病理学与病理生理学专业毕业论文病理学与病理生理学专业毕业论文 精品论文精品论文 胃癌相关生物标胃癌相关生物标志物的临床病理研究志物的临床病理研究关键词：胃癌关键词：胃癌 生物标志物生物标志物 临床病理临床病理 细胞培养细胞培养 肿瘤浸润肿瘤浸润 癌旁组织癌旁组织摘要：目的： 研究生物标志物 CD133、cyclinBl、DNA- PKcs、EGFR、FHIT、Id2、Ki-67、LRP16 及 NF-B 在胃癌组织中的表达并探讨 其与肿瘤生物学特性及患者术后生存时间(即总体生存时间)的关系。寻找与胃 癌预后相关的新的分子标记物，以期为临床治疗提供更多的信息，减少复发与 转移。 方法： (1)采集解放军总医院病理科 1998-2001 年间实施手术切除 并有完整随访资料的胃癌病例 336 例，手工制成组织芯片 11 块，进而采用 PV6000 二步法检测胃癌相关标志物 CD133、cyclinBl、DNA- PKcs、EGFR、FHIT、Id2、Ki-67、LRP16 及 NF-B 在胃癌组织中的表达，分析 其与临床病理特征及患者预后的关系。 (2)HER-2 基因扩增的检测：运用荧 光原位杂交(fluorescence in situ hybridization，FISH)技术，用 HER-2 探 针和 17 号染色体着丝粒特异性探针，检测 72 例胃癌患者 HER-2 基因扩增情况， 分析其与 HER-2 蛋白表达的关系。 (3)胃癌细胞的培养及荧光免疫细胞化学 染色：采用细胞培养技术，培养胃癌 SGC-7901、MGC-803 细胞，经 Hoechst33342、荧光免疫细胞化学染色等方法，在荧光显微镜下检测 SP(sidepopulation)细胞的比例，比较 ABCG2、CD133、CK20、cyclinBl 及 DNA-PKcs 在 SP 细胞与非 SP 细胞中表达的差异。 结果： (1) CD133、cyclinBl、EGFR、Id2、Ki-67、LRP16 及 NF-B 的表达均随肿瘤浸润 程度加深而增高(P0.05)，而 DNA-PKcs、FHIT 的表达则随浸润程度加深而降 低(P0.05)；CD133、cyclinBl、EGFR、Id2、Ki-67 及 NF-B 的表达随淋巴 结转移数目增多而增高(P0.05)，而 DNA-PKcs 的表达则随淋巴结转移数目增 多而降低(P=0.031)；CD133、cyclinBl、Id2、Ki-67 及 NF-B 在有腹腔及远 处转移组的表达均明显高于无转移组(P0.05)，而 DNA-PKcs 在有腹腔及远处 转移组的表达则低于无转移组(P=0.008)；CD133、cyclinBl、EGFR、Id2、Ki- 67 及 NF-B 的表达均随 TNM 分期递增而增高(P0.05)，而 DNA-PKcs、FHIT 的表达则随 TNM 分期递增而降低(P0.05)； CD133、cyclinBl、EGFR、Id2、Ki-67 及 NF-B 的表达随肿瘤分化程度的降低 而增高(P0.05)，而 FHIT 的表达则随肿瘤分化程度的降低而降低(P=0.006)， DNA-PKcs 和 LRP16 在中分化胃癌中的表达高于高、低分化胃癌(P0.05)。 (2)CD133、cyclinBl、EGFR、Id2、Ki-67、LRP16 及 NF-B 在癌组织中的表达 明显高于癌旁正常组织(P0.05)；而 FHIT 在癌组织中的表达明显低于癌旁正 常组织(P=0.005)；DNA-PKcs 在癌和正常组织中的表达无显著性差异(P=0.723)。(3)单因素术后生存分析显示：CD133、cyclinBl、DNA- PKcs、EGFR、FHIT、Id2、Ki-67、NF-B、发病年龄、肿瘤大小、分化程度、 组织学类型、浸润深度、淋巴结转移、腹腔及远处转移、TNM 分期和术后是否 进行放化疗(chemoradiotherapy，CRT)这 17 种因素与患者的术后生存时间相关 (P0.05)。 (4)Cox 多因素生存分析显示：CD133、EGFR、Id2、Ki-67 阴性 表达、DNA-PKcs 阳性表达、患者年轻、肿瘤体积小、管状腺癌及未发生淋巴结 及远处转移、有 CRT 的患者术后生存时间长，预后较好(P0.05)。 (5)在随机抽取的 72 例胃癌组织中检测 HER-2 蛋白的表达及 HER-2 基因的扩增，HER-2 蛋白表达仅 7 例(9.72)，其中 HER-2 基因扩增 2 例(2.78)；另收集 HER-2 阳性表达的胃癌 19 例，其中 7 例(36.84)为 HER-2 基因扩增阳性。HER-2 基 因扩增与 HER-2 蛋白表达无关(P=0.636)。 (6)胃癌 SGC-7901 细胞株经 Hoechst33342 和荧光免疫细胞化学染色显示：SP 细胞的比例为 3.8；SP 细胞 中 ABCG2 和 CK20 的阳性率显著低于非 SP 细胞(P0.05)；CD133、cyclinBl 和 DNA-PKcs 在 SP 细胞和非 SP 细胞中的表达无显著性差异(P0.05)。 (7)胃 癌 MGC-803 细胞株经 Hoechst33342 和荧光免疫细胞化学染色显示：SP 细胞的 比例为 2.9；SP 细胞中 cyclinBl 的阳性率显著高于非 SP 细胞(P0.05)；SP 细胞中 ABCG2、CD133、CK20 及 DNA-PKcs 的阳性率显著低于非 SP 细胞(P0.05)。结论： (1)CD133、cyclinBl、DNA-PKcs、EGFR、FHIT、Id2、Ki-67 及 NF-B 在胃癌的表达情况与患者的术后生存时间相关。 (2)CD133、DNA- PKcs、EGFR、Id2、Ki-67、患者年龄、肿瘤大小、组织学类型、淋巴结转移、 腹腔及远处转移及 CRT 是胃癌术后生存时间的独立预后因子。 (3) CD133、cyclinBl、EGFR、Id2、Ki-67、LRP16 及 NF- 在胃癌组织中的表达明 显高于癌旁正常组织，而 FHIT 在癌组织中的表达明显低于癌旁正常组织，这些 标志物可能在胃癌的发生发展中起着重要作用。 (4)在随机抽取的胃癌组织 中 HER-2 蛋白表达率及 HER-2 基因扩增率，分别为 9.72和 2.78；在收集的 HER-2 阳性表达的胃癌中 HER-2 基因扩增率为 36.84。胃癌 HER-2 基因扩增与 HER-2 蛋白表达无关。 (5)胃癌 SGC-7901 和 MGC-803 细胞株中 SP 细胞的比 例分别为 3.8和 2.9；CK20-/cyclinBl+或 CD133+可能是胃癌癌干细胞的特 异性分子标志物，而单纯 ABCG2、CD133、cyclinBl 及 DNA-PKcs 在鉴定胃癌癌 干细胞时无特异性，此初步结果需进一步探讨。正文内容正文内容目的： 研究生物标志物 CD133、cyclinBl、DNA- PKcs、EGFR、FHIT、Id2、Ki-67、LRP16 及 NF-B 在胃癌组织中的表达并探讨 其与肿瘤生物学特性及患者术后生存时间(即总体生存时间)的关系。寻找与胃 癌预后相关的新的分子标记物，以期为临床治疗提供更多的信息，减少复发与 转移。 方法： (1)采集解放军总医院病理科 1998-2001 年间实施手术切除 并有完整随访资料的胃癌病例 336 例，手工制成组织芯片 11 块，进而采用 PV6000 二步法检测胃癌相关标志物 CD133、cyclinBl、DNA- PKcs、EGFR、FHIT、Id2、Ki-67、LRP16 及 NF-B 在胃癌组织中的表达，分析 其与临床病理特征及患者预后的关系。 (2)HER-2 基因扩增的检测：运用荧 光原位杂交(fluorescence in situ hybridization，FISH)技术，用 HER-2 探 针和 17 号染色体着丝粒特异性探针，检测 72 例胃癌患者 HER-2 基因扩增情况， 分析其与 HER-2 蛋白表达的关系。 (3)胃癌细胞的培养及荧光免疫细胞化学 染色：采用细胞培养技术，培养胃癌 SGC-7901、MGC-803 细胞，经 Hoechst33342、荧光免疫细胞化学染色等方法，在荧光显微镜下检测 SP(sidepopulation)细胞的比例，比较 ABCG2、CD133、CK20、cyclinBl 及 DNA-PKcs 在 SP 细胞与非 SP 细胞中表达的差异。 结果： (1) CD133、cyclinBl、EGFR、Id2、Ki-67、LRP16 及 NF-B 的表达均随肿瘤浸润 程度加深而增高(P0.05)，而 DNA-PKcs、FHIT 的表达则随浸润程度加深而降 低(P0.05)；CD133、cyclinBl、EGFR、Id2、Ki-67 及 NF-B 的表达随淋巴 结转移数目增多而增高(P0.05)，而 DNA-PKcs 的表达则随淋巴结转移数目增 多而降低(P=0.031)；CD133、cyclinBl、Id2、Ki-67 及 NF-B 在有腹腔及远 处转移组的表达均明显高于无转移组(P0.05)，而 DNA-PKcs 在有腹腔及远处 转移组的表达则低于无转移组(P=0.008)；CD133、cyclinBl、EGFR、Id2、Ki- 67 及 NF-B 的表达均随 TNM 分期递增而增高(P0.05)，而 DNA-PKcs、FHIT 的表达则随 TNM 分期递增而降低(P0.05)； CD133、cyclinBl、EGFR、Id2、Ki-67 及 NF-B 的表达随肿瘤分化程度的降低 而增高(P0.05)，而 FHIT 的表达则随肿瘤分化程度的降低而降低(P=0.006)， DNA-PKcs 和 LRP16 在中分化胃癌中的表达高于高、低分化胃癌(P0.05)。 (2)CD133、cyclinBl、EGFR、Id2、Ki-67、LRP16 及 NF-B 在癌组织中的表达 明显高于癌旁正常组织(P0.05)；而 FHIT 在癌组织中的表达明显低于癌旁正 常组织(P=0.005)；DNA-PKcs 在癌和正常组织中的表达无显著性差异(P=0.723)。(3)单因素术后生存分析显示：CD133、cyclinBl、DNA- PKcs、EGFR、FHIT、Id2、Ki-67、NF-B、发病年龄、肿瘤大小、分化程度、 组织学类型、浸润深度、淋巴结转移、腹腔及远处转移、TNM 分期和术后是否 进行放化疗(chemoradiotherapy，CRT)这 17 种因素与患者的术后生存时间相关 (P0.05)。 (4)Cox 多因素生存分析显示：CD133、EGFR、Id2、Ki-67 阴性 表达、DNA-PKcs 阳性表达、患者年轻、肿瘤体积小、管状腺癌及未发生淋巴结 及远处转移、有 CRT 的患者术后生存时间长，预后较好(P0.05)。 (5)在随 机抽取的 72 例胃癌组织中检测 HER-2 蛋白的表达及 HER-2 基因的扩增，HER-2 蛋白表达仅 7 例(9.72)，其中 HER-2 基因扩增 2 例(2.78)；另收集 HER-2 阳性表达的胃癌 19 例，其中 7 例(36.84)为 HER-2 基因扩增阳性。HER-2 基 因扩增与 HER-2 蛋白表达无关(P=0.636)。 (6)胃癌 SGC-7901 细胞株经Hoechst33342 和荧光免疫细胞化学染色显示：SP 细胞的比例为 3.8；SP 细胞 中 ABCG2 和 CK20 的阳性率显著低于非 SP 细胞(P0.05)；CD133、cy