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实验一斐林试剂置换法测定还原糖的含量一、实验原理糖类包括多糖、双糖和单糖,其中单糖和某 些双糖具有游离的羰基,称为还原糖,多糖和蔗糖无还原性。利用糖的还原性,与斐林试剂 (氧化剂)中的二价铜离子还原为一价铜,进 行氧化还原反应,而进行测定.非还原糖必须转 化为还原糖,再进行测定。斐林试剂中酒石酸钾钠铜是一种氧化剂,反应的终点可用次甲基蓝作指示剂,在碱性、沸腾环境下还原呈无色。根据斐林试剂完全还原所需的还原糖量,计算出样品还原糖量。二、试剂与材料1、斐林试剂甲 69.3g CuSO4.5H2O 1000ml 50ml/组乙 346g 酒石酸钾钠+100gNaOH 1000ml 50ml/组2、1%次甲基蓝1g次甲基蓝+100ml水/班 棕色瓶保存3、0.2%标准G 2gG105烘干到恒重加水到 1000ml 2000ml/班 4、碱式滴定管5、样品溶液:待测G液样品1:稀释20倍,1000ml /班样品2:稀释50倍,1000ml /班6、电炉三、操作方法1、斐林试剂标定A 取甲液5ml+乙液5ml,(注意:甲液与乙液混 合可生成氧化亚铜沉淀,应将甲液加入乙液, 使开始生成的氧化亚铜沉淀重溶)置于250ml三 角瓶中,加入10ml水,并从滴定管中加入0.2% 的标准G若干毫升(约23ml) 。(量控制在后 滴定时消耗G在0.51.0ml) B 电炉上加热至沸,并保持微沸2分钟,加 2滴1%次甲基蓝溶液,趁沸以每两秒1滴的速 度继续滴加葡萄糖标准溶液用0.2%标准G滴 定至蓝色消失,有红棕色沉淀,溶液清亮为 终点止。记录耗用的G量为V0,必须在1min内 完成。注意:还原的次甲基蓝易被空气中的氧氧化,恢 复成原来的蓝色,所以滴定过程中必须保持溶液 成沸腾状态,并且避免滴定时间过长。 2、定糖预备试验同1法取斐林试剂,加10ml样品液,摇匀于电炉上加热至沸,保持微沸2 分钟,加2滴1%次甲基蓝,用0.2%G滴定 至蓝色消失。记录耗用的G量为V13、样品中还原糖测定同上法吸取斐林试剂加10ml样品液(预先稀释),补加(V0V1)ml水,并从滴定管中预先加入(V1-1)ml 0.2%G,摇匀至电炉上加热至沸,保持2min微沸,加入2滴1%次甲基蓝,继续用G滴定至蓝色消失。记录消耗的标准G体积为V毫升。四、结果计算还原糖含量(以G计) ( g/ml) =(Vo-V) *0.002 *1/10 * n 式中Vo- 斐林试剂标定值,ml V- 样品糖液测定值,ml 0.002- 标准GS液浓度,g/ml10- 样品糖液体积,ml n- 样品稀释倍数 五、注意事项本方法测定的是一类具有还原性质的糖,包 括葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖等,只是结 果用葡萄糖或其他转化糖的方式表示,所以 不能误解为还原糖=葡萄糖或其他糖。但如果已知样品中只含有某一种糖,如乳制品中的 乳糖,则可以认为还原糖=某糖。分别用葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖标准品配制 标准溶液分别滴定等量已标定的费林氏液,所消耗 标准溶液的体积有所不同。证明即便同是还原糖, 在物化性质上仍有所差别,所以还原糖的结果只是 反映样品整体情况,并不完全等于各还原糖含量之 和。如果已知样品只含有某种还原糖,则应以该还 原糖做标准品,结果为该还原糖的含量。如果样品 中还原糖的成分未知,或为多种还原糖的混合物, 则以某种还原糖做标准品,结果以该还原糖计,但 不代表该糖的真实含量。五、分析讨论六、思考题:1、查阅资料还原糖测定检测方 法有哪些?其原理是什么?2、总结本实验方法检测还原糖 应注意哪些事项?
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