基础兽医学专业优秀论文基础兽医学专业优秀论文 猪应对运输应激的品种特征及肾上腺皮猪应对运输应激的品种特征及肾上腺皮质功能差异的分子机制质功能差异的分子机制关键词：二花脸猪关键词：二花脸猪 皮特兰猪皮特兰猪 类固醇类固醇 调节蛋白调节蛋白 肾上腺肾上腺 皮质功能皮质功能摘要：本文通过比较运输过程中二花脸猪和皮特兰猪的行为和血液生理生化指 标的动态变化，以客观评价两品种猪的应激敏感性，并在此基础上，提出血浆 皮质醇水平的品种差异与肾上腺皮质功能差异有关的假说。为验证这一假说， 本研究从体内和体外两方面，对猪肾上腺皮质细胞皮质醇合成相关信号通路进 行比较研究，在肾上腺皮质水平揭示了不同品种/基因型猪血浆皮质醇水平差异 的分子机制。 1.运输过程中二花脸猪和皮特兰猪行为、血浆酶活和激素水平 的动态变化 本实验采用实时跟踪摄像和颈静脉血管瘘连续采样，观察二花脸 猪(Hallt;#39;NNgt;)和皮特兰猪 (Hallt;#39;nngt;)在 2h 运输过程中的行为表现，并监测血浆 肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)活性以及应激和代谢相关激素水平的动态变化。 结果表明：运输前期(出发后 15 min)二花脸猪主要表现探究行为和异常行为， 中后期(出发后 60-75 min 和最后 15 min)其蹲坐和躺卧行为逐渐增加；相反， 皮特兰猪在运输前期探究行为较多，中后期主要表现为站立行为。运输过程中 皮特兰猪血浆 CK 和 LDH 活性均显著高于二花脸猪。血浆 CK 活性呈现显著的时 间效应和时间与品种的交互作用。血浆 ACTH 水平在运输过程中显著升高，但品 种问差异不显著。血浆皮质醇水平在运输开始后 15 min 即显著升高，上车前及 整个运输过程中二花脸猪皮质醇水平均显著高于皮特兰猪。代谢相关激素(胰岛 素、T3 和 T4)在运输过程中总体表现下降，呈显著的时间效应，但均未表现显 著的品种差异。以上结果提示：不同品种猪在运输过程中表现不同的行为模式 和血液生化指标的变化；二花脸猪和皮特兰猪血浆 ACTH 水平无显著差异，而皮 质醇水平品种差异显著，提示两品种猪肾上腺皮质功能存在差异。 2.猪肾上 腺皮质醇合成途径的品种差异及其分子机制 为揭示二花脸猪和皮特兰猪肾上 腺皮质功能的差异，本研究通过在 mRNA 和蛋白质水平检测两品种猪肾上腺黑皮 素受体-2(MC2R)、cAMP 反应元件结合蛋白(CREB)及其磷酸化 CREB(pCREB)、类 固醇生成急性调节蛋白(StAR)，以及皮质醇合成途径中的关键酶等相关蛋白的 表达，分析在体条件下猪肾上腺皮质信号转导和皮质醇生物合成途径在品种之 间的差异。结果显示：作为皮质醇合成原料的血浆胆固醇和低密度脂蛋白胆固 醇在品种间均无显著差异；肾上腺 MC2R mRNA 及蛋白含量、CREB 含量和 3-羟 化类固醇脱氢酶(3-HSD)mRNA 表达水平均无品种间差异；二花脸猪肾上腺 cAMP 含量有高于皮特兰猪的趋势；二花脸猪肾上腺 pCREB、StAR、P450scc 蛋 白含量和 P450lt;,17agt;、P450c21 和 P450lt;,11gt; mRNA 水平均显著高于皮特兰猪。提示二花脸猪血浆皮质醇水平高与其高丰度表 达的肾上腺皮质 cAMP/PKA/pCREB 信号蛋白及其皮质醇合成限速因子 StAR 和关 键酶有关。 3.ACTH 刺激体外培养的猪肾上腺皮质细胞合成皮质醇的信号转 导机制一氟烷基因的影响 为分析以上实验发现的肾上腺皮质功能的品种差异 在多大程度上与氟烷基因型有关，本试验采用氟烷基因型分离的皮特兰二花 脸 F2 代仔猪，分离 Hallt;#39;NNgt;和 Hallt;#39;nngt;仔猪的肾上腺皮质细胞，在体外培养条件下，检测对照组和 ACTH 处理组不同氟烷基因型肾上腺皮质细胞培养液中皮质醇水平， 细胞中 StAR、P450scc、MC2R、cAMP、CREB 和 pCREB 的含量，以分析氟烷基因 型对肾上腺皮质细胞皮质醇分泌的影响以及分子机制。结果显示： Hallt;#39;NNgt;对照组皮质醇水平、细胞中 StAR 和 P450scc 含量均显著高于 Hallt;#39;nngt;对照组，ACTH 处理后两种基 因型细胞以上三种指标均显著增加；对照组 MC2R 含量在基因型之间无显著差异， ACTH 处理后均显著增加；Hallt;#39;NNgt;对照组 cAMP 含量 显著高于 Hallt;#39;nngt;对照组，ACTH 处理后均有增加的趋 势；CREB 含量在对照组间和 ACTH 处理后均无显著差异， Hallt;#39;NNgt;对照组 pCREB 含量有高于 Hallt;#39;nngt;对照组的趋势，且 ACTH 处理后两组均有一定 程度的增加。提示不同基因型细胞分泌皮质醇水平的差异与 cAMP/PKA/pCREB 信 号通路及其诱导的 StAR、P450scc 表达差异有关。二花脸猪和皮特兰猪肾上腺 皮质功能的差异在很大程度上与氟烷基因型有关。相同氟烷基因型的猪肾上腺 皮质功能是否存在品种差异尚待进一步研究。正文内容正文内容本文通过比较运输过程中二花脸猪和皮特兰猪的行为和血液生理生化指标 的动态变化，以客观评价两品种猪的应激敏感性，并在此基础上，提出血浆皮 质醇水平的品种差异与肾上腺皮质功能差异有关的假说。为验证这一假说，本 研究从体内和体外两方面，对猪肾上腺皮质细胞皮质醇合成相关信号通路进行 比较研究，在肾上腺皮质水平揭示了不同品种/基因型猪血浆皮质醇水平差异的 分子机制。 1.运输过程中二花脸猪和皮特兰猪行为、血浆酶活和激素水平的 动态变化 本实验采用实时跟踪摄像和颈静脉血管瘘连续采样，观察二花脸猪 (Hallt;#39;NNgt;)和皮特兰猪 (Hallt;#39;nngt;)在 2h 运输过程中的行为表现，并监测血浆 肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)活性以及应激和代谢相关激素水平的动态变化。 结果表明：运输前期(出发后 15 min)二花脸猪主要表现探究行为和异常行为， 中后期(出发后 60-75 min 和最后 15 min)其蹲坐和躺卧行为逐渐增加；相反， 皮特兰猪在运输前期探究行为较多，中后期主要表现为站立行为。运输过程中 皮特兰猪血浆 CK 和 LDH 活性均显著高于二花脸猪。血浆 CK 活性呈现显著的时 间效应和时间与品种的交互作用。血浆 ACTH 水平在运输过程中显著升高，但品 种问差异不显著。血浆皮质醇水平在运输开始后 15 min 即显著升高，上车前及 整个运输过程中二花脸猪皮质醇水平均显著高于皮特兰猪。代谢相关激素(胰岛 素、T3 和 T4)在运输过程中总体表现下降，呈显著的时间效应，但均未表现显 著的品种差异。以上结果提示：不同品种猪在运输过程中表现不同的行为模式 和血液生化指标的变化；二花脸猪和皮特兰猪血浆 ACTH 水平无显著差异，而皮 质醇水平品种差异显著，提示两品种猪肾上腺皮质功能存在差异。 2.猪肾上 腺皮质醇合成途径的品种差异及其分子机制 为揭示二花脸猪和皮特兰猪肾上 腺皮质功能的差异，本研究通过在 mRNA 和蛋白质水平检测两品种猪肾上腺黑皮 素受体-2(MC2R)、cAMP 反应元件结合蛋白(CREB)及其磷酸化 CREB(pCREB)、类 固醇生成急性调节蛋白(StAR)，以及皮质醇合成途径中的关键酶等相关蛋白的 表达，分析在体条件下猪肾上腺皮质信号转导和皮质醇生物合成途径在品种之 间的差异。结果显示：作为皮质醇合成原料的血浆胆固醇和低密度脂蛋白胆固 醇在品种间均无显著差异；肾上腺 MC2R mRNA 及蛋白含量、CREB 含量和 3-羟 化类固醇脱氢酶(3-HSD)mRNA 表达水平均无品种间差异；二花脸猪肾上腺 cAMP 含量有高于皮特兰猪的趋势；二花脸猪肾上腺 pCREB、StAR、P450scc 蛋 白含量和 P450lt;,17agt;、P450c21 和 P450lt;,11gt; mRNA 水平均显著高于皮特兰猪。提示二花脸猪血浆皮质醇水平高与其高丰度表 达的肾上腺皮质 cAMP/PKA/pCREB 信号蛋白及其皮质醇合成限速因子 StAR 和关 键酶有关。 3.ACTH 刺激体外培养的猪肾上腺皮质细胞合成皮质醇的信号转 导机制一氟烷基因的影响 为分析以上实验发现的肾上腺皮质功能的品种差异 在多大程度上与氟烷基因型有关，本试验采用氟烷基因型分离的皮特兰二花 脸 F2 代仔猪，分离 Hallt;#39;NNgt;和 Hallt;#39;nngt;仔猪的肾上腺皮质细胞，在体外培养条件下， 检测对照组和 ACTH 处理组不同氟烷基因型肾上腺皮质细胞培养液中皮质醇水平， 细胞中 StAR、P450scc、MC2R、cAMP、CREB 和 pCREB 的含量，以分析氟烷基因 型对肾上腺皮质细胞皮质醇分泌的影响以及分子机制。结果显示： Hallt;#39;NNgt;对照组皮质醇水平、细胞中 StAR 和 P450scc含量均显著高于 Hallt;#39;nngt;对照组，ACTH 处理后两种基 因型细胞以上三种指标均显著增加；对照组 MC2R 含量在基因型之间无显著差异， ACTH 处理后均显著增加；Hallt;#39;NNgt;对照组 cAMP 含量 显著高于 Hallt;#39;nngt;对照组，ACTH 处理后均有增加的趋 势；CREB 含量在对照组间和 ACTH 处理后均无显著差异， Hallt;#39;NNgt;对照组 pCREB 含量有高于 Hallt;#39;nngt;对照组的趋势，且 ACTH 处理后两组均有一定 程度的增加。提示不同基因型细胞分泌皮质醇水平的差异与 cAMP/PKA/pCREB 信 号通路及其诱导的 StAR、P450scc 表达差异有关。二花脸猪和皮特兰猪肾上腺 皮质功能的差异在很大程度上与氟烷基因型有关。相同氟烷基因型的猪肾上腺 皮质功能是否存在品种差异尚待进一步研究。 本文通过比较运输过程中二花脸猪和皮特兰猪的行为和血液生理生化指标的动 态变化，以客观评价两品种猪的应激敏感性，并在此基础上，提出血浆皮质醇 水平的品种差异与肾上腺皮质功能差异有关的假说。为验证这一假说，本研究 从体内和体外两方面，对猪肾上腺皮质细胞皮质醇合成相关信号通路进行比较 研究，在肾上腺皮质水平揭示了不同品种/基因型猪血浆皮质醇水平差异的分子 机制。 1.运输过程中二花脸猪和皮特兰猪行为、血浆酶活和激素水平的动态 变化 本实验采用实时跟踪摄像和颈静脉血管瘘连续采样，观察二花脸猪 (Hallt;#39;NNgt;)和皮特兰猪 (Hallt;#39;nngt;)在 2h 运输过程中的行为表现，并监测血浆 肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)活性以及应激和代谢相关激素水平的动态变化。 结果表明：运输前期(出发后 15 min)二花脸猪主要表现探究行为和异常行为， 中后期(出发后 60-75 min 和最后 15 min)其蹲坐和躺卧行为逐渐增加；相反， 皮特兰猪在运输前期探究行为较多，中后期主要表现为站立行为。运输过程中 皮特兰猪血浆 CK 和 LDH 活性均显著高于二花脸猪。血浆 CK 活性呈现显著的时 间效应和时间与品种的交互作用。血浆 ACTH 水平在运输过程中显著升高，但品 种问差异不显著。血浆皮质醇水平在运输开始后 15 min 即显著升高，上车前及 整个运输过程中二花脸猪皮质醇水平均显著高于皮特兰猪。代谢相关激素(胰岛 素、T3 和 T4)在运输过程中总体表现下降，呈显著的时间效应，但均未表现显 著的品种差异。以上结果提示：不同品种猪在运输过程中表现不同的行为模式 和血液生化指标的变化；二花脸猪和皮特兰猪血浆 ACTH 水平无显著差异，而皮 质醇水平品种差异显著，提示两品种猪肾上腺皮质功能存在差异。 2.猪肾上 腺皮质醇合成途径的品种差异及其分