微生物学与免疫学教研室,血浆凝固酶实验与 肥达氏反应实验,医学微生物学实验,目录,一 血浆凝固酶实验,二、肥达氏反应实验,熟悉血浆凝固酶试验的意义。,目的：,一 血浆凝固酶实验,材料：,菌种 ： 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌其他： 新鲜兔血浆(或人血浆)、 NS等,纤维蛋白原+血浆凝固酶 不溶性纤维蛋白,玻片法原理：,一 血浆凝固酶实验,细菌形成凝块,黏附于细菌,充分混合，观察结果。 结果：阳性无法混匀，细菌在血浆中聚集成团块； 阴性呈均匀混浊 ；,方法：,一 血浆凝固酶实验,意义：,鉴定致病性与非致病性葡萄球菌。,目的：,二、肥达氏反应实验,1、掌握肥达试验的原理，操作方法及结果判断。2、熟悉其临床意义。,一、肥达氏反应实验,材料：,1标本 感染待测血清（稀释度1：20）。2试剂 伤寒沙门菌菌体抗原（O）及鞭毛抗原 （H）、甲型副伤寒沙门菌鞭毛抗原及乙型 副伤寒沙门菌鞭毛抗原。3其他 微孔反应板、50l移液器、吸头、水浴 箱等。,原理：,一、肥达氏反应实验,（1）在微孔反应板编号4排6列。（2）每孔加入生理盐水50l 。（3）吸取待检血清50l加入每排第1孔，连续倍比稀释 到第5孔。从第5孔吸出50l弃去。第6孔为对照管。 这样每排从第1孔至第5孔的血清稀释度为1：40, 1：80,1：160，1：320,1：640。 （4）每排每孔加入对应的伤寒菌液50l 。（5）混匀，置于52水浴箱中1h后观察 。,方法：,二、肥达氏反应实验,50,实验方法,50,50,50,50,50,50,50,50,50,1:40,1:80,1:160,1:320,1:640,50,弃掉,1,2,3,4,5,50,6,50,NS(l ),待测血清,对照管,50,50,50,50,灭活的伤寒菌液,50l,50l,50l,50l,50l,50l,抗体稀释度,彻底混匀,52, 1h,二、肥达氏反应实验,结果： 先观察对照管，应无凝集现象。“+” 细菌全部凝集，液体清澈，孔底形成大片凝集物。“+” 细菌大部分凝集，液体澄清，孔底明显凝集物。“+” 细菌部分凝集，液体半澄清，孔底有明显凝集物“+” 少量细菌凝集，液体较混浊，孔底少量凝集物。“-” 液体混浊，细菌无凝集。与对照孔相同。,二、肥达氏反应实验,效价（滴度）的判定： 产生明显凝集反应（+）的最高血清稀释度为血清中所测抗体的效价。效价愈高，表示血清中所含该抗体愈多。如血清的最低稀释度仍无凝集，或血清效价低于1：80 ，则为阴性，应报“1：1280”。,二、肥达氏反应实验,实验预期结果,+,很小的凝集颗粒,混浊,-,无凝集现象,与对照相同,+,小、部分凝集块,中等混浊,+,大多凝集管底,轻度混浊,+,大的凝集块,清亮,凝集程度,沉淀,上清,H与O抗体的性质及其消长意义,管底沉淀,凝集程度,最高稀释比例,待测血清的滴度,效价,思考题,1. 李某发热、全身不适，体温持续升高，最高达40，采血进行肥达氏实验检测，检测结果是O抗体凝集效价是1:80， H抗体凝集效价是1:320。请根据肥达氏实验检测结果分析李某的感染情况。,玻片法凝集现象,肉眼所见,镜下所见,