动物遗传育种与繁殖专业优秀论文动物遗传育种与繁殖专业优秀论文 慢病毒转染鸡胚原始生殖细胞慢病毒转染鸡胚原始生殖细胞及性腺嵌合体鸡的制备及性腺嵌合体鸡的制备关键词：原始生殖细胞关键词：原始生殖细胞 转基因鸡转基因鸡 慢病毒转染慢病毒转染 鸡胚鸡胚 性腺嵌合体鸡性腺嵌合体鸡摘要：原始生殖细胞(Primordial germ cells，PGCs)是精子或卵子的祖先细胞， 是一种多能干细胞。由于原始生殖细胞可以直接将外源基因传给后代，故以其 作为转基因载体生产转基因鸡具有广阔的前景。体外分离培养 PGCs，并对其进 行遗传操作，再将整合有外源基因的 PGCs 重新注入鸡胚血管中，就可获得性腺 嵌合体，生产出稳定遗传的转基因后代。 本实验从孵化 5.5d 的伊萨鸡胚生 殖嵴中分离原始生殖细胞，经 Ficoll 密度梯度离心纯化 PGCs 细胞，通过 PAS(过碘酸希夫试剂)和 AKP(碱性磷酸酶)染色鉴定，其纯度可达 70。同时分 离孵化 5.5d 的鸡胚性腺基质细胞作为饲养层，在添加多种生长因子(白血病抑 制因子 mLIF、成纤维细胞生长因子 bFGF、白介素-11 IL-11、胰岛素样生长因 子 hlGF-、干细胞生长因子 hSCF)的条件下培养 PGCs 细胞，探索其体外培养 的最佳条件。 本实验构建了 pLenti6-eGFP 慢病毒表达载体，与辅助质粒共 转染 293FT 细胞生产病毒颗粒。将慢病毒浓缩后转染鸡胚 PGCs，转染率高达 24.19。通过显微注射的方法，将转染外源基因的 PGCs 供体细胞，浓缩后注 入孵化 2.5d 的受体鸡胚血液中，接受了供体 PGCs 细胞的受体鸡胚继续孵化至 第 8d。之后提取受体鸡胚基因组 DNA 进行 PCR 检测，结果显示：在检测的 42 只受体鸡胚中，有 2 只发生性腺嵌合，嵌合率为 4.8。 本研究建立了分离 PGCs、体外培养 PGCs、制备嵌合体的方法，不仅可以提供丰富的供体细胞来源， 还为转基因鸡的成功制备创造条件。正文内容正文内容原始生殖细胞(Primordial germ cells，PGCs)是精子或卵子的祖先细胞， 是一种多能干细胞。由于原始生殖细胞可以直接将外源基因传给后代，故以其 作为转基因载体生产转基因鸡具有广阔的前景。体外分离培养 PGCs，并对其进 行遗传操作，再将整合有外源基因的 PGCs 重新注入鸡胚血管中，就可获得性腺 嵌合体，生产出稳定遗传的转基因后代。 本实验从孵化 5.5d 的伊萨鸡胚生 殖嵴中分离原始生殖细胞，经 Ficoll 密度梯度离心纯化 PGCs 细胞，通过 PAS(过碘酸希夫试剂)和 AKP(碱性磷酸酶)染色鉴定，其纯度可达 70。同时分 离孵化 5.5d 的鸡胚性腺基质细胞作为饲养层，在添加多种生长因子(白血病抑 制因子 mLIF、成纤维细胞生长因子 bFGF、白介素-11 IL-11、胰岛素样生长因 子 hlGF-、干细胞生长因子 hSCF)的条件下培养 PGCs 细胞，探索其体外培养 的最佳条件。 本实验构建了 pLenti6-eGFP 慢病毒表达载体，与辅助质粒共 转染 293FT 细胞生产病毒颗粒。将慢病毒浓缩后转染鸡胚 PGCs，转染率高达 24.19。通过显微注射的方法，将转染外源基因的 PGCs 供体细胞，浓缩后注 入孵化 2.5d 的受体鸡胚血液中，接受了供体 PGCs 细胞的受体鸡胚继续孵化至 第 8d。之后提取受体鸡胚基因组 DNA 进行 PCR 检测，结果显示：在检测的 42 只受体鸡胚中，有 2 只发生性腺嵌合，嵌合率为 4.8。 本研究建立了分离 PGCs、体外培养 PGCs、制备嵌合体的方法，不仅可以提供丰富的供体细胞来源， 还为转基因鸡的成功制备创造条件。 原始生殖细胞(Primordial germ cells，PGCs)是精子或卵子的祖先细胞，是一 种多能干细胞。由于原始生殖细胞可以直接将外源基因传给后代，故以其作为 转基因载体生产转基因鸡具有广阔的前景。体外分离培养 PGCs，并对其进行遗 传操作，再将整合有外源基因的 PGCs 重新注入鸡胚血管中，就可获得性腺嵌合 体，生产出稳定遗传的转基因后代。 本实验从孵化 5.5d 的伊萨鸡胚生殖嵴 中分离原始生殖细胞，经 Ficoll 密度梯度离心纯化 PGCs 细胞，通过 PAS(过碘 酸希夫试剂)和 AKP(碱性磷酸酶)染色鉴定，其纯度可达 70。同时分离孵化 5.5d 的鸡胚性腺基质细胞作为饲养层，在添加多种生长因子(白血病抑制因子 mLIF、成纤维细胞生长因子 bFGF、白介素-11 IL-11、胰岛素样生长因子 hlGF- 、干细胞生长因子 hSCF)的条件下培养 PGCs 细胞，探索其体外培养的最佳条 件。 本实验构建了 pLenti6-eGFP 慢病毒表达载体，与辅助质粒共转染 293FT 细胞生产病毒颗粒。将慢病毒浓缩后转染鸡胚 PGCs，转染率高达 24.19。通过显微注射的方法，将转染外源基因的 PGCs 供体细胞，浓缩后注 入孵化 2.5d 的受体鸡胚血液中，接受了供体 PGCs 细胞的受体鸡胚继续孵化至 第 8d。之后提取受体鸡胚基因组 DNA 进行 PCR 检测，结果显示：在检测的 42 只受体鸡胚中，有 2 只发生性腺嵌合，嵌合率为 4.8。 本研究建立了分离 PGCs、体外培养 PGCs、制备嵌合体的方法，不仅可以提供丰富的供体细胞来源， 还为转基因鸡的成功制备创造条件。 原始生殖细胞(Primordial germ cells，PGCs)是精子或卵子的祖先细胞，是一 种多能干细胞。由于原始生殖细胞可以直接将外源基因传给后代，故以其作为 转基因载体生产转基因鸡具有广阔的前景。体外分离培养 PGCs，并对其进行遗 传操作，再将整合有外源基因的 PGCs 重新注入鸡胚血管中，就可获得性腺嵌合 体，生产出稳定遗传的转基因后代。 本实验从孵化 5.5d 的伊萨鸡胚生殖嵴 中分离原始生殖细胞，经 Ficoll 密度梯度离心纯化 PGCs 细胞，通过 PAS(过碘酸希夫试剂)和 AKP(碱性磷酸酶)染色鉴定，其纯度可达 70。同时分离孵化 5.5d 的鸡胚性腺基质细胞作为饲养层，在添加多种生长因子(白血病抑制因子 mLIF、成纤维细胞生长因子 bFGF、白介素-11 IL-11、胰岛素样生长因子 hlGF- 、干细胞生长因子 hSCF)的条件下培养 PGCs 细胞，探索其体外培养的最佳条 件。 本实验构建了 pLenti6-eGFP 慢病毒表达载体，与辅助质粒共转染 293FT 细胞生产病毒颗粒。将慢病毒浓缩后转染鸡胚 PGCs，转染率高达 24.19。通过显微注射的方法，将转染外源基因的 PGCs 供体细胞，浓缩后注 入孵化 2.5d 的受体鸡胚血液中，接受了供体 PGCs 细胞的受体鸡胚继续孵化至 第 8d。之后提取受体鸡胚基因组 DNA 进行 PCR 检测，结果显示：在检测的 42 只受体鸡胚中，有 2 只发生性腺嵌合，嵌合率为 4.8。 本研究建立了分离 PGCs、体外培养 PGCs、制备嵌合体的方法，不仅可以提供丰富的供体细胞来源， 还为转基因鸡的成功制备创造条件。 原始生殖细胞(Primordial germ cells，PGCs)是精子或卵子的祖先细胞，是一 种多能干细胞。由于原始生殖细胞可以直接将外源基因传给后代，故以其作为 转基因载体生产转基因鸡具有广阔的前景。体外分离培养 PGCs，并对其进行遗 传操作，再将整合有外源基因的 PGCs 重新注入鸡胚血管中，就可获得性腺嵌合 体，生产出稳定遗传的转基因后代。 本实验从孵化 5.5d 的伊萨鸡胚生殖嵴 中分离原始生殖细胞，经 Ficoll 密度梯度离心纯化 PGCs 细胞，通过 PAS(过碘 酸希夫试剂)和 AKP(碱性磷酸酶)染色鉴定，其纯度可达 70。同时分离孵化 5.5d 的鸡胚性腺基质细胞作为饲养层，在添加多种生长因子(白血病抑制因子 mLIF、成纤维细胞生长因子 bFGF、白介素-11 IL-11、胰岛素样生长因子 hlGF- 、干细胞生长因子 hSCF)的条件下培养 PGCs 细胞，探索其体外培养的最佳条 件。 本实验构建了 pLenti6-eGFP 慢病毒表达载体，与辅助质粒共转染 293FT 细胞生产病毒颗粒。将慢病毒浓缩后转染鸡胚 PGCs，转染率高达 24.19。通过显微注射的方法，将转染外源基因的 PGCs 供体细胞，浓缩后注 入孵化 2.5d 的受体鸡胚血液中，接受了供体 PGCs 细胞的受体鸡胚继续孵化至 第 8d。之后提取受体鸡胚基因组 DNA 进行 PCR 检测，结果显示：在检测的 42 只受体鸡胚中，有 2 只发生性腺嵌合，嵌合率为 4.8。 本研究建立了分离 PGCs、体外培养 PGCs、制备嵌合体的方法，不仅可以提供丰富的供体细胞来源， 还为转基因鸡的成功制备创造条件。 原始生殖细胞(Primordial germ cells，PGCs)是精子或卵子的祖先细胞，是一 种多能干细胞。由于原始生殖细胞可以直接将外源基因传给后代，故以其作为 转基因载体生产转基因鸡具有广阔的前景。体外分离培养 PGCs，并对其进行遗 传操作，再将整合有外源基因的 PGCs 重新注入鸡胚血管中，就可获得性腺嵌合 体，生产出稳定遗传的转基因后代。 本实验从孵化 5.5d 的伊萨鸡胚生殖嵴 中分离原始生殖细胞，经 Ficoll 密度梯度离心纯化 PGCs 细胞，通过 PAS(过碘 酸希夫试剂)和 AKP(碱性磷酸酶)染色鉴定，其纯度可达 70。同时分离孵化 5.5d 的鸡胚性腺基质细胞作为饲养层，在添加多种生长因子(白血病抑制因子 mLIF、成纤维细胞生长因子 bFGF、白介素-11 IL-11、胰岛素样生长因子 hlGF- 、干细胞生长因子 hSCF)的条件下培养 PGCs 细胞，探索其体外培养的最佳条 件。 本实验构建了 pLenti6-eGFP 慢病毒表达载体，与辅助质粒共转染 293FT 细胞生产病毒颗粒。将慢病毒浓缩后转染鸡胚 PGCs，转染率高达 24.19。通过显微注射的方法，将转染外源基因的 PGCs 供体细胞，浓缩后注 入孵化 2.5d 的受体鸡胚血液中，接受了供体 PGCs 细胞的受体鸡胚继续孵化至第 8d。之后提取受体鸡胚基因组 DNA 进行 PCR 检测，结果显示：在检测的 42 只受体鸡胚中，有 2 只发生性腺嵌合，嵌合率为 4.8。 本研究建立了分离 PGCs、体外培养 PGCs、制备嵌合体的方法，不仅可以提供丰富的供体细胞来源， 还为转基因鸡的成功制备创造条件。 原始生殖细胞(Primordial germ cells，PGCs)是精子或卵子的祖先细胞，是一 种多能干细胞。由于原始生殖细胞可以直接将外源基因传给后代，故以其作为 转基因载体生产转基因鸡具有广阔的前景。体外分离培养 PGCs，并对其进行遗 传操作，再将整合有外源基因的 PGCs 重新注入鸡胚血管中，就可获得性腺嵌合 体，生产出稳定遗传的转基因后代。 本实验从孵化 5.5d 的伊萨鸡胚生殖嵴 中分离原始生殖细胞，经 Ficoll 密度梯度离心纯化 PGCs 细胞，通过 PAS(过碘 酸希夫试剂)和 AKP(碱性磷酸酶)染色鉴定，其纯度可达 70。同时分离孵化 5.5d 的鸡胚性腺基质细胞作为饲养层，在添加多种生长因子(白血病抑制因子 mLIF、成纤维细胞生长因子 bFGF、白介素-11 IL-11、胰岛素样生长因子 hlGF- 、干细胞生长因子 hSCF)的条件下培养 PGCs 细胞，探索其体外培养的最佳条 件。 本实验构建了 pLenti6-eGFP 慢病毒表达载体，与辅助质粒共转染 293FT 细胞生产病毒颗粒。将慢病毒浓缩后转染鸡胚 PGCs，转染率高达 24.19。通过显微注射的方法，将转染外源基因的