1酸枣仁提取物急性毒性实验研究【摘要】 目的观察酸枣仁醇提取物的急性毒性反应。方法小鼠尾静脉注射不同剂量的酸枣仁醇提取物，连续观察 14 d，记录小鼠的急性毒性反应，并计算 LD50 及 LD50 95%可信限；小鼠灌胃给药，测定一次给予酸枣仁醇提取物的安全剂量。结果静脉注射酸枣仁醇提取物后，部分小鼠出现中毒反应并死亡，测得 LD50 为27.5 gkg-1，LD50 95%可信限为 25.130.1 gkg-1，死亡动物尸检，其主要脏器未见病理改变。14 d 后存活小鼠体重平均增加20.4%，略高于生理盐水组（18.2%） 。小鼠灌胃给药（340 gkg-1，相当于成人一次用量的 326 倍）后，连续观察 14 d，小鼠全部存活，无明显毒性反应，小鼠体重平均增长 17.2%。结论酸枣仁醇提取物毒性很低，临床给药安全可靠。 【关键词】 酸枣仁；急性毒性；半数致死量（LD50）Abstract：ObjectiveTo observe the acute toxic reaction of alcohol-soluble extract of Semen Ziziphi Spinosae(SZS) in mice. MethodsAlcohol-soluble extract of SZS was intravenously injected and observed for consecutive 14 days. The acute toxic reaction was recorded and the LD50 and 95% confidence limit of LD50 were calcucated. By ig 2administration in mice,the acute toxic reaction was observed and the safety dosage was assayed.ResultsAfter intravenous injection ,partial mice showed toxic reaction and death.The LD50 was 27.5 gkg-1，its 95% confidence limit was 25.130.1 gkg-1, its average confidence limit was (27.52.4) gkg-1.After ig administration,all mice survived,and no toxic reaction was shown in observed period.The average rate of its increasing weight was 17.2%.The dosage was 326 gkg-1,equivalent to mens dose by 340 times.ConclusionSZS is safe for clinical administration.Key words：Semen Ziziphi Spinosae(SZS); Acute toxity; Median lethal dose(LD50)酸枣仁为鼠李科植物酸枣 Ziziphus jujuba Mill.var.spinosa (Bunge)Hu ex H.F.chou 的干燥成熟种子，为安神药，归肝、胆、心经。酸枣仁中含有大量的脂肪油及多种氨基酸、皂苷和黄酮等。以往的研究显示，酸枣仁提取物具有明显的镇静、催眠和抗惊厥作用，其中枢抑制作用的有效成分为棘苷和酸枣仁皂苷 A13 。酸枣仁汤和酸枣仁汤加味治疗难治性室性早搏均取得显著疗效4，5 。酸枣仁总皂苷对原发性高血压大鼠呈现明显的降压作用6 。此外，酸枣仁提取物尚能改善心肌缺血和脑缺血，因此，临3床具有很好的应用前景。但文献中对酸枣仁毒性方面的研究较少，本实验采用尾静脉注射和灌胃给药两种方式观察并比较了酸枣仁醇提取物对小鼠的急性毒性。1 材料1.1 药品酸枣仁，产自天津蓟县，2008-03 购自天津中药饮片厂。临用前提取并浓缩至 17 gml-1 备用。1.2 动物昆明健康小鼠，体重（202）g，雌雄兼用。购自天津药物研究院动物室，合格证号为津实动准字第 02 号。2 方法2.1 酸枣仁醇提取物的制备称取粉碎的酸枣仁粉末 500 g(过40 目筛) ，置圆底烧瓶中，加入一定体积的蒸馏水，按提取时间与次数进行水提，抽滤，去除药渣，将所得水提液真空浓缩，再加入一定浓度的乙醇，进行醇沉，静置 24 h，用循环水式真空泵进行抽滤，抽滤两遍，得到透明液体；用旋转蒸发器经减压蒸发，将提取液浓缩至 17 gml-1 备用。2.2 改良寇氏法测定静脉注射酸枣仁醇提取物的 LD507 42.2.1 预实验取小鼠 12 只，雌雄各半，随机分成 3 组，每组4 只。实验前禁食 12 h，自由饮水。将酸枣仁醇提取物备用液用生理盐水稀释成 3 个浓度，每鼠按 20 mlkg-1 进行尾静脉注射。注射后连续观察 72 h，记录小鼠的中毒及死亡情况。如此反复实验，直到找出 0%致死剂量和 100%致死剂量为止。经预实验得出，酸枣仁醇提取物 0%致死剂量为 17 gkg-1，100%致死剂量为 40 gkg-1。根据上述结果确定正式实验分 5 个剂量组，按下式求出剂量比。r=(N-1)Dn/Dm式中 ,r=相邻两组剂量的比值； Dm=100%死亡的剂量；Dn=0%死亡的剂量；N=正式实验所需组数。计算正式实验 r=0.81（符合r=0.650.85 ） 。2.2.2 正式实验取小鼠 72 只，随机分为 6 组，每组 12 只。15 组为受试药物组，6 组为生理盐水对照组。给药前，小鼠禁食12 h，自由饮水。各小鼠尾静脉注射 20 mlkg-1，对照组注射等容量的生理盐水。分组情况及其剂量见表 1。注射后密切观察，第 2天起，每天观察 2 次，连续观察 14 d。记录动物的反应及死亡情况。死亡的动物进行尸检，肉眼观察脏器的变化。未死亡的小鼠继续观5察，14 d 后称量体重，比较体重的变化。2.2.3 计算 LD50 应用改良宼氏法计算。LD50log-1Xm - (p-0.5) ；LD50 的 95%可信限log1(logLD50 1.96 SlogLD50) ；SlogLD50 iPi(1-P)/(n-1)；LD50 的平均可信限LD50（LD50 的 95%可信限的高限 低限）/2。2.3 小鼠灌胃给药测定酸枣仁醇提取物的安全剂量2.3.1 预实验小鼠 12 只，雌雄各半，随机分为 3 组，每组4 只。禁食 12 h 后将最大浓度药液（17 gml-1）按 20 mlkg-1 灌胃，分别为每日 1 次、 2 次和 3 次。给药后密切观察小鼠的反应。第 1 组（Dm）小鼠仅出现活动减少、呼吸急促，未见其他症状及改变；第 2 组小鼠有 1 只死亡，第 3 组全部死亡。故以 17 gml-1为最大浓度，20 mlkg-1 的容量给小鼠灌胃，测定酸枣仁提取物的安全剂量。2.3.2 正式实验取小鼠 40 只，雌雄各半，随机分为 2 组，第1 组为受试药物，浓度为 17 gml-1，第 2 组为生理盐水。各组均以 20 mlkg-1 灌胃给药。密切观察小鼠的反应。第 2 天起每日观察 2 次，连续观察 14 d。记录小鼠的各项反应及有无死亡，记录小鼠每日摄食量，并于第 7 天和第 14 天测定各小鼠的体重，记录小鼠体重的增长情况。63 结果3.1 静脉注射酸枣仁醇提取物测定 LD503.1.1 毒性反应敏感小鼠尾静脉注射受试药后，立即出现兴奋、抖动、呼吸急促、大小便失禁等症，在注射 20 s 后至 1 min 内死亡。对死亡小鼠进行尸检，肉眼观察，小鼠的肝、肾、心脏等脏器未见异常改变。其余小鼠先出现活动减少、呼吸急促、对刺激反应迟钝、嗜睡等现象，但持续十几秒至 1 h 后恢复，其余各项观察指标未见异常。3.1.2 LD50 及 LD50 的可信限通过预实验和正式实验，各剂量组小鼠的死亡分布及 LD50 测定结果见表 1。表 1 酸枣仁醇提取物小鼠静脉注射 LD50 测定（略）3.2 小鼠灌胃给药的安全剂量小鼠灌胃后，各组小鼠均未见死亡。受试药组部分小鼠的表现与静脉注射后相似，出现活动减少，呼吸急促，但仅持续数分钟，其余未见异常。体重平均增长17.2%，小鼠体重的变化见表 2。表 2 酸枣仁提取物灌胃给药后小鼠体重的变化(略)74 讨论文献报道，小鼠灌胃酸枣仁水煎液 150 gkg-1，48 h 内无毒性症状，小鼠腹腔注射酸枣仁水煎液，测得 48 h 内 LD50 为（14.320.0） gkg-18 。本实验中，给小鼠静脉注射酸枣仁醇提取物，LD50 为（27.52.4 ） gkg-1；生存的小鼠仅在注射后的短时间内出现活动减少、呼吸急促、嗜睡等现象，观察期内，小鼠体重增加略多于生理盐水组。而小鼠灌胃 340 gkg-1 后，连续观察 14 d，无一死亡，14 d 后体重增加，平均为 17.2%。给药剂量相当于成人一次用量的 326 倍。以上结果显示，酸枣仁醇提取物的毒性小于文献报道的酸枣仁水煎液的毒性，说明该提取物毒性很低，临床应用安全可靠，具有进一步研究开发价值。【参考文献】1李玉娟，梁鑫淼，肖红斌，等. 生、炒酸枣仁镇静催眠作用及化学成分比较J. 沈阳药科大学学报，2003，20（1）：35.2黄胜英，谢世荣，黄彩云，等. 酸枣仁皂苷的镇静作用研究J. 大连大学学报，2002，23（4）：90.83赵连红，乔卫，许岚. 酸枣仁中生物碱抗惊厥作用的实验研究J. 天津药学，2007，19（1）：4.4李相中，刘维，李敏霞，等. 酸枣仁汤加味治疗良性室性早搏J. 河南中医，2001，21（4）：26.5苗东风，吕宏彦. 中药葛根、酸枣仁制剂治疗多发性室性早搏的效果观察J. 中国地方病防治杂志， 2004，19 （6）：369.6张典，袁秉祥，孙 红. 酸枣仁总皂苷对原发性高血压大鼠的降压作用J. 西安交通大学学报（医学版） ，2003，24 （ 1）：59.7楼宜嘉. 药物毒理学M .北京：人民卫生出版社，2003：150.8沈映君. 中药药理学 M. 北京：人民卫生出版社，2002：783.