病理学与病理生理学专业毕业论文病理学与病理生理学专业毕业论文 精品论文精品论文 胆囊癌相关生物胆囊癌相关生物标志物的临床病理研究标志物的临床病理研究关键词：胆囊癌关键词：胆囊癌 生物标志物生物标志物 临床病理临床病理 免疫组织化学免疫组织化学 临床治疗临床治疗摘要：研究目的： 研究生物标志物 P27、Skp2、CyclinDl、Ep- CAM、MUC1、Ki67 及 EGTR 在胆囊癌的表达与其生物学特点，并探讨上述标志物 及各种临床病理参数与患者生存时间的关系。寻找新的与胆囊癌预后相关的分 子标记物，以期为临床提供更多的信息，指导治疗，减少复发与转移。 研究 方法： 本实验为回顾性研究：复习解放军总医院病理科 1999 年 7 月-2005 年 7 月行手术切除的胆囊癌 72 例，查阅相关病历并对全部病例进行随访，得到 临床资料齐全并成功获访的病人共 60 例。 光镜下复习 60 例胆囊癌病例病理 切片，观察癌组织病理分类、分化程度、神经侵犯、血管侵犯及有无坏死等病 理特点。 免疫组化染色：采用 PV600 二步法，检测 60 例胆囊癌及 15 例癌旁 正常组织标本的 P27、Skp2、CyclinDl、Ep-CAM、NUC1、Ki67 及 EGFR 七种生物 标志物表达状况，分析其与临床、病理及预后的关系。 EGTR 基因突变的检 测：检出 2003 年 7 月-2007 年 7 月间经免疫组化检测 EGFR 染色为阳性的胆囊 癌病例 20 例，并查阅相关临床资料。提取胆囊癌石蜡标本的 DNA，进行定量测 定，并采用聚合酶链反应技术进行扩增反应，用扩增产物来进行纯化及测序分 析，观察其 EGFR 基因第 18、19、20 及 21 外显子的突变情况 结果： 各 生物标志物的在胆囊癌表达的阳性率分别为 P27(41.7)、Skp2(56.7)、 CyclinDl(48.3)、Ep-CAM(56.7)、MUC1(51.7)、Ki67(55.0)及 EGTR(33.3)。与 Nevin 分期相关的是 P27 及 Skp2(P 均0.05)，其中 Skp2 的 表达在-期比-期高(P=0.016)，而 P27 则与之相反(P=0.037)。 CyclinDl、Skp2、MUC1 及 Ki67 随着病理组织分化程度的降低，其蛋白表达增 高，在高分化组与中低分化组之间具有统计学差异(P 均0.05)。另外， CyclinDl 及 Skp2 均与坏死呈正相关(P 均0.05)，含坏死组的阳性率均明显高 于无坏死组的阳性率(P 均0.05)。 Skp2、CyclinDl、Ep-CAM、MUC1、Ki67 及 EGFR 在胆囊癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织，而 P27 则相反(P 均 0.05)。 单因素生存分析显示，P27、Skp2、CyclinDl、Ep- CAM、Ki67、Nevin 分期、肿瘤病理分化、肿瘤坏死、血管侵犯及手术方式共 10 种因素与胆囊癌患者的术后生存时间有关：P27 阳性表达组患者的总体生存时 间长于阴性的患者(P=0.000)；Skp2、CyclinDl、Ep-CAM 及 Ki67 阳性表达组患 者的生存时间均较阴性表达组患者的生存时间短 (PSkp2=0.003，PCyclinDl=0.016，PEp-CAM=0.038，PKi67=0.027)；胆囊癌患 者的 Nevin 分期(P=0.000)、肿瘤分化程度(P=0.021)、肿瘤有无坏死(P=0.033)、 血管侵犯(p=0.044)、手术方式(P=0.000)均为影响预后的因素。最终 Cox 多因 素总体生存分析显示，P27、Skp2 及手术方式 3 种因素入选，P27 阳性表达、 Skp2 阴性表达及采取根治手术的患者生存时间长，预后较好。 序列分析的 结果显示，在这 20 例胆囊癌中，有 3 例病例经过测序分析见其 EGFR 基因第 20 号外显子发生了错义突变，突变率为 15，其中一例发生两处错义突变，位点 分别位于第 803 密码子 2407 碱基处(CGGTGG)和第 805 密码子 2414 碱基处 (CACCGC)，氨基酸分别由精氨酸变成色氨酸(ArgTrp)及谷氨酰胺变为精氨酸(GlnArg)。另外两例位点分别位于第 792 密码子 2375 碱基处(CTCCCC)和 第 795 密码子 2383 碱基处(TTCCTC)，氨基酸分别由亮氨酸变成脯氨酸 (LeuPro)及苯丙氨酸变为亮氨酸(PheLeu)。另有 2 例患者检测出 EGFR 基因 发生了同义突变，一例见于第 20 号外显子，突变位点为第 787 密码子 2361 碱 基处(Gln：CAGCAA)，另一例同义突变位点为 18 号外显子第 725 密码子 2175 碱基处(Thr：ACGACA)。EGFR 基因突变的病例均为 Nevin 分期期，在术后 一年内均死亡。 结论： 1、P27、Skp2 及手术方式是胆囊癌生存时间的独 立预后因子。 2、P27、Skp2、CyclinDl、Ep-CAM、MUC1、Ki67 及 EGFR 均与 胆囊癌的发生有一定关系，上述生物标志物表达的变化可能对胆囊癌的演化和 进展起重要作用，并可能成为新的临床辅助诊断和监测预后的指标。 3、EGFR 基因第 18-21 号外显子的突变可能与胆囊癌的进程及预后有关。关锭 词：胆囊癌；生物标志物；免疫组织化学；聚合酶链反应；体细胞突变正文内容正文内容研究目的： 研究生物标志物 P27、Skp2、CyclinDl、Ep- CAM、MUC1、Ki67 及 EGTR 在胆囊癌的表达与其生物学特点，并探讨上述标志物 及各种临床病理参数与患者生存时间的关系。寻找新的与胆囊癌预后相关的分 子标记物，以期为临床提供更多的信息，指导治疗，减少复发与转移。 研究 方法： 本实验为回顾性研究：复习解放军总医院病理科 1999 年 7 月-2005 年 7 月行手术切除的胆囊癌 72 例，查阅相关病历并对全部病例进行随访，得到 临床资料齐全并成功获访的病人共 60 例。 光镜下复习 60 例胆囊癌病例病理 切片，观察癌组织病理分类、分化程度、神经侵犯、血管侵犯及有无坏死等病 理特点。 免疫组化染色：采用 PV600 二步法，检测 60 例胆囊癌及 15 例癌旁 正常组织标本的 P27、Skp2、CyclinDl、Ep-CAM、NUC1、Ki67 及 EGFR 七种生物 标志物表达状况，分析其与临床、病理及预后的关系。 EGTR 基因突变的检 测：检出 2003 年 7 月-2007 年 7 月间经免疫组化检测 EGFR 染色为阳性的胆囊 癌病例 20 例，并查阅相关临床资料。提取胆囊癌石蜡标本的 DNA，进行定量测 定，并采用聚合酶链反应技术进行扩增反应，用扩增产物来进行纯化及测序分 析，观察其 EGFR 基因第 18、19、20 及 21 外显子的突变情况 结果： 各 生物标志物的在胆囊癌表达的阳性率分别为 P27(41.7)、Skp2(56.7)、 CyclinDl(48.3)、Ep-CAM(56.7)、MUC1(51.7)、Ki67(55.0)及 EGTR(33.3)。与 Nevin 分期相关的是 P27 及 Skp2(P 均0.05)，其中 Skp2 的 表达在-期比-期高(P=0.016)，而 P27 则与之相反(P=0.037)。 CyclinDl、Skp2、MUC1 及 Ki67 随着病理组织分化程度的降低，其蛋白表达增 高，在高分化组与中低分化组之间具有统计学差异(P 均0.05)。另外， CyclinDl 及 Skp2 均与坏死呈正相关(P 均0.05)，含坏死组的阳性率均明显高 于无坏死组的阳性率(P 均0.05)。 Skp2、CyclinDl、Ep-CAM、MUC1、Ki67 及 EGFR 在胆囊癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织，而 P27 则相反(P 均 0.05)。 单因素生存分析显示，P27、Skp2、CyclinDl、Ep- CAM、Ki67、Nevin 分期、肿瘤病理分化、肿瘤坏死、血管侵犯及手术方式共 10 种因素与胆囊癌患者的术后生存时间有关：P27 阳性表达组患者的总体生存时 间长于阴性的患者(P=0.000)；Skp2、CyclinDl、Ep-CAM 及 Ki67 阳性表达组患 者的生存时间均较阴性表达组患者的生存时间短 (PSkp2=0.003，PCyclinDl=0.016，PEp-CAM=0.038，PKi67=0.027)；胆囊癌患 者的 Nevin 分期(P=0.000)、肿瘤分化程度(P=0.021)、肿瘤有无坏死(P=0.033)、 血管侵犯(p=0.044)、手术方式(P=0.000)均为影响预后的因素。最终 Cox 多因 素总体生存分析显示，P27、Skp2 及手术方式 3 种因素入选，P27 阳性表达、 Skp2 阴性表达及采取根治手术的患者生存时间长，预后较好。 序列分析的 结果显示，在这 20 例胆囊癌中，有 3 例病例经过测序分析见其 EGFR 基因第 20 号外显子发生了错义突变，突变率为 15，其中一例发生两处错义突变，位点 分别位于第 803 密码子 2407 碱基处(CGGTGG)和第 805 密码子 2414 碱基处 (CACCGC)，氨基酸分别由精氨酸变成色氨酸(ArgTrp)及谷氨酰胺变为精氨 酸(GlnArg)。另外两例位点分别位于第 792 密码子 2375 碱基处(CTCCCC)和 第 795 密码子 2383 碱基处(TTCCTC)，氨基酸分别由亮氨酸变成脯氨酸 (LeuPro)及苯丙氨酸变为亮氨酸(PheLeu)。另有 2 例患者检测出 EGFR 基因 发生了同义突变，一例见于第 20 号外显子，突变位点为第 787 密码子 2361 碱基处(Gln：CAGCAA)，另一例同义突变位点为 18 号外显子第 725 密码子 2175 碱基处(Thr：ACGACA)。EGFR 基因突变的病例均为 Nevin 分期期，在术后 一年内均死亡。 结论： 1、P27、Skp2 及手术方式是胆囊癌生存时间的独 立预后因子。 2、P27、Skp2、CyclinDl、Ep-CAM、MUC1、Ki67 及 EGFR 均与 胆囊癌的发生有一定关系，上述生物标志物表达的变化可能对胆囊癌的演化和 进展起重要作用，并可能成为新的临床辅助诊断和监测预后的指标。 3、EGFR 基因第 18-21 号外显子的突变可能与胆囊癌的进程及预后有关。关锭 词：胆囊癌；生物标志物；免疫组织化学；聚合酶链反应；体细胞突变 研究目的： 研究生物标志物 P27、Skp2、CyclinDl、Ep-CAM、MUC1、Ki67 及 EGTR 在胆囊癌的表达与其生物学特点，并探讨上述标志物及各种临床病理参 数与患者生存时间的关系。寻找新的与胆囊癌预后相关的分子标记物，以期为 临床提供更多的信息，指导治疗，减少复发与转移。 研究方法： 本实验 为回顾性研究：复习解放军总医院病理科 1999 年 7 月-2005 年 7 月行手术切除 的胆囊癌 72 例，查阅相关病历并对全部病例进行随访，得到临床资料齐全并成 功获访的病人共 60 例。 光镜下复习 60 例胆囊癌病例病理切片，观察癌组织 病理分类、分化程度、神经侵犯、血管侵犯及有无坏死等病理特点。 免疫组 化染色：采用 PV600 二步法，检测 60 例胆囊癌及 15 例癌旁正常组织标本的 P27、Skp2、CyclinDl、Ep-CAM、NUC1、Ki67 及 EGFR 七种生物标志物表达状况， 分析其与临床、病理及预后的关系。 E