生物化学与分子生物学专业优秀论文生物化学与分子生物学专业优秀论文 介导金葡菌侵袭细胞的介导金葡菌侵袭细胞的FnBPAFnBPA 蛋白功能肽段的初步研究蛋白功能肽段的初步研究关键词：金黄色葡萄球菌关键词：金黄色葡萄球菌 FnBPAFnBPA 侵袭侵袭 纤连蛋白纤连蛋白 FnFn 293293 细胞细胞 功能肽段功能肽段摘要：金黄色葡萄球菌(以下简称金葡菌)是革兰染色阳性病原菌，能引起多种 疾病。过去研究认为金葡菌属于胞外寄生菌。但近来的研究表明，金葡菌可以 侵袭多种非专职吞噬细胞，FnBP 蛋白是介导金葡菌侵袭宿主细胞的关键表面蛋 白。 研究认为 FnBP 蛋白通过与纤连蛋白结合从而介导细菌与细胞的结合， 其中 FnBPA 与纤连蛋白结合的关键位点位于蛋白 D 结构域，以重复序列为单位， 包括 3 个连续的完整的重复序列 Dlt;,1gt;、Dlt;,2gt;、Dlt;,3gt;和一个截 短的 Dlt;,4gt;序列。由于空间位阻的关系，如果 FnBP 仅仅以重复 序列为单位结合 Fn 分子，势必造成实际结合位点的减少和 D4 截短序列功能的 冗余。为保证最大限度的生物利用和结合，我们推测 FnBPA D domain 中的 Fn 结合位点可能并不是以重复序列为单位的，某些截短的重复序列或具有结合功 能，或和下一个重复序列的一部分组合产生新的结合位点。本实验的目的是对 以上推测进行初步验证。 根据文献报道，我们建立了细菌侵袭 293 细胞的实 验模型，并通过此模型找到了金葡菌有效侵袭株 04018 作为实验用菌株。利用 基因工程的方法，克隆了 04018 菌株的 FnBPA 蛋白 Dlt;,1gt;区 C 端和 Dlt;,2gt;区 N 端肽段的基因片段，在大肠杆菌中表达了 GST 与该肽(FnBPA-D1c/D2n)的融合蛋白。ELISA 实验证实融合蛋白中的目的肽能够 结合 Fn，细菌侵袭细胞的实验证实融合蛋白的目的肽能够抑制金葡菌侵袭 293 细胞，蛋白的 50抑制剂量约为 20g/ml，相当于 2.5g/ml 肽。 通过本 课题的研究，我们找到了金葡菌 FnBPA 蛋白中与纤连蛋白结合的新的位点，提 示 FnBPA 蛋白的 D 结构域中或者具有更小的结合单位，或者存在更多的 Fn 结合 位点，而不是预测的 3-4 个，并为抑制金葡菌侵袭细胞的应用研究提供了一定 的基础。正文内容正文内容金黄色葡萄球菌(以下简称金葡菌)是革兰染色阳性病原菌，能引起多种疾 病。过去研究认为金葡菌属于胞外寄生菌。但近来的研究表明，金葡菌可以侵 袭多种非专职吞噬细胞，FnBP 蛋白是介导金葡菌侵袭宿主细胞的关键表面蛋白。研究认为 FnBP 蛋白通过与纤连蛋白结合从而介导细菌与细胞的结合，其中 FnBPA 与纤连蛋白结合的关键位点位于蛋白 D 结构域，以重复序列为单位，包 括 3 个连续的完整的重复序列 Dlt;,1gt;、Dlt;,2gt;、Dlt;,3gt;和一个截 短的 Dlt;,4gt;序列。由于空间位阻的关系，如果 FnBP 仅仅以重复 序列为单位结合 Fn 分子，势必造成实际结合位点的减少和 D4 截短序列功能的 冗余。为保证最大限度的生物利用和结合，我们推测 FnBPA D domain 中的 Fn 结合位点可能并不是以重复序列为单位的，某些截短的重复序列或具有结合功 能，或和下一个重复序列的一部分组合产生新的结合位点。本实验的目的是对 以上推测进行初步验证。 根据文献报道，我们建立了细菌侵袭 293 细胞的实 验模型，并通过此模型找到了金葡菌有效侵袭株 04018 作为实验用菌株。利用 基因工程的方法，克隆了 04018 菌株的 FnBPA 蛋白 Dlt;,1gt;区 C 端和 Dlt;,2gt;区 N 端肽段的基因片段，在大肠杆菌中表达了 GST 与该肽(FnBPA-D1c/D2n)的融合蛋白。ELISA 实验证实融合蛋白中的目的肽能够 结合 Fn，细菌侵袭细胞的实验证实融合蛋白的目的肽能够抑制金葡菌侵袭 293 细胞，蛋白的 50抑制剂量约为 20g/ml，相当于 2.5g/ml 肽。 通过本 课题的研究，我们找到了金葡菌 FnBPA 蛋白中与纤连蛋白结合的新的位点，提 示 FnBPA 蛋白的 D 结构域中或者具有更小的结合单位，或者存在更多的 Fn 结合 位点，而不是预测的 3-4 个，并为抑制金葡菌侵袭细胞的应用研究提供了一定 的基础。 金黄色葡萄球菌(以下简称金葡菌)是革兰染色阳性病原菌，能引起多种疾病。 过去研究认为金葡菌属于胞外寄生菌。但近来的研究表明，金葡菌可以侵袭多 种非专职吞噬细胞，FnBP 蛋白是介导金葡菌侵袭宿主细胞的关键表面蛋白。 研究认为 FnBP 蛋白通过与纤连蛋白结合从而介导细菌与细胞的结合，其中 FnBPA 与纤连蛋白结合的关键位点位于蛋白 D 结构域，以重复序列为单位，包 括 3 个连续的完整的重复序列 Dlt;,1gt;、Dlt;,2gt;、Dlt;,3gt;和一个截 短的 Dlt;,4gt;序列。由于空间位阻的关系，如果 FnBP 仅仅以重复 序列为单位结合 Fn 分子，势必造成实际结合位点的减少和 D4 截短序列功能的 冗余。为保证最大限度的生物利用和结合，我们推测 FnBPA D domain 中的 Fn 结合位点可能并不是以重复序列为单位的，某些截短的重复序列或具有结合功 能，或和下一个重复序列的一部分组合产生新的结合位点。本实验的目的是对 以上推测进行初步验证。 根据文献报道，我们建立了细菌侵袭 293 细胞的实 验模型，并通过此模型找到了金葡菌有效侵袭株 04018 作为实验用菌株。利用 基因工程的方法，克隆了 04018 菌株的 FnBPA 蛋白 Dlt;,1gt;区 C 端和 Dlt;,2gt;区 N 端肽段的基因片段，在大肠杆菌中表达了 GST 与该肽(FnBPA-D1c/D2n)的融合蛋白。ELISA 实验证实融合蛋白中的目的肽能够 结合 Fn，细菌侵袭细胞的实验证实融合蛋白的目的肽能够抑制金葡菌侵袭 293 细胞，蛋白的 50抑制剂量约为 20g/ml，相当于 2.5g/ml 肽。 通过本课题的研究，我们找到了金葡菌 FnBPA 蛋白中与纤连蛋白结合的新的位点，提 示 FnBPA 蛋白的 D 结构域中或者具有更小的结合单位，或者存在更多的 Fn 结合 位点，而不是预测的 3-4 个，并为抑制金葡菌侵袭细胞的应用研究提供了一定 的基础。 金黄色葡萄球菌(以下简称金葡菌)是革兰染色阳性病原菌，能引起多种疾病。 过去研究认为金葡菌属于胞外寄生菌。但近来的研究表明，金葡菌可以侵袭多 种非专职吞噬细胞，FnBP 蛋白是介导金葡菌侵袭宿主细胞的关键表面蛋白。 研究认为 FnBP 蛋白通过与纤连蛋白结合从而介导细菌与细胞的结合，其中 FnBPA 与纤连蛋白结合的关键位点位于蛋白 D 结构域，以重复序列为单位，包 括 3 个连续的完整的重复序列 Dlt;,1gt;、Dlt;,2gt;、Dlt;,3gt;和一个截 短的 Dlt;,4gt;序列。由于空间位阻的关系，如果 FnBP 仅仅以重复 序列为单位结合 Fn 分子，势必造成实际结合位点的减少和 D4 截短序列功能的 冗余。为保证最大限度的生物利用和结合，我们推测 FnBPA D domain 中的 Fn 结合位点可能并不是以重复序列为单位的，某些截短的重复序列或具有结合功 能，或和下一个重复序列的一部分组合产生新的结合位点。本实验的目的是对 以上推测进行初步验证。 根据文献报道，我们建立了细菌侵袭 293 细胞的实 验模型，并通过此模型找到了金葡菌有效侵袭株 04018 作为实验用菌株。利用 基因工程的方法，克隆了 04018 菌株的 FnBPA 蛋白 Dlt;,1gt;区 C 端和 Dlt;,2gt;区 N 端肽段的基因片段，在大肠杆菌中表达了 GST 与该肽(FnBPA-D1c/D2n)的融合蛋白。ELISA 实验证实融合蛋白中的目的肽能够 结合 Fn，细菌侵袭细胞的实验证实融合蛋白的目的肽能够抑制金葡菌侵袭 293 细胞，蛋白的 50抑制剂量约为 20g/ml，相当于 2.5g/ml 肽。 通过本 课题的研究，我们找到了金葡菌 FnBPA 蛋白中与纤连蛋白结合的新的位点，提 示 FnBPA 蛋白的 D 结构域中或者具有更小的结合单位，或者存在更多的 Fn 结合 位点，而不是预测的 3-4 个，并为抑制金葡菌侵袭细胞的应用研究提供了一定 的基础。 金黄色葡萄球菌(以下简称金葡菌)是革兰染色阳性病原菌，能引起多种疾病。 过去研究认为金葡菌属于胞外寄生菌。但近来的研究表明，金葡菌可以侵袭多 种非专职吞噬细胞，FnBP 蛋白是介导金葡菌侵袭宿主细胞的关键表面蛋白。 研究认为 FnBP 蛋白通过与纤连蛋白结合从而介导细菌与细胞的结合，其中 FnBPA 与纤连蛋白结合的关键位点位于蛋白 D 结构域，以重复序列为单位，包 括 3 个连续的完整的重复序列 Dlt;,1gt;、Dlt;,2gt;、Dlt;,3gt;和一个截 短的 Dlt;,4gt;序列。由于空间位阻的关系，如果 FnBP 仅仅以重复 序列为单位结合 Fn 分子，势必造成实际结合位点的减少和 D4 截短序列功能的 冗余。为保证最大限度的生物利用和结合，我们推测 FnBPA D domain 中的 Fn 结合位点可能并不是以重复序列为单位的，某些截短的重复序列或具有结合功 能，或和下一个重复序列的一部分组合产生新的结合位点。本实验的目的是对 以上推测进行初步验证。 根据文献报道，我们建立了细菌侵袭 293 细胞的实 验模型，并通过此模型找到了金葡菌有效侵袭株 04018 作为实验用菌株。利用 基因工程的方法，克隆了 04018 菌株的 FnBPA 蛋白 Dlt;,1gt;区 C 端和 Dlt;,2gt;区 N 端肽段的基因片段，在大肠杆菌中表达了 GST 与该肽(FnBPA-D1c/D2n)的融合蛋白。ELISA 实验证实融合蛋白中的目的肽能够结合 Fn，细菌侵袭细胞的实验证实融合蛋白的目的肽能够抑制金葡菌侵袭 293 细胞，蛋白的 50抑制剂量约为 20g/ml，相当于 2.5g/ml 肽。 通过本 课题的研究，我们找到了金葡菌 FnBPA 蛋白中与纤连蛋白结合的新的位点，提 示 FnBPA 蛋白的 D 结构域中或者具有更小的结合单位，或者存在更多的 Fn 结合 位点，而不是预测的 3-4 个，并为抑制金葡菌侵袭细胞的应用研究提供了一定 的基础。 金黄色葡萄球菌(以下简称金葡菌)是革兰染色阳性病原菌，能引起多种疾病。 过去研究认为金葡菌属于胞外寄生菌。但近来的研究表明，金葡菌可以侵袭多 种非专职吞噬细胞，FnBP 蛋白是介导金葡菌侵袭宿主细胞的关键表面蛋白。 研究认为 FnBP 蛋白通过与纤连蛋白结合从而介导细菌与细胞的结合，其中 FnBPA 与纤连蛋白结合的关键位点位于蛋白 D 结构域，以重复序列为单位，包 括 3 个连续的完整的重复序列 Dlt;,1gt;、Dlt;,2gt;、Dlt;,3gt;和一个截 短的 Dlt;,4gt;序列。由于空间位阻的关系，如果 FnBP 仅仅以重复 序列为单位结合 Fn 分子，势必造成实际结合位点的减少和 D4 截短序列功能的 冗余。为保证最大限度的生物利用和结合，我们推测 FnBPA D domain 中的 Fn 结合位点可能并不是以重复序列为单位的，某些截短的重复序列或具有结合功 能，或和下一个重复序列的一部分组合产生新的结合位点。本实验的目的是对 以上推测进行初步验证。 根据文献报道，我们建立了细菌侵袭 293 细胞的实 验模型，并通过此模型找到了金葡菌有效侵袭株 04018 作为实验用菌株。利用 基因工程的方法，克隆了 04018 菌株的 FnBPA 蛋白 Dlt;,1gt;区 C 端和 Dlt;,2gt;