第七章、酶的抑制作用及抑制动力学 失活作用: 通过变性作用引起酶活力下降或丧失 抑制作用: 改变必需基团性质,引起酶活力下降,丧失 第一节抑制作用的类型: 一、分类: (一)不可逆抑制作用: 抑制剂以很牢固的共价键与酶结合，不能用物理方法除 去，抑制后酶活力不能恢复 专一性的不可逆抑制剂: 非专一性的不可逆抑制剂: (二)可逆抑制作用: 抑制剂以非共价键与酶结合阻遏酶的活性，可以用物理 方法除去抑制剂后，酶活力能恢复二、区别方法 (一)物理方法: (二)动力学方法:1.酶预先用抑制剂处理后 测定酶活力变化情况:2.在测活系统中加入抑制剂, 然后加入不同酶量, 测定酶 活力变化情况: 第二节不可逆抑制作用 一. 非专一性的不可逆抑制作用: 1.概念: 2. 非专一性的不可逆抑制剂 酰化试剂:(酸酐,乙酰咪唑,硫代三氟乙酸乙酯,O-甲基 异脲)-NH2 NHCO-R R-CO-X + E- -OH E- O CO-R + HX-C6H5-OH C6H5-OCO-R-SH SCO-R烷化试剂:(2.4-二硝基苯氟,碘代乙酸,碘代乙酰 胺等)-NH3 -NH-R -SH -S-R R-X + E -COOH E-COOR + HX- S-CH3 -S (CH3)-R咪唑基NH -咪唑基N-R 含有活泼双键试剂:(N-乙基顺丁烯二酸抱亚胺 (NEMI)、丙烯腈等亲电试剂:(四硝基甲烷(TNM)氧化剂: H2O2, NBS等 作用-SH、Trp、吲哚基等 还原剂: ME, DTT等,作用-S-S-、二、专一性不可逆抑制剂: （一）Ks型不可逆抑制剂: 1.概念 2.抑制机理 E + I EI EIn判断Ks型抑制剂作用是否发生在活性部位方法: 化学定量法. 底物、竞争性抑制剂保护方法 酶先可逆失活,再研究KS型抑制情况亲和标记法图解E IEIEin（二）Kcat型不可逆抑制动力学 概念:自杀性底物 例如中E.coli中-羟基葵酰硫酯脱水酶 CH3-(CH2)6-CH2-CH(OH)-CO-S-R R = -CH2-CH2-NH-CO-CH3CH3-(CH2)6-CH=CH-CO-S-R (-反式双键)CH3(CH2)5-CH=CH-CH2-CO-S-R (,顺式双键)Kcat型抑制剂: 3.4-葵炔酰-N-乙酰半胱胺 CH3-(CH2)5-CC-CH2-CO-S-RECH3-(CH2)5 HC=C=CH-CO-SR CH3(CH2)5HC=C-CH2 -CO-SR不可逆共价结合第三节 可逆抑制作用的动力学: 可逆抑制作用: Reversible Inhibition 1.概念 2.类型: 竞争性抑制: Comp. C Competitive inhibition 非竞争性抑制 NonC. NC Non-Competitive 反竞争性抑制 UnC. UC Un-Competitive 混合型抑制 MT Mixed Type inhibition一、竞争性抑制作用动力学 模型图:竞争性抑制作用动力学方程推导：酶形式 矢量图 动力学项E k-1k-3+k-3k2ES k1k-3SEI k-1k3I+k2k3I动力学模型:动力学方程：式中Vm=k2Eo 不变 Km 为米氏常数Kmapp 表观米氏常数，增大KI 为抑制常数双倒数作图法：抑制常数：KI的求法： 以Kmapp 对I作图，横轴截距为 - KI抑制率i % = (1 - vi / vo) 100% i %与S有关, S i% 二、非竞争性抑制作用动力学: 动力学模型:动力学方程：Vm=k2Eo Vmapp为表观最大速度，减小Km 为米氏常数 ， 不变。KI 为抑制常数双倒数作图法：抑制常数：KI的求法： 以1/Vmapp 对I作图，横轴截距为 - KI 抑制率: i %与S无关, 三、反竞争性抑制作用动力学: 动力学模型:动力学方程：Vmapp为表观最大速度，减小Kmapp 为表观米氏常数 ，减小KI 为抑制常数双倒数作图法：抑制常数：KI的求法： 以1/Vmapp 对I作图， 横轴截距为 - KI抑制率: i %与S有关, S i% 四、混合型抑制作用动力学: 动力学模型:动力学方程：Vmapp为表观最大速度，减小Kmapp 为表观米氏常数 ， 当KI KIS Km减小双倒数作图法：抑制常数：KI、KIS的求法： 以斜率对I作图，横轴截距为KI 以1/Vmapp 对I作图，横轴截距为 - KIS第四节 四种可逆抑制作用的动力学比 较竞争性抑制: Comp. C. Competitive inhibition 非竞争性抑制 NonC. NC. Non-Competitive 反竞争性抑制 UnC. UC . Un-Competitive 混合型抑制 MT Mixed Type inhibitionC: KIS UC: KI NC: KI = KIS MT: KI = KIS 竞争性抑制剂： C: KIS 非竞争性： NC: KI = KIS反竞争性 UC: KI 混合型抑制剂： MT: KI = KIS 纵轴截距：斜率： 1相交2nd相像； 1相交3rd相像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