内科学内分泌专业毕业论文内科学内分泌专业毕业论文 精品论文精品论文 LRP16LRP16 基因增加脂肪细基因增加脂肪细胞胰岛素抵抗的机制研究胞胰岛素抵抗的机制研究关键词：关键词：LRP16LRP16 基因基因 脂肪细胞分化脂肪细胞分化 胰岛素抵抗胰岛素抵抗 葡萄糖摄取率葡萄糖摄取率 蛋白表达蛋白表达 恶性恶性 肿瘤肿瘤摘要：LRP16 是从健康成人外周血淋巴细胞中克隆的人类基因，它在多种雌激 素依赖的肿瘤中高表达。既往研究证明，LRP16 通过上调乳腺癌细胞周期蛋白 的表达，促进细胞从 G1 期进入 S 期，最终促进乳腺癌细胞的增殖。前脂肪细胞 的分化是以生长抑制为前提的，而生长抑制状态的维持需要将细胞停滞于 G1 期。 因此推测：LRP16 可能参与前脂肪细胞的分化。胰岛素抵抗与恶性肿瘤关系密 切，一方面多种肿瘤可同时伴有胰岛素抵抗，另一方面胰岛素抵抗又可促进某 些肿瘤的发生发展。LRP16 作为一个癌基因，它是否会参与胰岛素抵抗的形成? 因此，本研究探讨了 LRP16 蛋白在 3T3-L1 前脂肪细胞诱导分化过程中表达量的 变化、LRP16 对脂肪细胞分化及胰岛素抵抗的影响及机制。研究共分为 3 部分：一、LRP16 蛋白在 3T3-L1 前脂肪细胞诱导分化过程中表达量的变化以及胰 岛素对脂肪细胞 LRP16 蛋白表达调控的研究 目的：LRP16 蛋白在 3T3-L1 细 胞诱导分化过程中表达量的变化及胰岛素对脂肪细胞 LRP16 蛋白表达的调控。 方法：(1)经典脂肪细胞诱导方案诱导前脂肪细胞为成熟脂肪细胞，每天(0-8 天)均留取蛋白标本。(2)不同浓度(0，1，10，100 nmol/L)胰岛素刺激脂肪细 胞 24 小时，分别留取蛋白标本。(3)Western-Blot 方法检测样本中 LRP16 蛋白 的表达量。 结果：(1)LRP16 蛋白在前脂肪细胞无表达或极低表达，从诱导 的第 3、4 天开始，随着脂滴的出现表达量迅速上升到峰值，此后维持在高表达 水平。LRP16 蛋白在第 68 天之间表达水平无统计学差异(P0.05)，在余各 时段间表达水平均有显著差异(P0.01)。(2)细胞内 LRP16 蛋白表达量与胰岛 素作用浓度负相关。LRP16 蛋白在胰岛素各浓度段间的表达水平均有显著差异 (P0.01)。 结论：(1)LRP16 蛋白在前脂肪细胞诱导分化过程中存在表达量 的变化。(2)胰岛素负调控脂肪细胞 LRP16 蛋白的表达。 二、LRP16 对 3T3- L1 前脂肪细胞分化影响的研究 目的：探讨 LRP16 对 3T3-L1 前脂肪细胞分化 的影响及机制。 方法：(1)LRP16 稳定过表达前脂肪细胞株建立：将 LRP16 真核表达质粒(pcDNA3.1-LRP16)及对照空载体(pcDNA3.1)分别转染 3T3-L1 前脂 肪细胞，抗性筛选(G418)出 LRP16 过表达组细胞株(3T3-16)及对照组细胞株 (3T3-3.1)。(2)Western-Blot 方法鉴定 LRP16 过表达前脂肪细胞株成功建立。 (3)倒置显微镜观察 LRP16 对前脂肪细胞诱导分化过程形态变化的影响。(4)油 红 O 染色后，倒置显微镜观察 LRP16 对脂肪细胞成脂分化的影响。(5)Real- time PCR 技术检测 3T3-16 组与 3T3-3.1 组脂肪细胞 PPAR 及 C/EBP mRNA 表达量。 结果：(1)3T3-16 组细胞株，其 LRP16 蛋白量明显高于 3T3-3.1 组 (P0.01)。(2)3T3-16 组细胞的分化滞后于 3T3-3.1 组，着色脂滴明显少于 3T3-3.1 组，油红 O 染色定量法比较：两组间 OD 值具有显著差异(P0.01)。 (3)3T3-16 组脂肪细胞 PPAR 及 C/EBPmRNA 表达量明显低于 3T3-3.1 组 (P0.01)。 结论：LRP16 可能通过下调脂肪细胞中 PPAR 及 C/EBP 的表 达，进而抑制脂肪细胞的分化。 三、LRP16 对脂肪细胞胰岛素抵抗影响的研 究 目的：探讨 LRP16 对脂肪细胞胰岛素抵抗的影响及机制。 方法：(1)检测 3T3-16 与 3T3-3.1 组的脂肪细胞，在基础及胰岛素刺激状态下，对 2-脱氧- 3H-D-葡萄糖的摄取率。(2)Real-time PCR 技术检测 3T3-16 与 3T3-3.1 组脂 肪细胞 GLUT4 mRNA 表达量。 结果：(1)3T3-16 组较 3T3-3.1 组脂肪细胞的 基础及胰岛素刺激后的葡萄糖摄取率均减低(P0.01)。(2)3T3-16 组较 3T3- 3.1 组脂肪细胞 GLUT4 mRNA 表达量明显减低(P0.01)。 结论：LRP16 可能 通过下调脂肪细胞中 GLUT4 的表达，进而抑制脂肪细胞的基础及胰岛素刺激后 的葡萄糖摄取率。 全文结论： 1LRP16 可能通过下调脂肪细胞中 PPAR 及 C/EBP 的表达，进而抑制脂肪细胞的分化。 2LRP16 可能通过下调脂 肪细胞中 GLUT4 的表达，进而抑制脂肪细胞的基础及胰岛素刺激后的葡萄糖摄 取率。 3胰岛素下调脂肪细胞中 LRP16 蛋白的表达。 以上研究结果表明， LRP16 可能在脂肪细胞分化及胰岛素抵抗的机制中发挥着十分重要的作用。正文内容正文内容LRP16 是从健康成人外周血淋巴细胞中克隆的人类基因，它在多种雌激素 依赖的肿瘤中高表达。既往研究证明，LRP16 通过上调乳腺癌细胞周期蛋白的 表达，促进细胞从 G1 期进入 S 期，最终促进乳腺癌细胞的增殖。前脂肪细胞的 分化是以生长抑制为前提的，而生长抑制状态的维持需要将细胞停滞于 G1 期。 因此推测：LRP16 可能参与前脂肪细胞的分化。胰岛素抵抗与恶性肿瘤关系密 切，一方面多种肿瘤可同时伴有胰岛素抵抗，另一方面胰岛素抵抗又可促进某 些肿瘤的发生发展。LRP16 作为一个癌基因，它是否会参与胰岛素抵抗的形成? 因此，本研究探讨了 LRP16 蛋白在 3T3-L1 前脂肪细胞诱导分化过程中表达量的 变化、LRP16 对脂肪细胞分化及胰岛素抵抗的影响及机制。研究共分为 3 部分：一、LRP16 蛋白在 3T3-L1 前脂肪细胞诱导分化过程中表达量的变化以及胰 岛素对脂肪细胞 LRP16 蛋白表达调控的研究 目的：LRP16 蛋白在 3T3-L1 细 胞诱导分化过程中表达量的变化及胰岛素对脂肪细胞 LRP16 蛋白表达的调控。 方法：(1)经典脂肪细胞诱导方案诱导前脂肪细胞为成熟脂肪细胞，每天(0-8 天)均留取蛋白标本。(2)不同浓度(0，1，10，100 nmol/L)胰岛素刺激脂肪细 胞 24 小时，分别留取蛋白标本。(3)Western-Blot 方法检测样本中 LRP16 蛋白 的表达量。 结果：(1)LRP16 蛋白在前脂肪细胞无表达或极低表达，从诱导 的第 3、4 天开始，随着脂滴的出现表达量迅速上升到峰值，此后维持在高表达 水平。LRP16 蛋白在第 68 天之间表达水平无统计学差异(P0.05)，在余各 时段间表达水平均有显著差异(P0.01)。(2)细胞内 LRP16 蛋白表达量与胰岛 素作用浓度负相关。LRP16 蛋白在胰岛素各浓度段间的表达水平均有显著差异 (P0.01)。 结论：(1)LRP16 蛋白在前脂肪细胞诱导分化过程中存在表达量 的变化。(2)胰岛素负调控脂肪细胞 LRP16 蛋白的表达。 二、LRP16 对 3T3- L1 前脂肪细胞分化影响的研究 目的：探讨 LRP16 对 3T3-L1 前脂肪细胞分化 的影响及机制。 方法：(1)LRP16 稳定过表达前脂肪细胞株建立：将 LRP16 真核表达质粒(pcDNA3.1-LRP16)及对照空载体(pcDNA3.1)分别转染 3T3-L1 前脂 肪细胞，抗性筛选(G418)出 LRP16 过表达组细胞株(3T3-16)及对照组细胞株 (3T3-3.1)。(2)Western-Blot 方法鉴定 LRP16 过表达前脂肪细胞株成功建立。 (3)倒置显微镜观察 LRP16 对前脂肪细胞诱导分化过程形态变化的影响。(4)油 红 O 染色后，倒置显微镜观察 LRP16 对脂肪细胞成脂分化的影响。(5)Real- time PCR 技术检测 3T3-16 组与 3T3-3.1 组脂肪细胞 PPAR 及 C/EBP mRNA 表达量。 结果：(1)3T3-16 组细胞株，其 LRP16 蛋白量明显高于 3T3-3.1 组 (P0.01)。(2)3T3-16 组细胞的分化滞后于 3T3-3.1 组，着色脂滴明显少于 3T3-3.1 组，油红 O 染色定量法比较：两组间 OD 值具有显著差异(P0.01)。 (3)3T3-16 组脂肪细胞 PPAR 及 C/EBPmRNA 表达量明显低于 3T3-3.1 组 (P0.01)。 结论：LRP16 可能通过下调脂肪细胞中 PPAR 及 C/EBP 的表 达，进而抑制脂肪细胞的分化。 三、LRP16 对脂肪细胞胰岛素抵抗影响的研 究 目的：探讨 LRP16 对脂肪细胞胰岛素抵抗的影响及机制。 方法：(1)检 测 3T3-16 与 3T3-3.1 组的脂肪细胞，在基础及胰岛素刺激状态下，对 2-脱氧- 3H-D-葡萄糖的摄取率。(2)Real-time PCR 技术检测 3T3-16 与 3T3-3.1 组脂 肪细胞 GLUT4 mRNA 表达量。 结果：(1)3T3-16 组较 3T3-3.1 组脂肪细胞的 基础及胰岛素刺激后的葡萄糖摄取率均减低(P0.01)。(2)3T3-16 组较 3T3- 3.1 组脂肪细胞 GLUT4 mRNA 表达量明显减低(P0.01)。 结论：LRP16 可能通过下调脂肪细胞中 GLUT4 的表达，进而抑制脂肪细胞的基础及胰岛素刺激后 的葡萄糖摄取率。 全文结论： 1LRP16 可能通过下调脂肪细胞中 PPAR 及 C/EBP 的表达，进而抑制脂肪细胞的分化。 2LRP16 可能通过下调脂 肪细胞中 GLUT4 的表达，进而抑制脂肪细胞的基础及胰岛素刺激后的葡萄糖摄 取率。 3胰岛素下调脂肪细胞中 LRP16 蛋白的表达。 以上研究结果表明， LRP16 可能在脂肪细胞分化及胰岛素抵抗的机制中发挥着十分重要的作用。 LRP16 是从健康成人外周血淋巴细胞中克隆的人类基因，它在多种雌激素依赖 的肿瘤中高表达。既往研究证明，LRP16 通过上调乳腺癌细胞周期蛋白的表达， 促进细胞从 G1 期进入 S 期，最终促进乳腺癌细胞的增殖。前脂肪细胞的分化是 以生长抑制为前提的，而生长抑制状态的维持需要将细胞停滞于 G1 期。因此推 测：LRP16 可能参与前脂肪细胞的分化。胰岛素抵抗与恶性肿瘤关系密切，一 方面多种肿瘤可同时伴有胰岛素抵抗，另一方面胰岛素抵抗又可促进某些肿瘤 的发生发展。LRP16 作为一个癌基因，它是否会参与胰岛素抵抗的形成?因此， 本研究探讨了 LRP16 蛋白在 3T3-L1 前脂肪细胞诱导分化过程中表达量的变化、 LRP16 对脂肪细胞分化及胰岛素抵抗的影响及机制。研究共分为 3 部分： 一、 LRP16 蛋白在 3T3-L1 前脂肪细胞诱导分化过程中表达量的变化以及胰岛素对脂 肪细胞 LRP16 蛋白表达调控的研究 目的：LRP16 蛋白在 3T3-L1 细胞诱导分 化过程中表达量的变化及胰岛素对脂肪细胞 LRP16 蛋白表达的调控。 方法： (1)经典脂肪细胞诱导方案诱导前脂肪细胞为成熟脂肪细胞，每天(0-8 天)均留 取蛋白标本。(2)不同浓度(0，1，10，100