1近红外光谱法鉴别消渴丸真伪的应用作者：韩莹，张永耀，侯惠婵，胡世强【摘要 】 目的 利用近红外(NIR) 光谱法对品牌中成药“消渴丸”建立判别模型，快速有效筛选假冒品。 方法 收集厂家正品近红外漫反射光谱，在 OPUS 软件中应用一致性检验模型设置模块建立消渴丸一致性检验模型。结果 利用该一致性检验模型能够准确区分消渴丸同其 4 批假冒品。结论 本文建立的检验模型简单、快速、有效，能应用于消渴丸的日常监督打假中。 【关键词】 近红外光谱;消渴丸;一致性检验(Guangzhou Institute for Drug Control，Guangzhou,Guangdong 510160,China)Abstract:Objective To establish the conformity test model for Chinese medicine “Xiaoke” pill.Methods Near infrared spectral scan was used to set up the conformity test model by the OPUS software with 17 collected products and 4 counterfeits. Microscopic examination and HPLC were employed to verify the model.Results It can accurately distinguish Xiaoke pill with counterfeit products by the conformity test model.Conclusion The established model is 2simple，rapid ，effective and suitable for the daily supervision of Xiaoke pills.Key words:near infrared spectroscopy;Xiaoke pill;conformity test消渴丸是中西药结合制剂，具有滋肾养阴、益气生津功能，临床上广泛用于多饮、多尿、多食、消瘦、体倦无力、眠差腰痛、尿糖及血糖升高之气阴两虚型消渴证。近年来在市场上发现不法分子为经济利益所驱动，制售假冒的消渴丸。一致性检验是一种快捷的图谱比较方法，用于比较未知光谱与某一组参考光谱是否具有一致性：首先计算参考光谱在每个波长点处吸光度的平均值和标准偏差，其次将每个波长点的平均值加减多少倍(即 CI 限度)标准偏差作为该波长点的可信区间;待测光谱在该波长点处的吸光度与参考光谱平均值的差值除以标准偏差，得到的就是一致性指数(conformity index，CI)。根据待测样品光谱的 CI值是否超过 CI 限度，即该光谱是否越过可信区间，可快速判断待测样品是否可疑1。本文利用近红外光谱测定和数据分析软件建立消渴丸的一致性检验模型，同时利用显微特征鉴别和高效液相色谱法，确定样品真伪，以进一步验证该模型的准确性。31 仪器与样品1.1 仪器MatrixF近红外光谱仪、手持 1.5 m 固体光纤探头(德国布鲁克光谱仪器公司);OPUS 5.0 光谱分析软件(德国布鲁克光谱仪器公司);LC20AT 高效液相色谱仪(日本岛津);Leica CM E 电光显微镜(德国徕卡公司) 。1.2 样品消渴丸正品 17 批(编号：1-17 ，对应批号为MY0074、M07018 、 M01315、LY0077、L00677、K03189、M00279、MF0014、M01383、M01375、M01367、M01341、M00313、M00287、M07001、M00295、MO1354，均来自广州中一药业有限公司);标示消渴丸假冒品 4 批 (编号：18-21，对应标示批号为：L00462、 L00579、L03073、L05628)。2 实验方法2.1 近红外光谱采集条件4扫描范围：4 00012 000 cm-1;扫描次数：32;分辨率：8 cm-1;扫描速度：10 kHz;以内置背景为参考;检测器设置：半导体制冷铟镓砷探测器;采样模式：漫反射方式; 温度、湿度：22 ，60%。2.2 近红外光谱采集和处理2.2.1 取样品(浓缩水丸) ，用锉刀锉成较光纤探头直径稍大的横截面，探头直接接触切面采集光谱，每批重复测定 4 次。在OPUS 的一致性检验模型设置模块中，取编号 1-14 样品的近红外光谱作参考光谱，见图 1。另取编号 15-21 样品近红外光谱作验证光谱，只选择矢量归一化预处理数据，取 4 061.78 516.8 cm-1谱段范围，设定 CI 限度为 6，建立样品的一致性检验模型。2.2.2 在不同条件下近红外光谱采集，取编号 14 样品，按不同操作者，不同温度、湿度环境(22 、60%，28 、75%)，不同测量深度(截面大、中、小) 采集光谱，各重复测定 3 次。2.3 显微特征鉴别取编号 8、18、19、20、21 样品，磨粉，取适量制片，按2010 年版中国药典2置显微镜下观察。52.4 高效液相色谱图取编号 8、18、19、20、21 样品粉末，按 2010 年版中国药典 “消渴丸”含量测定项下的方法2，扫描高效液相色谱图。3 结果3.1 正品与假冒品近红外光谱图的区别在 OPUS 中，将正品与假冒品近红外原始光谱图矢量归一化预处理(见图 2)。可见，编号 19、20 假冒品与正品近红外光谱曲线差异较大，编号 18、21 假冒品与正品的光谱图相似， 但在 4 200、 5 500、3.2 建立一致性验证模型取编号 1-14 样品的近红外光谱作建模参考光谱，另取编号15-21 样品作为验证光谱，结果见图 3。从图 3 可见，编号 18-21假冒品均在所设定的 CI 限度以上，超出建模样品光谱图的可信区间 ;验证编号 15-17 正品在 CI 限度以下，跟建模样品一致。验证的结果与样品实际情况相符。63.3 模型耐用性验证取在不同条件下近红外光谱作为验证光谱，结果见图 4。不同操作者，不同温度、湿度环境，不同测量深度等变化下测定的光谱，经计算均在所设定的 CI 限度之下。验证结果说明上述因素变化对模型判别影响不大。3.4 显微鉴别结果对编号 8、18-21 样品进行显微特征观察后发现，编号 8 样品(正品 )符合 中国药典 描述的显微特征;编号 18-21 样品(假冒品)部分具有中国药典描述的显微特征，但同时可见掺有大量无机物，显微特征与正品有明显不同;另外，编号 18 样品可见葛根显微特征,属于标准规定外的显微特征。3.5 高效液相色谱图的差异为进一步求证，取消渴丸正品和假冒品扫描高效液相色谱图，见图 5。从图可见，编号 8 样品(正品) 在保留时间 9.60 min 处有色谱特征峰，编号 18 假冒品有特征峰，编号 18-21 假冒品在 9.6 min 没有特征峰。74 讨论4.1 近红外光谱检测属于无污染和无损伤低碳环保检测技术，样品不需特别的预处理，不使用有毒有害试剂;扫描过程迅速，数十秒内获得一个样品的全光谱图;通过数据分析软件可以很快建立各种数学模型，在不同情况中使用3。4.2 一致性检验是一种近红外光谱定性检测方法，在打击假冒药品时有较好的专属性、准确性，但模型建立需要一定代表性的参考光谱，事先需要准备一定量的样品1，4 。4.3 药品的近红外图谱是活性成分和辅料的叠加图谱，不管是活性成分改变还是辅料改变，近红外图谱都将发生改变5。显微鉴别时，某假冒品和正品同样都具有药材的显微特征，但如果辅料不同，近红外图谱仍有较大差异。4.4 通过扫描高效液相色谱图，发现假冒品(编号 18)和正品在保留时间 9.6 min 左右有相同的色谱峰(葛根素)，高效液相色谱图有相似点，但是通过显微特征和近红外图谱分析，可以将两者区分，筛选出假冒品。随着药品造假手段越来越高明，多种检验技术的采用可从多个层面验证药品的真假。8【参考文献】1 周伟,陈雯.应用近红外漫反射光谱法对红霉素薄膜衣片进行一致性检验J.中国药师， 2009(4):47-48.2国家药典委员会.中华人民共和国药典： 2010 年版一部M.北京:中国医药科技出版社,2010.3徐广通,袁洪福 ,陆婉珍.现代近红外光谱技术及应用进展J.光谱学与光谱分析,1999 ，20(2):134-142.4周伟,陈雯 .应用近红外漫反射光谱法对红霉素薄膜衣片进行一致性检验J.中国药师， 2009(4):47-48.5褚小立,袁洪福 ,陆婉珍.近年来我国近红外光谱分析技术的研究与应用进展J.分析仪器,2006(2):1-10.5胡昌勤,冯艳春 ;近红外光谱假药识别系统的设想及可行性探讨J.中国药事,2004(4):50-52.