放射医学专业优秀论文放射医学专业优秀论文 氡染毒动物差异表达基因的高通量筛选氡染毒动物差异表达基因的高通量筛选关键词：氡暴露关键词：氡暴露 动物模型动物模型 抑制消减杂交抑制消减杂交 差异表达基因差异表达基因 生物信息学生物信息学摘要：目的：在建立氡染毒动物模型的基础上，筛选和鉴定氡染毒动物外周血 细胞、骨髓细胞和气管支气管上皮细胞差异表达基因，为探讨氡致肺癌的分 子机制提供基础资料。 方法：实验用 HD3 型多功能移动式氡室，对 BALB/c 小鼠和 Wistar 大鼠动态吸入染毒，建立动物模型。按照实验动物吸入 氡及其子体的累积剂量分为实验组（100WLM）和对照组（室内本底浓度， 08WLM） ，每组 4 只动物。染毒时间每天 8 小时，每周 6 天。通过观察小鼠外 周血、骨髓细胞和大鼠外周血的早期生物学指标以及气管支气管的病理学改 变，建立动物模型。取小鼠外周血细胞、骨髓细胞和大鼠气管支气管上皮细 胞，抽提总 RNA，采用 SMART cDNA 和抑制性消减杂交（Suppression Subtractive Hybridization，SSH）技术，构建差异表达基因 cDNA 文库，TA 克隆，选取含有插入 cDNA 片断的克隆进行反向 Northern 杂交筛选上调或下调 的阳性克隆。阳性克隆的测序结果在 GenBank Blast 中进行同源性检索，同源 性高的序列进行功能分析和生物信息学分析，同源性低的序列提交 GenBank。 用荧光实时定量 PCR 对最终得到的部分差异片断进行验证。 结果：动物氡染 毒 100WLM 后，小鼠外周血和骨髓细胞出现计数改变、脂质过氧化损伤和遗传学 改变；大鼠外周血 SOD 活性降低和 MDA 含量升高，组织学检查出现明显的支气 管炎性浸润。运用 SMART cDNA 和抑制性消减杂交成功构建了消减 cDNA 文库。 挑取白斑 1004 个，获得 837 个含有插入片断的单克隆，进行反向 Northern 杂 交，分析基因的上调或下调水平。选取差异表达克隆 126 个进行测序及生物信 息学分析，最终获得 44 条已知功能或有注释差异基因片断，39 条未知功能的 已知差异基因片断，24 条重复差异基因，19 条未知 EST，其中未知 EST 提交至 GenBank，获得注册号。44 条已知功能或有注释的差异基因的结果提示，筛选 出的差别表达基因涉及氧化损伤、细胞增殖、凋亡、DNA 损伤和肿瘤发生等多 方面的功能。 结论： 1建立了氡染毒的实验动物模型；构建了外周血细 胞、骨髓细胞和气管支气管上皮细胞的消减 cDNA 文库。 2共筛选出 44 条已知差异基因片断，功能涉及氧化损伤、细胞增殖和凋亡、DNA 损伤和肿瘤 发生；得到 19 条未知 EST，提交至 GenBank 获得注册号。 3氡染毒可引起 一系列基因表达的上调或下调，参与病理损伤和致癌过程，具体机理有待进一 步研究。正文内容正文内容目的：在建立氡染毒动物模型的基础上，筛选和鉴定氡染毒动物外周血细 胞、骨髓细胞和气管支气管上皮细胞差异表达基因，为探讨氡致肺癌的分子 机制提供基础资料。 方法：实验用 HD3 型多功能移动式氡室，对 BALB/c 小鼠和 Wistar 大鼠动态吸入染毒，建立动物模型。按照实验动物吸入氡及其子 体的累积剂量分为实验组（100WLM）和对照组（室内本底浓度，08WLM） ，每 组 4 只动物。染毒时间每天 8 小时，每周 6 天。通过观察小鼠外周血、骨髓细 胞和大鼠外周血的早期生物学指标以及气管支气管的病理学改变，建立动物 模型。取小鼠外周血细胞、骨髓细胞和大鼠气管支气管上皮细胞，抽提总 RNA，采用 SMART cDNA 和抑制性消减杂交（Suppression Subtractive Hybridization，SSH）技术，构建差异表达基因 cDNA 文库，TA 克隆，选取含 有插入 cDNA 片断的克隆进行反向 Northern 杂交筛选上调或下调的阳性克隆。 阳性克隆的测序结果在 GenBank Blast 中进行同源性检索，同源性高的序列进 行功能分析和生物信息学分析，同源性低的序列提交 GenBank。用荧光实时定 量 PCR 对最终得到的部分差异片断进行验证。 结果：动物氡染毒 100WLM 后， 小鼠外周血和骨髓细胞出现计数改变、脂质过氧化损伤和遗传学改变；大鼠外 周血 SOD 活性降低和 MDA 含量升高，组织学检查出现明显的支气管炎性浸润。 运用 SMART cDNA 和抑制性消减杂交成功构建了消减 cDNA 文库。挑取白斑 1004 个，获得 837 个含有插入片断的单克隆，进行反向 Northern 杂交，分析基因的 上调或下调水平。选取差异表达克隆 126 个进行测序及生物信息学分析，最终 获得 44 条已知功能或有注释差异基因片断，39 条未知功能的已知差异基因片 断，24 条重复差异基因，19 条未知 EST，其中未知 EST 提交至 GenBank，获得 注册号。44 条已知功能或有注释的差异基因的结果提示，筛选出的差别表达基 因涉及氧化损伤、细胞增殖、凋亡、DNA 损伤和肿瘤发生等多方面的功能。 结论： 1建立了氡染毒的实验动物模型；构建了外周血细胞、骨髓细胞和 气管支气管上皮细胞的消减 cDNA 文库。 2共筛选出 44 条已知差异基因 片断，功能涉及氧化损伤、细胞增殖和凋亡、DNA 损伤和肿瘤发生；得到 19 条 未知 EST，提交至 GenBank 获得注册号。 3氡染毒可引起一系列基因表达 的上调或下调，参与病理损伤和致癌过程，具体机理有待进一步研究。 目的：在建立氡染毒动物模型的基础上，筛选和鉴定氡染毒动物外周血细胞、 骨髓细胞和气管支气管上皮细胞差异表达基因，为探讨氡致肺癌的分子机制 提供基础资料。 方法：实验用 HD3 型多功能移动式氡室，对 BALB/c 小鼠 和 Wistar 大鼠动态吸入染毒，建立动物模型。按照实验动物吸入氡及其子体的 累积剂量分为实验组（100WLM）和对照组（室内本底浓度，08WLM） ，每组 4 只动物。染毒时间每天 8 小时，每周 6 天。通过观察小鼠外周血、骨髓细胞和 大鼠外周血的早期生物学指标以及气管支气管的病理学改变，建立动物模型。 取小鼠外周血细胞、骨髓细胞和大鼠气管支气管上皮细胞，抽提总 RNA，采 用 SMART cDNA 和抑制性消减杂交（Suppression Subtractive Hybridization，SSH）技术，构建差异表达基因 cDNA 文库，TA 克隆，选取含 有插入 cDNA 片断的克隆进行反向 Northern 杂交筛选上调或下调的阳性克隆。 阳性克隆的测序结果在 GenBank Blast 中进行同源性检索，同源性高的序列进 行功能分析和生物信息学分析，同源性低的序列提交 GenBank。用荧光实时定 量 PCR 对最终得到的部分差异片断进行验证。 结果：动物氡染毒 100WLM 后，小鼠外周血和骨髓细胞出现计数改变、脂质过氧化损伤和遗传学改变；大鼠外 周血 SOD 活性降低和 MDA 含量升高，组织学检查出现明显的支气管炎性浸润。 运用 SMART cDNA 和抑制性消减杂交成功构建了消减 cDNA 文库。挑取白斑 1004 个，获得 837 个含有插入片断的单克隆，进行反向 Northern 杂交，分析基因的 上调或下调水平。选取差异表达克隆 126 个进行测序及生物信息学分析，最终 获得 44 条已知功能或有注释差异基因片断，39 条未知功能的已知差异基因片 断，24 条重复差异基因，19 条未知 EST，其中未知 EST 提交至 GenBank，获得 注册号。44 条已知功能或有注释的差异基因的结果提示，筛选出的差别表达基 因涉及氧化损伤、细胞增殖、凋亡、DNA 损伤和肿瘤发生等多方面的功能。 结论： 1建立了氡染毒的实验动物模型；构建了外周血细胞、骨髓细胞和 气管支气管上皮细胞的消减 cDNA 文库。 2共筛选出 44 条已知差异基因 片断，功能涉及氧化损伤、细胞增殖和凋亡、DNA 损伤和肿瘤发生；得到 19 条 未知 EST，提交至 GenBank 获得注册号。 3氡染毒可引起一系列基因表达 的上调或下调，参与病理损伤和致癌过程，具体机理有待进一步研究。 目的：在建立氡染毒动物模型的基础上，筛选和鉴定氡染毒动物外周血细胞、 骨髓细胞和气管支气管上皮细胞差异表达基因，为探讨氡致肺癌的分子机制 提供基础资料。 方法：实验用 HD3 型多功能移动式氡室，对 BALB/c 小鼠 和 Wistar 大鼠动态吸入染毒，建立动物模型。按照实验动物吸入氡及其子体的 累积剂量分为实验组（100WLM）和对照组（室内本底浓度，08WLM） ，每组 4 只动物。染毒时间每天 8 小时，每周 6 天。通过观察小鼠外周血、骨髓细胞和 大鼠外周血的早期生物学指标以及气管支气管的病理学改变，建立动物模型。 取小鼠外周血细胞、骨髓细胞和大鼠气管支气管上皮细胞，抽提总 RNA，采 用 SMART cDNA 和抑制性消减杂交（Suppression Subtractive Hybridization，SSH）技术，构建差异表达基因 cDNA 文库，TA 克隆，选取含 有插入 cDNA 片断的克隆进行反向 Northern 杂交筛选上调或下调的阳性克隆。 阳性克隆的测序结果在 GenBank Blast 中进行同源性检索，同源性高的序列进 行功能分析和生物信息学分析，同源性低的序列提交 GenBank。用荧光实时定 量 PCR 对最终得到的部分差异片断进行验证。 结果：动物氡染毒 100WLM 后， 小鼠外周血和骨髓细胞出现计数改变、脂质过氧化损伤和遗传学改变；大鼠外 周血 SOD 活性降低和 MDA 含量升高，组织学检查出现明显的支气管炎性浸润。 运用 SMART cDNA 和抑制性消减杂交成功构建了消减 cDNA 文库。挑取白斑 1004 个，获得 837 个含有插入片断的单克隆，进行反向 Northern 杂交，分析基因的 上调或下调水平。选取差异表达克隆 126 个进行测序及生物信息学分析，最终 获得 44 条已知功能或有注释差异基因片断，39 条未知功能的已知差异基因片 断，24 条重复差异基因，19 条未知 EST，其中未知 EST 提交至 GenBank，获得 注册号。44 条已知功能或有注释的差异基因的结果提示，筛选出的差别表达基 因涉及氧化损伤、细胞增殖、凋亡、DNA 损伤和肿瘤发生等多方面的功能。 结论： 1建立了氡染毒的实验动物模型；构建了外周血细胞、骨髓细胞和 气管支气管上皮细胞的消减 cDNA 文库。 2共筛选出 44 条已知差异基因 片断，功能涉及氧化损伤、细胞增殖和凋亡、DNA 损伤和肿瘤发生；得到 19 条 未知 EST，提交至 GenBank 获得注册号。 3氡染毒可引起一系列基因表达 的上调或下调，参与病理损伤和致癌过程，具体机理有待进一步研究。 目的：在建立氡染毒动物模型的基础上，筛选和鉴定氡染毒动物外周血细胞、 骨髓细胞和气管支气管上皮细胞差异表达基因，为探讨氡致肺癌的分子机制提供基础资料。 方法：实验用 HD3 型多功能移动式氡室，对 BALB/c 小鼠 和 Wistar 大鼠动态吸入染毒，建立动物模型。按照实验动物吸入氡及其子体的 累积剂量分为实验组（100WLM）和对照组（室内本底浓度，08WLM） ，每组 4 只动物。染毒时间每天 8 小时，每周 6 天。通过观察小鼠外周血、骨髓细胞和 大鼠外周血的早期生物学指标以及气管支气管的病理学改变，建立动物模型。 取小鼠外周血细胞、骨髓细胞和大鼠气管支气管上皮细胞，抽提总 RNA，采 用 S