 28.921.2 个，与同期睾丸在位受体卵母细胞产量差异不显著 (Pgt;0.05)，成熟卵母细胞产量分别为 9.07.9 和 14.613.4 个，显著 高于同期睾丸在位受体(Plt;0.01)。外源性促性腺激素不能增加卵母细胞 产量，但能增加成熟卵母细胞产量。睾丸在位受体组 21d 卵巢移植体 GV 期卵母 细胞经 IVM、IVF，2-细胞胚胎发育率为 16.0，能够发育到桑葚胚，未发育到 囊胚。外源性促性腺激素处理组 21d 卵巢移植体 GV 期卵母细胞 2-细胞胚胎发 育率为 32.8、囊胚发育率为 1.3，极显著高于睾丸在位受体组 (Plt;0.01)；M期卵母细胞 2-细胞胚胎发育率 37.6，显著高于 GV 期 卵母细胞(Plt;0.05)，囊胚发育率为 12.8，显著高于 GV 期卵母细胞 (Plt;0.01)。异性异位移植卵巢卵母细胞能在体外完成正常的受精过程， 外源性促性腺激素能够促进卵母细胞的发育能力。 移植卵巢和正常卵巢均可检测到卵泡生长、分化和闭锁相关基因 GDF-9、AMH、FSHR、LHR、ER、P450- arom、P450-scc、IGFBP 4、Bax 和 Bcl-2 mRNA 的表达。卵巢移植、受体的性 别及其性腺对目的基因 mRNA 的表达无显著影响；外源性促性腺激素促进 LHR 的 表达。表明小鼠移植卵巢卵泡生长、分化和闭锁的方式可能与正常卵巢一样， 小鼠异性异位移植卵巢卵泡具有正常生长发育和成熟的能力。正文内容正文内容卵巢移植技术对雌性动物生殖细胞资源的保存和利用具有潜在应用价值。 移植卵巢不仅可以在雌性移植受体中存活发育，而且成年期卵巢也可在雄性移 植受体中存活并维持卵泡发育。为了进一步探索小鼠异性异位移植卵巢卵泡及 卵母细胞生长发育规律，本研究将 1 日龄小鼠卵巢移植到雄性受体肾囊下，把 移植受体鼠分为睾丸在位受体组、切除睾丸受体组和促性腺激素处理受体组， 并以同期雌鼠为对照，于移植后 2149 d 回收卵巢移植体，采用形态学、组织 学、体外成熟、体外受精和 RT-PCR 等方法对卵泡发育、卵母细胞生长及卵泡发 育相关基因的表达进行研究。结果如下： 在 264 只移植雄性受体中共移植 1 日龄小鼠卵巢 588 个，受体总有效率为 84.5，卵巢总回收率为 73.3；移植 21d、28d、35d、42d 和 49 d 后，移植卵巢显著生长增大(Plt;0.01)，其 生长趋势与正常雌性小鼠在位卵巢基本一致；外源性促性腺激素处理能够显著 增加移植卵巢平均直径(Plt;0.05)。 初生期移植卵巢能够在雄性在位 睾丸受体内完成原始卵泡的形成、募集和生长发育；移植后 2149 d 回收的卵 巢移植体中有各级生长卵泡发育并能达到成熟卵泡阶段，未观察到黄体；切除 受体睾丸对移植卵巢卵泡生长发育无明显影响，但在 49 d 卵巢移植体可观察到 黄体；外源性促性腺激素处理使卵泡发生排卵前变化，卵丘细胞扩展、黏液化， 形成黄体。 从在位睾丸受体回收有腔卵泡的卵母细胞主要为 GV 期，28d 卵 巢移植体可分离到 M期卵母细胞；从 21d、28d 和 35d 卵巢移植体中回收有腔 卵泡的卵母细胞数量分别为 40.529、28.421.1 和 11.17.6 个，35d 卵巢 移植体的卵母细胞数量显著低于 21d 移植体(Plt;0.05)；卵母细胞的平均 直径分别为 73.62.5、74.63.4 和 74.75.3m，35d 卵巢移植体卵母细胞 平均直径显著大于 21d 移植体(Plt;0.05)；试验期内，随着移植时间的延 长，回收卵母细胞的数量呈减少的趋势，卵母细胞的平均直径有增大的趋势。 在切除睾丸受体中，从 21d 卵巢移植体回收的卵母细胞主要为 GV 期卵母细胞， 有的发育到 M期；回收的卵母细胞数量为 32.814.8 个，平均直径为 73.63.6m，均与同期睾丸在位受体组差异不显著(Pgt;0.05)。 外 源性促性腺激素处理雄性受体 21 和 28d 卵巢移植体卵母细胞产量分别为 31.520.3 和 28.921.2 个，与同期睾丸在位受体卵母细胞产量差异不显著 (Pgt;0.05)，成熟卵母细胞产量分别为 9.07.9 和 14.613.4 个，显著 高于同期睾丸在位受体(Plt;0.01)。外源性促性腺激素不能增加卵母细胞 产量，但能增加成熟卵母细胞产量。睾丸在位受体组 21d 卵巢移植体 GV 期卵母 细胞经 IVM、IVF，2-细胞胚胎发育率为 16.0，能够发育到桑葚胚，未发育到 囊胚。外源性促性腺激素处理组 21d 卵巢移植体 GV 期卵母细胞 2-细胞胚胎发 育率为 32.8、囊胚发育率为 1.3，极显著高于睾丸在位受体组 (Plt;0.01)；M期卵母细胞 2-细胞胚胎发育率 37.6，显著高于 GV 期 卵母细胞(Plt;0.05)，囊胚发育率为 12.8，显著高于 GV 期卵母细胞 (Plt;0.01)。异性异位移植卵巢卵母细胞能在体外完成正常的受精过程， 外源性促性腺激素能够促进卵母细胞的发育能力。 移植卵巢和正常卵巢均可 检测到卵泡生长、分化和闭锁相关基因 GDF-9、AMH、FSHR、LHR、ER、P450- arom、P450-scc、IGFBP 4、Bax 和 Bcl-2 mRNA 的表达。卵巢移植、受体的性 别及其性腺对目的基因 mRNA 的表达无显著影响；外源性促性腺激素促进 LHR 的 表达。表明小鼠移植卵巢卵泡生长、分化和闭锁的方式可能与正常卵巢一样，小鼠异性异位移植卵巢卵泡具有正常生长发育和成熟的能力。 卵巢移植技术对雌性动物生殖细胞资源的保存和利用具有潜在应用价值。移植 卵巢不仅可以在雌性移植受体中存活发育，而且成年期卵巢也可在雄性移植受 体中存活并维持卵泡发育。为了进一步探索小鼠异性异位移植卵巢卵泡及卵母 细胞生长发育规律，本研究将 1 日龄小鼠卵巢移植到雄性受体肾囊下，把移植 受体鼠分为睾丸在位受体组、切除睾丸受体组和促性腺激素处理受体组，并以 同期雌鼠为对照，于移植后 2149 d 回收卵巢移植体，采用形态学、组织学、 体外成熟、体外受精和 RT-PCR 等方法对卵泡发育、卵母细胞生长及卵泡发育相 关基因的表达进行研究。结果如下： 在 264 只移植雄性受体中共移植 1 日龄 小鼠卵巢 588 个，受体总有效率为 84.5，卵巢总回收率为 73.3；移植 21d、28d、35d、42d 和 49 d 后，移植卵巢显著生长增大(Plt;0.01)，其 生长趋势与正常雌性小鼠在位卵巢基本一致；外源性促性腺激素处理能够显著 增加移植卵巢平均直径(Plt;0.05)。 初生期移植卵巢能够在雄性在位 睾丸受体内完成原始卵泡的形成、募集和生长发育；移植后 2149 d 回收的卵 巢移植体中有各级生长卵泡发育并能达到成熟卵泡阶段，未观察到黄体；切除 受体睾丸对移植卵巢卵泡生长发育无明显影响，但在 49 d 卵巢移植体可观察到 黄体；外源性促性腺激素处理使卵泡发生排卵前变化，卵丘细胞扩展、黏液化， 形成黄体。 从在位睾丸受体回收有腔卵泡的卵母细胞主要为 GV 期，28d 卵 巢移植体可分离到 M期卵母细胞；从 21d、28d 和 35d 卵巢移植体中回收有腔 卵泡的卵母细胞数量分别为 40.529、28.421.1 和 11.17.6 个，35d 卵巢 移植体的卵母细胞数量显著低于 21d 移植体(Plt;0.05)；卵母细胞的平均 直径分别为 73.62.5、74.63.4 和 74.75.3m，35d 卵巢移植体卵母细胞 平均直径显著大于 21d 移植体(Plt;0.05)；试验期内，随着移植时间的延 长，回收卵母细胞的数量呈减少的趋势，卵母细胞的平均直径有增大的趋势。 在切除睾丸受体中，从 21d 卵巢移植体回收的卵母细胞主要为 GV 期卵母细胞， 有的发育到 M期；回收的卵母细胞数量为 32.814.8 个，平均直径为 73.63.6m，均与同期睾丸在位受体组差异不显著(Pgt;0.05)。 外 源性促性腺激素处理雄性受体 21 和 28d 卵巢移植体卵母细胞产量分别为 31.520.3 和 28.921.2 个，与同期睾丸在位受体卵母细胞产量差异不显著 (Pgt;0.05)，成熟卵母细胞产量分别为 9.07.9 和 14.613.4 个，显著 高于同期睾丸在位受体(Plt;0.01)。外源性促性腺激素不能增加卵母细胞 产量，但能增加成熟卵母细胞产量。睾丸在位受体组 21d 卵巢移植体 GV 期卵母 细胞经 IVM、IVF，2-细胞胚胎发育率为 16.0，能够发育到桑葚胚，未发育到 囊胚。外源性促性腺激素处理组 21d 卵巢移植体 GV 期卵母细胞 2-细胞胚胎发 育率为 32.8、囊胚发育率为 1.3，极显著高于睾丸在位受体组 (Plt;