生物化学与分子生物学专业毕业论文生物化学与分子生物学专业毕业论文 精品论文精品论文 尼崎青霉菌葡尼崎青霉菌葡萄糖氧化酶的分离纯化及性质研究萄糖氧化酶的分离纯化及性质研究关键词：尼崎青霉菌关键词：尼崎青霉菌 葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶 分离纯化分离纯化 酶学性质酶学性质摘要：葡萄糖氧化酶(GlucoseOxidase，EC1.1.3.4，简称 GOD)在食品、医药及 生物等领域有着广泛的应用。以尼崎青霉菌(Penicilliumamagasakiense)为材 料，采用发酵生产葡萄糖氧化酶，探讨不同时间、温度、转速、Ca2+、吐温 80 等对菌丝体和发酵液产酶的影响。24、200rpm、发酵六天、0.3mol/L 的 Ca2+、3的吐温 80 的条件下，菌丝体和发酵液中总酶活力达到最大。发酵 6 天后，离心得菌丝体经破壁、缓冲液抽提，获得胞内葡萄糖氧化酶的粗酶液； 发酵液即为胞外葡萄糖氧化酶的粗酶液。胞外葡萄糖氧化酶粗酶液浓缩后，采 用 DEAE-32 离子交换柱层析、SephacrylS-200 分子筛凝胶过滤柱层析纯化，得 到比活力为比活力达 472U/mg，纯化了 29.7 倍的的电泳单一纯的酶制剂，该酶 的亚基分子量约为 75kD。 该酶催化化葡萄糖反应的最适 pH 值为 5.6，最适 温度 40，在 pH7.0，37条件下测得动力学，米氏常数 Km 值为 122.6mmol/L，Vm 为 25.52mol/(Lmin)。酶的热稳定性研究表明：该酶在 pH5.58.5 区间和在温度低于 50下稳定。化学修饰剂对酶活力的影响表明咪 唑基、吲哚基、精氨酸胍基是该酶的活性功能基团，而蛋白质分子中巯基、二 硫键、赖氨酸的 -氨基、蛋氨酸侧链的硫醚基和丝氨酸残基与酶活力无关。 溴代乙酸(BrAc)、NBS 的抑制机理为非竞争性类型，而乙酰丙酮其抑制机理表 现为竞争性类型。它们的抑制常数分别为 26.5、19.2、7.35mmol/L。金属离子 对酶活力的影响表明金属离子(Li+、Na+、K+、Ca2+、Mn2+)对酶活力也没有影 响。Al3+和 Zn2+对 GOD 具有轻微的激活作用：Ba2+、Co2+、Cd2+对酶有轻微抑 制作用；Cu2+、Ag+对该酶的抑制机理表现为竞争性类型，Hg2+的抑制机理表现 为非竞争性类型。其抑制常数(KI)分别为 10.78mmol/L，0.065mol/L 和 83.1mol/L。有机溶剂对酶活力的影响表明甲醇、乙醇、丙醇、乙二醇、丙二 醇、丙三醇对酶基本没有影响。甲醛对酶也都具有强烈的抑制作用，其半抑制 浓度(IC50)分别为 81.25mmol/L。甲醛的抑制机理表现为竞争性类型，其抑制 常数(KI)为 30mmol/L。变性剂对酶活力的影响：EDTA 对酶基本上没有影响，脲 对该酶有轻微的抑制作用。盐酸胍、SDS 对酶有强烈的抑制作用，其抑制机理 表现为竞争性类型，其抑制常数(KI)分别为 1.75、57.15mmol/L。正文内容正文内容葡萄糖氧化酶(GlucoseOxidase，EC1.1.3.4，简称 GOD)在食品、医药及生 物等领域有着广泛的应用。以尼崎青霉菌(Penicilliumamagasakiense)为材料， 采用发酵生产葡萄糖氧化酶，探讨不同时间、温度、转速、Ca2+、吐温 80 等对 菌丝体和发酵液产酶的影响。24、200rpm、发酵六天、0.3mol/L 的 Ca2+、3的吐温 80 的条件下，菌丝体和发酵液中总酶活力达到最大。发酵 6 天后，离心得菌丝体经破壁、缓冲液抽提，获得胞内葡萄糖氧化酶的粗酶液； 发酵液即为胞外葡萄糖氧化酶的粗酶液。胞外葡萄糖氧化酶粗酶液浓缩后，采 用 DEAE-32 离子交换柱层析、SephacrylS-200 分子筛凝胶过滤柱层析纯化，得 到比活力为比活力达 472U/mg，纯化了 29.7 倍的的电泳单一纯的酶制剂，该酶 的亚基分子量约为 75kD。 该酶催化化葡萄糖反应的最适 pH 值为 5.6，最适 温度 40，在 pH7.0，37条件下测得动力学，米氏常数 Km 值为 122.6mmol/L，Vm 为 25.52mol/(Lmin)。酶的热稳定性研究表明：该酶在 pH5.58.5 区间和在温度低于 50下稳定。化学修饰剂对酶活力的影响表明咪 唑基、吲哚基、精氨酸胍基是该酶的活性功能基团，而蛋白质分子中巯基、二 硫键、赖氨酸的 -氨基、蛋氨酸侧链的硫醚基和丝氨酸残基与酶活力无关。 溴代乙酸(BrAc)、NBS 的抑制机理为非竞争性类型，而乙酰丙酮其抑制机理表 现为竞争性类型。它们的抑制常数分别为 26.5、19.2、7.35mmol/L。金属离子 对酶活力的影响表明金属离子(Li+、Na+、K+、Ca2+、Mn2+)对酶活力也没有影 响。Al3+和 Zn2+对 GOD 具有轻微的激活作用：Ba2+、Co2+、Cd2+对酶有轻微抑 制作用；Cu2+、Ag+对该酶的抑制机理表现为竞争性类型，Hg2+的抑制机理表现 为非竞争性类型。其抑制常数(KI)分别为 10.78mmol/L，0.065mol/L 和 83.1mol/L。有机溶剂对酶活力的影响表明甲醇、乙醇、丙醇、乙二醇、丙二 醇、丙三醇对酶基本没有影响。甲醛对酶也都具有强烈的抑制作用，其半抑制 浓度(IC50)分别为 81.25mmol/L。甲醛的抑制机理表现为竞争性类型，其抑制 常数(KI)为 30mmol/L。变性剂对酶活力的影响：EDTA 对酶基本上没有影响，脲 对该酶有轻微的抑制作用。盐酸胍、SDS 对酶有强烈的抑制作用，其抑制机理 表现为竞争性类型，其抑制常数(KI)分别为 1.75、57.15mmol/L。 葡萄糖氧化酶(GlucoseOxidase，EC1.1.3.4，简称 GOD)在食品、医药及生物等 领域有着广泛的应用。以尼崎青霉菌(Penicilliumamagasakiense)为材料，采 用发酵生产葡萄糖氧化酶，探讨不同时间、温度、转速、Ca2+、吐温 80 等对菌 丝体和发酵液产酶的影响。24、200rpm、发酵六天、0.3mol/L 的 Ca2+、3 的吐温 80 的条件下，菌丝体和发酵液中总酶活力达到最大。发酵 6 天后，离心 得菌丝体经破壁、缓冲液抽提，获得胞内葡萄糖氧化酶的粗酶液；发酵液即为 胞外葡萄糖氧化酶的粗酶液。胞外葡萄糖氧化酶粗酶液浓缩后，采用 DEAE-32 离子交换柱层析、SephacrylS-200 分子筛凝胶过滤柱层析纯化，得到比活力为 比活力达 472U/mg，纯化了 29.7 倍的的电泳单一纯的酶制剂，该酶的亚基分子 量约为 75kD。 该酶催化化葡萄糖反应的最适 pH 值为 5.6，最适温度 40， 在 pH7.0，37条件下测得动力学，米氏常数 Km 值为 122.6mmol/L，Vm 为 25.52mol/(Lmin)。酶的热稳定性研究表明：该酶在 pH5.58.5 区间和在 温度低于 50下稳定。化学修饰剂对酶活力的影响表明咪唑基、吲哚基、精氨 酸胍基是该酶的活性功能基团，而蛋白质分子中巯基、二硫键、赖氨酸的 - 氨基、蛋氨酸侧链的硫醚基和丝氨酸残基与酶活力无关。溴代乙酸(BrAc)、NBS的抑制机理为非竞争性类型，而乙酰丙酮其抑制机理表现为竞争性类型。它们 的抑制常数分别为 26.5、19.2、7.35mmol/L。金属离子对酶活力的影响表明金 属离子(Li+、Na+、K+、Ca2+、Mn2+)对酶活力也没有影响。Al3+和 Zn2+对 GOD 具有轻微的激活作用：Ba2+、Co2+、Cd2+对酶有轻微抑制作用；Cu2+、Ag+对该 酶的抑制机理表现为竞争性类型，Hg2+的抑制机理表现为非竞争性类型。其抑 制常数(KI)分别为 10.78mmol/L，0.065mol/L 和 83.1mol/L。有机溶剂 对酶活力的影响表明甲醇、乙醇、丙醇、乙二醇、丙二醇、丙三醇对酶基本没 有影响。甲醛对酶也都具有强烈的抑制作用，其半抑制浓度(IC50)分别为 81.25mmol/L。甲醛的抑制机理表现为竞争性类型，其抑制常数(KI)为 30mmol/L。变性剂对酶活力的影响：EDTA 对酶基本上没有影响，脲对该酶有轻 微的抑制作用。盐酸胍、SDS 对酶有强烈的抑制作用，其抑制机理表现为竞争 性类型，其抑制常数(KI)分别为 1.75、57.15mmol/L。 葡萄糖氧化酶(GlucoseOxidase，EC1.1.3.4，简称 GOD)在食品、医药及生物等 领域有着广泛的应用。以尼崎青霉菌(Penicilliumamagasakiense)为材料，采 用发酵生产葡萄糖氧化酶，探讨不同时间、温度、转速、Ca2+、吐温 80 等对菌 丝体和发酵液产酶的影响。24、200rpm、发酵六天、0.3mol/L 的 Ca2+、3 的吐温 80 的条件下，菌丝体和发酵液中总酶活力达到最大。发酵 6 天后，离心 得菌丝体经破壁、缓冲液抽提，获得胞内葡萄糖氧化酶的粗酶液；发酵液即为 胞外葡萄糖氧化酶的粗酶液。胞外葡萄糖氧化酶粗酶液浓缩后，采用 DEAE-32 离子交换柱层析、SephacrylS-200 分子筛凝胶过滤柱层析纯化，得到比活力为 比活力达 472U/mg，纯化了 29.7 倍的的电泳单一纯的酶制剂，该酶的亚基分子 量约为 75kD。 该酶催化化葡萄糖反应的最适 pH 值为 5.6，最适温度 40， 在 pH7.0，37条件下测得动力学，米氏常数 Km 值为 122.6mmol/L，Vm 为 25.52mol/(Lmin)。酶的热稳定性研究表明：该酶在 pH5.58.5 区间和在 温度低于 50下稳定。化学修饰剂对酶活力的影响表明咪唑基、吲哚基、精氨 酸胍基是该酶的活性功能基团，而蛋白质分子中巯基、二硫键、赖氨酸的 - 氨基、蛋氨酸侧链的硫醚基和丝氨酸残基与酶活力无关。溴代乙酸(BrAc)、NBS 的抑制机理为非竞争性类型，而乙酰丙酮其抑制机理表现为竞争性类型。它们 的抑制常数分别为 26.5、19.2、7.35mmol/L。金属离子对酶活力的影响表明金 属离子(Li+、Na+、K+、Ca2+、Mn2+)对酶活力也没有影响。Al3+和 Zn2+对 GOD 具有轻微的激活作用：Ba2+、Co2+、Cd2+对酶有轻微抑制作用；Cu2+、Ag+对该 酶的抑制机理表现为竞争性类型，Hg2+的抑制机理表现为非竞争性类型。其抑 制常数(KI)分别为 10.78mmol/L，0.065mol/L 和 83.1mol/L。有机溶剂 对酶活力的影响表明甲醇、乙醇、丙醇、乙二醇、丙二醇、丙三醇对酶基本没 有影响。甲醛对酶也都具有强烈的抑制作用，其半抑制浓度(IC50)分别为 81.25mmol/L。甲醛的抑制机理表现为竞争性类型，其抑制常数(KI)为 30mmol/L。变性剂对酶活力的影响：EDTA 对酶基本上没有影响，脲对该酶有轻 微的抑制作用。盐酸胍、SDS 对酶有强烈的抑制作用，其抑制机理表现为竞争 性类型，其抑制常数(KI)分别为 1.75、57.15mmol/L。 葡萄糖氧化酶(GlucoseOxidase，EC1.1.3.4，简称 GOD)在食品、医药及生物等 领域有着广泛的应用。以尼崎青霉菌(Penicilliumamagasakiense)为材料，采 用发酵生产葡萄糖氧化酶，探讨不同时间、温度、转速、Ca2+、吐温 80 等对菌 丝体和发酵液产酶的影响。24、200rpm、发酵六天、0.3mol/L 的 Ca2+、3 的吐温 80 的条件下，菌丝体和发酵液中总酶活力达到最大。发酵 6 天后，离心得菌丝体经破壁、缓冲液抽提，获得胞内葡萄糖氧化酶的粗酶液；发酵液即为 胞外葡萄糖氧化酶的粗酶液。胞外葡萄糖氧化酶粗酶液浓缩后，采用 DEAE-32 离子交换柱层析、SephacrylS-2