植物病理学专业优秀论文植物病理学专业优秀论文 红掌炭疽病病原的鉴定、分子检测及群红掌炭疽病病原的鉴定、分子检测及群体遗传多样性研究体遗传多样性研究关键词：红掌炭疽病关键词：红掌炭疽病 胶孢炭疽菌胶孢炭疽菌 毁灭炭疽菌毁灭炭疽菌 植物病害植物病害 遗传多样性遗传多样性摘要：本文采用形态学和分子生物学两种方法对红掌炭疽病的病原进行了鉴定； 并对红掌炭疽菌的分子检测进行了研究；同时建立了毁灭炭疽菌的 RAPD-PCR 和 ISSR-PCR 的最佳反应体系，对红掌上的 5 个毁灭炭疽菌地理群体和 1 个胶孢 炭疽菌地理群体进行了 RAPD 和 ISSR 分析。 红掌炭疽菌的收集与鉴定：从广 州、扬州、南京等地采集红掌炭疽菌，在经单孢分离得到的炭疽菌中，存在形 态差异明显的两个群体。每个群体各选取 2 个代表菌株，进行形态特征，致病 性，寄主范围鉴定及核糖体 DNA-ITS 序列分析。结果表明：红掌上有两种致病 菌，胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)和毁灭炭疽菌 (Colletotrichum destructivum)，后者是首次报道在红掌上致病，且发现为优 势种；两者可单独侵染，也可复合侵染，都具有潜伏侵染的特性。 红掌炭疽 菌的分子检测：根据 Colletotrichum 33 个种的核糖体转录间隔区(ITs)序列差 异设计的两对种特异性引物 E1/E2，F1/ITS4，可以分别特异地从红掌上的胶孢 炭疽菌和毁灭炭疽菌菌株中扩增到一条 329 bp 和 486 bp 的条带，而从其它供 试菌株中不能扩增出该条带。这两个检测体系对纯基因组 DNA 的扩增灵敏度均 达到 10pg；将这两对引物分别与 ITS 区通用引物进行套式 PCR 后检测灵敏度菌 均至少可提高 10000 倍；当 1g 土中达到 200 个分生孢子均可被检测出；进一步 利用这两个检测体系对携带病原菌的灌溉水、发病组织进行检测，均能快速稳 定地检测出病原菌。 毁灭炭疽菌基因组 RAPD，ISSR-PCR 体系的建立：对影 响 PCR 反应的主要因子：Mglt;#39;2+gt;、dNTP、Taq 酶、引 物浓度进行优化，建立起适合于毁灭炭疽菌基因组 DNA 的 RAPD 和 ISSR 反应体 系。RAPD 反应体系(25l)：Mglt;#39;2+gt;浓度 2.5mmol/L，dNTP 浓度 200mol/L，Taq 酶用量 1U，引物浓度 1mol/L。ISSR 反应体系(25l)为：Mglt;#39;2+gt;浓度 2mmol/L，dNTP 浓 度 150mol/L，Taq 酶用量 0.5U，引物浓度 1.25mol/L。 炭疽菌基因组 RAPD 和 ISSR 指纹图谱分析：采用 RAPD 和 ISSR 分析技术对来自于广州、南京 等地红掌上的五个毁灭炭疽菌地理群体和来自广州红掌上的一个胶孢炭疽菌地 理群体的 DNA 指纹图谱进行了分析。结果表明：11 条 RAPD 引物共扩增出 155 条条带，其中多态性条带比例为 96.13而 10 条 ISSR 引物扩增出 101 条条带， 多态性条带比例为 98.02。无论是 RAPD 还是 ISSR 分析都表明：六个地理群 体中，广州花都的胶孢炭疽群体遗传变异最大，群体遗传多样性最为丰富，其 次则以广州花都的毁灭炭疽群体遗传变异最大；六个地理群体中，广州花都的 毁灭炭疽菌群体与广州番禺的毁灭炭疽菌群体遗传相似性最高，而广州花都的 胶孢炭疽菌群体遗传距离最远。正文内容正文内容本文采用形态学和分子生物学两种方法对红掌炭疽病的病原进行了鉴定； 并对红掌炭疽菌的分子检测进行了研究；同时建立了毁灭炭疽菌的 RAPD-PCR 和 ISSR-PCR 的最佳反应体系，对红掌上的 5 个毁灭炭疽菌地理群体和 1 个胶孢 炭疽菌地理群体进行了 RAPD 和 ISSR 分析。 红掌炭疽菌的收集与鉴定：从广 州、扬州、南京等地采集红掌炭疽菌，在经单孢分离得到的炭疽菌中，存在形 态差异明显的两个群体。每个群体各选取 2 个代表菌株，进行形态特征，致病 性，寄主范围鉴定及核糖体 DNA-ITS 序列分析。结果表明：红掌上有两种致病 菌，胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)和毁灭炭疽菌 (Colletotrichum destructivum)，后者是首次报道在红掌上致病，且发现为优 势种；两者可单独侵染，也可复合侵染，都具有潜伏侵染的特性。 红掌炭疽 菌的分子检测：根据 Colletotrichum 33 个种的核糖体转录间隔区(ITs)序列差 异设计的两对种特异性引物 E1/E2，F1/ITS4，可以分别特异地从红掌上的胶孢 炭疽菌和毁灭炭疽菌菌株中扩增到一条 329 bp 和 486 bp 的条带，而从其它供 试菌株中不能扩增出该条带。这两个检测体系对纯基因组 DNA 的扩增灵敏度均 达到 10pg；将这两对引物分别与 ITS 区通用引物进行套式 PCR 后检测灵敏度菌 均至少可提高 10000 倍；当 1g 土中达到 200 个分生孢子均可被检测出；进一步 利用这两个检测体系对携带病原菌的灌溉水、发病组织进行检测，均能快速稳 定地检测出病原菌。 毁灭炭疽菌基因组 RAPD，ISSR-PCR 体系的建立：对影 响 PCR 反应的主要因子：Mglt;#39;2+gt;、dNTP、Taq 酶、引 物浓度进行优化，建立起适合于毁灭炭疽菌基因组 DNA 的 RAPD 和 ISSR 反应体 系。RAPD 反应体系(25l)：Mglt;#39;2+gt;浓度 2.5mmol/L，dNTP 浓度 200mol/L，Taq 酶用量 1U，引物浓度 1mol/L。ISSR 反应体系(25l)为：Mglt;#39;2+gt;浓度 2mmol/L，dNTP 浓 度 150mol/L，Taq 酶用量 0.5U，引物浓度 1.25mol/L。 炭疽菌基因组 RAPD 和 ISSR 指纹图谱分析：采用 RAPD 和 ISSR 分析技术对来自于广州、南京 等地红掌上的五个毁灭炭疽菌地理群体和来自广州红掌上的一个胶孢炭疽菌地 理群体的 DNA 指纹图谱进行了分析。结果表明：11 条 RAPD 引物共扩增出 155 条条带，其中多态性条带比例为 96.13而 10 条 ISSR 引物扩增出 101 条条带， 多态性条带比例为 98.02。无论是 RAPD 还是 ISSR 分析都表明：六个地理群 体中，广州花都的胶孢炭疽群体遗传变异最大，群体遗传多样性最为丰富，其 次则以广州花都的毁灭炭疽群体遗传变异最大；六个地理群体中，广州花都的 毁灭炭疽菌群体与广州番禺的毁灭炭疽菌群体遗传相似性最高，而广州花都的 胶孢炭疽菌群体遗传距离最远。 本文采用形态学和分子生物学两种方法对红掌炭疽病的病原进行了鉴定；并对 红掌炭疽菌的分子检测进行了研究；同时建立了毁灭炭疽菌的 RAPD-PCR 和 ISSR-PCR 的最佳反应体系，对红掌上的 5 个毁灭炭疽菌地理群体和 1 个胶孢炭 疽菌地理群体进行了 RAPD 和 ISSR 分析。 红掌炭疽菌的收集与鉴定：从广州、 扬州、南京等地采集红掌炭疽菌，在经单孢分离得到的炭疽菌中，存在形态差 异明显的两个群体。每个群体各选取 2 个代表菌株，进行形态特征，致病性， 寄主范围鉴定及核糖体 DNA-ITS 序列分析。结果表明：红掌上有两种致病菌， 胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)和毁灭炭疽菌(Colletotrichum destructivum)，后者是首次报道在红掌上致病，且发现为优势种；两者可单独侵染，也可复合侵染，都具有潜伏侵染的特性。 红掌炭疽菌的分子检测：根 据 Colletotrichum 33 个种的核糖体转录间隔区(ITs)序列差异设计的两对种特 异性引物 E1/E2，F1/ITS4，可以分别特异地从红掌上的胶孢炭疽菌和毁灭炭疽 菌菌株中扩增到一条 329 bp 和 486 bp 的条带，而从其它供试菌株中不能扩增 出该条带。这两个检测体系对纯基因组 DNA 的扩增灵敏度均达到 10pg；将这两 对引物分别与 ITS 区通用引物进行套式 PCR 后检测灵敏度菌均至少可提高 10000 倍；当 1g 土中达到 200 个分生孢子均可被检测出；进一步利用这两个检 测体系对携带病原菌的灌溉水、发病组织进行检测，均能快速稳定地检测出病 原菌。 毁灭炭疽菌基因组 RAPD，ISSR-PCR 体系的建立：对影响 PCR 反应的 主要因子：Mglt;#39;2+gt;、dNTP、Taq 酶、引物浓度进行优 化，建立起适合于毁灭炭疽菌基因组 DNA 的 RAPD 和 ISSR 反应体系。RAPD 反应 体系(25l)：Mglt;#39;2+gt;浓度 2.5mmol/L，dNTP 浓度 200mol/L，Taq 酶用量 1U，引物浓度 1mol/L。ISSR 反应体系(25l)为： Mglt;#39;2+gt;浓度 2mmol/L，dNTP 浓度 150mol/L，Taq 酶 用量 0.5U，引物浓度 1.25mol/L。 炭疽菌基因组 RAPD 和 ISSR 指纹图谱分 析：采用 RAPD 和 ISSR 分析技术对来自于广州、南京等地红掌上的五个毁灭炭 疽菌地理群体和来自广州红掌上的一个胶孢炭疽菌地理群体的 DNA 指纹图谱进 行了分析。结果表明：11 条 RAPD 引物共扩增出 155 条条带，其中多态性条带 比例为 96.13而 10 条 ISSR 引物扩增出 101 条条带，多态性条带比例为 98.02。无论是 RAPD 还是 ISSR 分析都表明：六个地理群体中，广州花都的胶 孢炭疽群体遗传变异最大，群体遗传多样性最为丰富，其次则以广州花都的毁 灭炭疽群体遗传变异最大；六个地理群体中，广州花都的毁灭炭疽菌群体与广 州番禺的毁灭炭疽菌群体遗传相似性最高，而广州花都的胶孢炭疽菌群体遗传 距离最远。 本文采用形态学和分子生物学两种方法对红掌炭疽病的病原进行了鉴定；并对 红掌炭疽菌的分子检测进行了研究；同时建立了毁灭炭疽菌的 RAPD-PCR 和 ISSR-PCR 的最佳反应体系，对红掌上的 5 个毁灭炭疽菌地理群体和 1 个胶孢炭 疽菌地理群体进行了 RAPD 和 ISSR 分析。 红掌炭疽菌的收集与鉴定：从广州、 扬州、南京等地采集红掌炭疽菌，在经单孢分离得到的炭疽菌中，存在形态差 异明显的两个群体。每个群体各选取 2 个代表菌株，进行形态特征，致病性， 寄主范围鉴定及核糖体 DNA-ITS 序列分析。结果表明：红掌上有两种致病菌， 胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)和毁灭炭疽菌(Colletotrichum destructivum)，后者是首次报道在红掌上致病，且发现为优势种；两者可单独 侵染，也可复合侵染，都具有潜伏侵染的特性。 红掌炭疽菌的分子检测：根 据 Colletotrichum 33 个种的核糖体转录间隔区(ITs)序列差异设计的两对种特 异性引物 E1/E2，F1/ITS4，可以分别特异地从红掌上的胶孢炭疽菌和毁灭炭疽 菌菌株中扩增到一条 329 bp 和 486 bp 的条带，而从其它供试菌株中不能扩增 出该条带。这两个检测体系对纯基因组 DNA 的扩增灵敏度均达到 10pg；将这两 对引物分别与 ITS 区通用引物进行套式 PCR 后检测灵敏度菌均至少可提高 10000 倍；当 1g 土中达到 200 个分生孢子均可被检测出；进一步利用这两个检 测体系对携带病原菌的灌溉水、发病组织进行检测，均能快速稳定地检测出病 原菌。 毁灭炭疽菌基因组 RAPD，ISSR-PCR 体系的建立：对影响 PCR 反应的 主要因子：Mglt;#39